痢疾桿菌的生物危害評估

1、痢疾桿菌的生物危害評估概述 細菌性痢疾 (簡稱菌痢 )是由志賀氏菌引起的一種急性腸道傳染病，主要臨床表現(xiàn)為全身中毒癥狀、腹痛、腹瀉、里急后重、膿血便、黏液便等。全 球每年志賀氏菌感染人次估計為 1.65 億。發(fā)達國家發(fā)病率約為 1.8-6.5/10 萬。我國目前菌痢的發(fā)病率仍顯著高于發(fā)達國家， 2003 年的監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示菌痢全國 發(fā)病率 39.4 10 萬。細菌性痢疾在我省分布極為廣泛，歷年來其發(fā)病率居各種 法定傳染病前列。 1979 年發(fā)病率最高達到 1601.10/10 萬，1983 年后發(fā)病率逐 年下降。 2002 、2003 年發(fā)病率分別為 40.16/10 萬、 47.07/10 萬

2、。病死率從1951 年以來明顯下降，到 1967 年以后一直穩(wěn)定在 0.19%以下， 2002 、2003 年病死率分別為 0.08% 、0.12% 。我省細菌性痢疾發(fā)病以農(nóng)民、 學(xué)生和散居兒童 為主。1. 病原微生物1.1 分類與生物學(xué)特性志賀菌屬( Shigella )又稱痢疾桿菌，為革蘭氏染色陰性的兼性厭氧菌，無 鞭毛及莢膜，不形成芽胞，無鞭毛、不具動力。在普通培養(yǎng)基中生長良好，分解 葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。 大多數(shù)志賀菌不分解乳糖， 但宋內(nèi)志賀菌能遲緩發(fā)酵乳糖。根據(jù)生化反應(yīng)與抗原結(jié)構(gòu)的不同，志賀菌分為 4 群。 A 群為志賀氏菌群，有 12個血清型； B 群為福氏菌群，有 16 個血清型；

3、 C 群為鮑氏菌群，有 18 個血清 型；D型為宋內(nèi)氏菌群，僅有1個血清型。各群痢疾桿菌在菌體裂解時均釋放出 內(nèi)毒素，但產(chǎn)生外毒素的能力各種群差異很大， 其中以志賀氏痢疾桿菌產(chǎn)生外毒 素的能力最強，故臨床癥狀較為嚴重。1.2 病原微生物的來源痢疾桿菌主要隨病人及帶菌者的糞便排出體外，污染食物、水、生活用品 或手,經(jīng)消化道使人感染。痢疾桿菌亦可通過蒼蠅污染食物而傳播。1.3 病原微生物在外界的抵抗力志賀氏菌的最適宜的生長溫度為 37 C，不耐熱及干燥，陽光直射即有殺滅作用，加熱60 C 10分鐘即死亡；但耐寒能力強，在陰暗潮濕及冰凍環(huán)境下能生存數(shù)周，在蔬菜、瓜果、腌菜中能生存12周。對一般消毒劑

4、如新潔爾滅、來蘇、過氧乙酸等抵抗力弱，可被迅速殺死。2. 病原微生物與疾病的關(guān)系2.1 致病性痢疾桿菌的致病物質(zhì)有侵襲力和內(nèi)毒素，有些菌株尚能產(chǎn)生外毒素。2.1.1 侵襲力志賀氏菌有菌毛，能粘附于回腸末端和結(jié)腸粘膜的上皮細胞上，繼而穿入上皮細胞內(nèi)生長繁殖， 一般在粘膜固有層內(nèi)繁殖形成感染灶， 引起炎癥反應(yīng)。2.1.2 內(nèi)毒素志賀菌各菌株都有強烈的內(nèi)毒素。內(nèi)毒素作用于腸壁，使其通透性增高，進一步促進內(nèi)毒素的吸收，引起發(fā)熱、神智障礙，甚至中毒性休克等一系列 的癥狀。內(nèi)毒素破壞腸粘膜，形成炎癥、潰瘍、呈現(xiàn)典型的膿血粘液便。內(nèi)毒素 尚能作用于腸壁植物神經(jīng)系統(tǒng)， 使腸功能紊亂， 腸蠕動共濟失調(diào)和痙攣，

