怎樣選擇色譜柱及流動相

1、怎樣選擇高效液相色譜柱高效液相色譜柱怎樣選擇色譜柱現(xiàn)代高效液相色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解。中的各組份的極性大小，即極性強弱的組份最先被沖洗岀色譜柱。反相色譜填料常是以硅膠為基礎，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水，緩沖液與甲醇，已腈等混合物。樣品流岀色譜柱的順序是極性較強組合最先被沖岀，而極性弱的組份會在色譜柱上有 更強的保留。二、聚合物填料質(zhì)等樣品的分離非常有效。現(xiàn)在的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。三、其他無機填料用途。如石墨化碳

2、也用于正逐漸成為反相色譜填料。這種填料的分離不同與硅膠基質(zhì)烷基 鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎，不再需其它的表面改性，該柱填料一般比烷基 鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強，石墨化碳可用于分離某些幾何導構(gòu)體，又由 但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強，應用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應用， 度，其重要用途與優(yōu)勢尚在進行中。怎樣選擇填料粒度但不是唯一的因素。如果固定相選擇是正確，但是分離度不夠，那么選擇更小粒度的填料 短的色譜柱，以縮短分析時間，另外，可以采用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使用溫度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色譜柱的壓力、如何保證良好的柱性能與柱壽命名稱別名功能基

3、團正相 反相離子對應用Silica-OHV非極性和中等極性以及非離子性有機化合物。SASC1-(CH3)3V在所有的烷基鍵合相中對非極性化合物保留最弱 ，典型用于中等極性和多官能團化合物.ButylC4-C4H9VV分離肽和蛋白質(zhì)，保留時間比C8 和 C18 短。MOS C8，-C8H17VV中等極性相中對中等化合物，小肽和蛋白質(zhì)，Octyl極性藥族化合物和環(huán)境樣品。ODS C18-C18H37VV烷基鍵合相中對中等極性化合物保留最強。廣泛用于藥物，甾族化合物，脂肪酸和環(huán)境樣品.CPS CN ,Cyano-(CH2)3CNVV對極性化合物有獨特的選擇性，適合應用于正相(propyl分離，當用于

4、反相系統(tǒng)時，其選擇性與C8 和Nitrile)C18 不同，在藥學領域和復雜混合物的分離中應用廣泛。APS NH2-(CH2)3 NH2VV反相中分析糖類和其他極性化合物。弱陰離子交劑 做流動相。正相中與硅膠的選擇性機改性劑不同 , 分析芳香族效果很好。Phenyl-(CH3)C6H5V芳香族化合物Diol-(CH2)2O反相時，分離肽和蛋白質(zhì)。正相時，與硅選擇SCX 強陽離子CH2(CH2OH)2性 相似 , 但極性較弱。-(CH2)2C6H4SO3H-V有機堿。2(Amino Propyl)換 ，陰離子和有機酸則應用緩沖劑和有機改性交換SAX 強陰離子 -(CH2)3N+(CH3)3有機酸

5、，核苷和核苷酸交換二、如何解決色譜柱使用過程中出現(xiàn)的問題問題原因表現(xiàn)不同色譜柱間差異填料、鍵合相不同保留因子（k）,分離因子（a使用期間柱變化柱床破壞柱效（ N）鍵合相丟失保留因子（k）,分離子（a）硅膠基質(zhì)溶解柱效（ N）強保留分堆積堵塞保留因子（k），柱效（N）柱外效應系統(tǒng)差異, 進樣量大、柱效（ N）分離效果變差柱平衡慢柱超載進樣閥與 色譜柱之間、色譜柱與檢測器之間管路太長、檢測器流通池體積大、接頭死體積大等。流速改變溫度改變知化合物加醋酸三乙胺；流動相組分改變保留因子（ k） ,柱效變化很小保留因子（k），分離因子（a）保留因子（ k） ，柱效變化很小重新平衡時間不夠樣品量太大保留因子

