野生型斜莖黃芪生物堿成分與營養(yǎng)成分分析及其毒性評價

1、野生型斜莖黃芪生物堿成分與營養(yǎng)成分分析及其毒性評價斜莖黃As（AstragalusadsurgensPall.）為豆科（Leguminosae）黃黃屬（tragalus）草本植物，具有較強生態(tài)適應(yīng)性，在我國，主要分布于西北、東北、華北及四川、云南等省區(qū)。目前，斜莖黃芪主要集中于營養(yǎng)成分和微量元素等方面的研究，對其毒性研究結(jié)果尚不明確，導(dǎo)致其開發(fā)和利用受到限制。本研究通過植物化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試、專項檢測對斜莖黃芪化學(xué)成分進(jìn)行分析；通過薄層色譜分析及氣相-質(zhì)譜聯(lián)用對生物堿成分進(jìn)行測定；通過營養(yǎng)物質(zhì)及礦物質(zhì)元素國家測定標(biāo)準(zhǔn)對營養(yǎng)成分及常量和微量元素的含量進(jìn)行測定；建立斜莖黃芪小鼠亞急性毒性試驗?zāi)Ｐ驮u價

2、其毒性。本研究獲得以下結(jié)果：1.野生型斜莖黃芪化學(xué)成分預(yù)試及生物堿薄層色譜分析采用植物化學(xué)成分系統(tǒng)預(yù)試、氰苷和硝基化合物專項檢測，以斜莖黃芪地上部分干草粉為材料對其化學(xué)成分進(jìn)行分析，同時，冷浸提取得到斜莖黃芪地上部分總浸膏，并對總浸膏分段萃取，得到酸性氯仿部分生物堿和堿性氯仿部分生物堿，采用薄層色譜分析對兩部分生物堿進(jìn)行分析。研究結(jié)果表明斜莖黃芪地上部分含生物堿、黃酮類、醌類、酚類、皂苷、糖類、氨基酸、揮發(fā)油等，不含香豆素類、氰苷和脂肪族硝基化合物；酸性氯仿部分生物堿的提取率為1.3%，堿性氯仿部分生物堿的提取率為0.8%；酸性氯仿部分生物堿最佳展開體系為V（氯仿）：V（甲醇）=15:1,有5

3、個顯色斑點，堿性氯仿部分生物堿最佳展開體系為V（甲醇）：V（氨水）=10:1,有5個顯色斑點。斜莖黃芪地上部分化學(xué)成分較多，生物堿成分主要集中于酸性氯仿部分。2.野生型斜莖黃黃生物堿GC-M分析甲醇分別溶解酸性氯仿部分生物堿和堿性氯仿部分生物堿，采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對斜莖黃芪酸性氯仿部分和堿性氯仿部分生物堿進(jìn)行檢測，結(jié)果表明斜莖黃芪含原阿片堿、別隱品堿、坎那定、小檗堿、四氫黃連堿、Oxyhydrostinine、異喹啉等生物堿，其中，原阿片堿、別隱品堿、坎那定、小檗堿、四氫黃連堿等幾種生物堿為主要成分，占總成分80%以上，是斜莖黃芪的主要生物堿成分。3.野生型斜莖黃芪小鼠亞急性毒性試驗4

4、8只昆白雄性小鼠隨機(jī)分為對照組、試驗I組和試驗n組。對照組供基礎(chǔ)日糧，試驗I組和試驗R組分別飼喂含0.45噴口1.80%斜莖黃芪總浸膏的攻毒日糧，試驗期間每天記錄臨床癥狀和體重變化，第35天、68天采集血液做血常規(guī)和生化指標(biāo)測定，35d、46d、57d、68d脫頸處死小鼠采取組織，進(jìn)行病理組織學(xué)觀察，試驗期限為68d。結(jié)果顯示，試驗期間試驗組小鼠臨床癥狀不明顯，體重在4wk后增長放緩，試驗組小鼠體重明顯低于對照組；試驗35d和68d,試驗I組和II組白細(xì)胞數(shù)顯著低于對照組(P<0.05)，但試驗組之間差異不顯著(P&gt；0.05);試驗35d,試驗I組和II組紅細(xì)胞與對

5、照組之間差異不顯著(P&gt；0.05),68d,試驗I組和II組顯著低于對照組(P<0.05),但兩個試驗組之間差異不顯著(P>0.05)。試驗I組和II組肌酊、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶與對照組比較差異顯著(P<0.05)，第35天試驗組生化指標(biāo)與第68天相比，差異性不顯著(P>0.05)。尿素氮、肌酐、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶隨時間的延長呈上升趨勢。試驗第68d,試驗II組小鼠各組織器官病變嚴(yán)重，心臟間質(zhì)小血管擴(kuò)張、充血。肝細(xì)胞腫脹、胞漿渾濁，胞漿可見微細(xì)的蛋白質(zhì)顆粒，部分肝細(xì)胞胞漿有大小不等的空泡，中央靜脈、肝竇隙擴(kuò)張，充滿紅細(xì)胞。脾竇擴(kuò)張、充滿紅細(xì)胞；淋巴細(xì)胞增生，組織間隙可見大量含鐵血黃素。肺泡壁毛細(xì)血管極度擴(kuò)張、充血，間質(zhì)靜脈血管擴(kuò)張、充血。腎小管上皮細(xì)胞腫脹、胞漿渾濁，胞漿可見微細(xì)蛋白質(zhì)顆粒，間質(zhì)小血管擴(kuò)張、充血。4.野生型斜莖黃芪常規(guī)營養(yǎng)成分及礦物質(zhì)元素測定按照飼料營養(yǎng)成分國家測定方法對斜莖黃芪地上部分營養(yǎng)成分及礦物質(zhì)元素進(jìn)行測定，結(jié)果表明斜莖黃芪干物質(zhì)（按干重計，%）91.15%、粗蛋白11.80%、粗脂肪1.28%、中性洗滌纖維47.22%、酸性洗滌纖維29.87%、粗灰分7.39%、粗纖維29.87%，無氮浸出物40.81%。礦物質(zhì)鈣（按干重計，為