5、尤其是 直腸括約肌痙攣最明顯，因而發(fā)生腹痛、里急后重等癥狀。2.1.3 外毒素志賀菌 A 群 1 型菌株可產(chǎn)生一種外毒素，稱志賀毒素。志賀毒素具有三種 生物學(xué)活性：神經(jīng)毒性細胞毒性腸毒性。2.2 傳染源傳染源包括患者和帶菌者。 其中非典型病人、 慢性病人及帶菌者由于癥狀輕 或無癥狀而易被忽略，故在流行病學(xué)的意義更大。2.3 傳播途徑痢疾桿菌隨患者或帶菌者的糞便排出， 通過污染手、 食品、水源或生活接觸， 或蒼蠅、 蟑螂等間接方式傳播， 最終均經(jīng)口入消化道使易感者受到感染。 在流行 季節(jié)可因食入污染食物或飲用糞便污染的水，而引起食物型或水型的爆發(fā)流行。2.4 人群易感性人群對痢疾桿菌普遍易感，

6、學(xué)齡前兒童患病多， 與不良衛(wèi)生習(xí)慣有關(guān)； 成人 患者多因機體抵抗力降低、 接觸感染機會多有關(guān)。 人群感染細菌性痢疾可獲得一 定的免疫力，但短暫而不穩(wěn)定， 并且不同菌群間以及不同血清型痢疾桿菌之間無 交叉免疫，故造成重復(fù)感染或再感染而反復(fù)多次發(fā)病。2.5 診斷標(biāo)準2.5.1 流行病學(xué)史：病人一周內(nèi)有不潔飲食或與菌痢病人接觸史。2.5.2 癥狀體征2.5.2.1 急性非典型菌痢 全身毒血癥狀和腸道癥狀均較輕， 不發(fā)熱或低熱， 腹瀉每日數(shù)次， 稀便有粘 液但無膿血，輕微腹痛而無明顯里急后重。病程 37d痊愈，亦可轉(zhuǎn)為慢性。2.5.2.2 急性普通型 （典型）菌痢 急性起病、高熱可伴發(fā)冷寒戰(zhàn)，繼而出現(xiàn)

7、腹瀉、腹痛、里急后重，大便每日10 多次至數(shù)十次，量少，故失水不多見。開始為稀便，可迅速轉(zhuǎn)為粘液膿血便， 左下腹壓痛及腸鳴音亢進。2.5.2.3 急性中毒型菌痢 發(fā)病急、高熱、呈嚴重毒血癥癥狀，小兒起病時可無明顯腹痛腹瀉癥狀，常需經(jīng)灌腸或肛拭做糞檢，才發(fā)現(xiàn)是菌痢。根據(jù)主要臨床表現(xiàn)有以下類型：休克型 （周圍循環(huán)衰竭型 ）：有感染性休克癥，如面色蒼白、四肢厥冷、脈細 速、血壓下降、皮膚發(fā)花、發(fā)紺等。腦型 (呼吸衰竭型 )：有腦水腫表現(xiàn)，如煩燥不安、驚厥、嗜睡或昏迷、瞳孔 改變，甚至出現(xiàn)腦疝、呼吸衰竭。混合型：同時出現(xiàn)休克型、腦型的癥候，是最兇險的一型。2.5.2.4 慢性菌痢急性菌痢者病程超過 2