6、（ k） ，柱效變化很小保留因子（k）,柱效（N）2進樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大（最佳連接管應20cm,內(nèi)徑為 0.007 ”);。31.防止緩沖溶液和水溶液流動相產(chǎn)生微生物，做到流動相用多少配多少，或在水流動相中加200pp m 的疊氮鈉以抑制細菌成長（一定當心其毒性和潛在的爆炸性）；或在流動相中加20%的有機改性劑，也可抑制微生物生長，有機改性劑還有助于流動相脫氣。3使用緩沖溶液后的色譜柱，應用1520 倍柱體積的不含緩沖劑的同種水 一有機溶劑流動相沖洗色譜柱，后換成 100%有機溶劑儲存。如何選擇保護柱怎樣選擇保護柱，但又不能影響分離分析？這是色譜工作者經(jīng)常提出的一個問題。通

7、常，在選擇保護柱之前首先要考慮的是樣品是否清潔。對于大部分分析工作者來說，一只1cm 長的保護柱，那么就應選擇 2cm 或 3cm 長的保護柱。保護柱越長，自然所裝填的色譜填料就越多，則其越能避免污染物進入分析 色譜柱的機會。當然，隨著保護柱的長度加長，樣品的保留時間會比使用短保護柱長。一般來說，保護 柱的內(nèi)徑與分析色譜柱的內(nèi)徑相同或相當即可。保護柱的填料裝填方式也很重要。目前有薄膜裝填法的 保護柱，使用過程很簡單方便，而且可以在實驗室中進行干裝。但是，其最大的缺點是不經(jīng)濟，特別是 針對中國的具體情況，一次性使用相對費用較高。另外，薄膜裝填法的保護柱所裝填的色譜填料有限，只能提供有限的保護作用

8、；不過也因為所裝填的色譜料較少，保護柱的長度也較短， 所以對分析樣品的 保留時間的影響也很小。 另一種保護柱結(jié)構(gòu)其實質(zhì)是縮短了的色譜分析拄， 設計方式上有直連式、手緊 式或整體式。整體式設計是由色譜的生產(chǎn)廠商直接安裝在色譜分析柱上的，必須與色譜分析柱一同訂貨， 可以非常方便地使用，但不能夠被修改。直連式結(jié)構(gòu)設計可在任何時候有色譜工作者來安裝連接，可以 與任何品牌的色譜分析柱連接使用，而且還可以根據(jù)樣品的相關情況選擇不同的保護柱長度。手上緊即 可。另外從保護柱結(jié)構(gòu)又分為是否可以更換保護柱柱芯。可以降低保護柱的使用成本。大多數(shù)人是根據(jù) 色譜分析柱的填料選擇保護柱的填料，正常情況下可以選擇與分析色譜

9、柱一樣的色譜填料。但是，根據(jù) 實際的分析工作，也可不必與分析色譜柱的填料完全相匹配。對于選擇保護柱的原則是：在滿足分析分離要求的前提條件下，盡可能的選擇較短的保護柱結(jié)構(gòu)，盡可 能選擇對分離樣品小一些保留性的填料。液相色譜流動相的選擇反相色譜的流動相通常以水作基礎溶劑， 再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑， 如甲醇、 乙腈、四氫呋喃等。 極性調(diào)整劑的性質(zhì)及其所占比例對溶質(zhì)的保留值和分離選擇性有顯著影 響。一般情況下，甲醇 - 水系統(tǒng)已能滿足多數(shù)樣品的分離要求，且流動相粘度小、價格低， 是反相色譜最常用的流動相。但 Snyder 則推薦采用乙腈 - 水系統(tǒng)做初始實驗， 因為與甲醇相 比，乙腈的溶劑強度較高且粘度較小，并可滿足在紫外185205nm 處檢測的要求，因此，綜合來看，乙腈 - 水系統(tǒng)要優(yōu)于甲醇 - 水系統(tǒng)。4在分離含極性差別較大的多組分樣品時， 為了使各組分均有合適的 k 值并分離良好， 也需采 用梯度洗脫技術。反相色譜中，如果要在相同的時間內(nèi)分離同一組樣品，甲醇 / 水作為沖洗劑時其沖洗強度配 比與乙腈 /水或四氫呋喃 / 水的沖洗強度配比有如下關系：C 乙腈