8、 個月以上為慢性菌痢。2.5.3 實驗室檢查2.5.3.1血象急性期血白細胞總數(shù)輕至中度增高，多在(1020 ) X109/L，中性粒細胞亦增高。2.5.3.2 糞便常規(guī)檢查 糞便外觀多為粘液膿血便， 無糞質(zhì)。鏡檢有大量白細 胞或膿細胞及紅細胞。2.5.3.3 病原學(xué)檢查 糞便培養(yǎng)志賀菌屬陽性為確診依據(jù)。2.6 治療方法2.6.1 急性菌痢的治療2.6.1.1 一般治療 臥床休息、消化道隔離。給予易消化、高熱量、高維生素 飲食。2.6.1.2 對癥治療 對于高熱、腹痛、失水者給予退熱、止痙、口服補液鹽 (ORS)治療，吐瀉嚴重者需靜脈補液，每日1500ml3000m 。小兒按150 - 200

9、lml/kg/ 日，以 5%葡萄糖鹽水為主。中毒癥狀嚴重時可用氫化可的松 100mg 加入液體中靜滴，或口服潑尼松 1020mg ，以減輕中毒癥狀。2.6.1.3.病原治療 由于耐藥菌株增加，最好結(jié)合藥敏試驗，酌情選用下列各 種藥物：(1) 磺胺類：磺胺甲基異惡唑(SMZ )加甲氧芐啶(TMP ),即復(fù)方新諾 明1.0g , 2次/日，首次加倍，兒童50mg/kg/日，連用57日。( 2)喹諾酮類：為人工合成的廣譜抗菌藥物，作用于細菌 DNA 螺旋酶， 阻止DNA合成，有殺菌效果。此外組織滲透性強，少有耐藥產(chǎn)生。諾氟沙星 0.60.8g，分 34次口服。氧氟沙星0.2g，2次/日。療程5天。本

10、藥因影 響骨骼發(fā)育，孕婦、兒童不宜使用。(3)其他抗生素：可適當(dāng)選用慶大霉素(816萬u ,1次/日，小兒3000 5000u/kg/ 日，或卡那霉素 1.0g， 1 次/日)肌注或靜滴，療程均為 57日。 還可選用阿米卡星、磷霉素及頭孢菌素類等。( 4)利福平：對痢疾桿菌也有一定殺滅作用。2.6.1.4 中醫(yī)中藥治療2.6.2 中毒性菌痢的治療2.6.2.1 抗感染 選擇敏感抗菌藥物，聯(lián)合用藥，靜脈給藥，待病情好轉(zhuǎn)后改口服。2.6.2.2 控制高熱與驚厥1% 溫鹽水 1000ml 灌腸，或酌情加退熱劑。 采用冬眠療法， 氯丙嗪和異丙嗪 1 2mg/kg ， 2 3 次。必要時加苯巴比妥鈉鹽，

11、 5mg/kg（1 ）退熱可用物理降溫，加（2 ）躁動不安或反復(fù)驚厥者，肌注，或水合氯醛， 40 60mg/kg 次，灌腸，或安定 0.3mg/kg/ 次，肌注或緩 慢靜脈注射。2.623循環(huán)衰竭的治療 包括：擴充有效血容量；糾正酸中毒；強心 治療；解除血管痙攣；維持酸堿平衡；應(yīng)用糖皮質(zhì)激素。2.6.2.4 防治腦水腫與呼吸衰竭 （1 ）（2） 交替使用。（3）次。（4）肌注， 2 4 小時可重復(fù)一次，共東莨菪堿或山莨菪堿的應(yīng)用，既改善微循環(huán)，又有鎮(zhèn)靜作用。脫水劑： 20%甘露醇 1.0g/kg/ 次， 46 小時一次，可與 50%葡萄糖地塞米松：0.51.0mg/kg/次，靜脈注射，必要時4

12、6小時重復(fù)一吸氧，12 升/min，慎用呼吸中樞興奮劑，必要時氣管內(nèi)插管與氣 管切開，用人工呼吸器。2.6.2.5 中藥2.6.3 慢性菌痢的治療2.6.3.1 尋找誘因，對癥處置。避免過度勞累，勿食生冷飲食。體質(zhì)虛弱者 應(yīng)及時使用免疫增強劑。 當(dāng)出現(xiàn)腸道菌群失衡時， 切忌濫用抗菌藥物， 可用微生 態(tài)制劑如雙歧桿菌。加用B族維生素、維生素C、葉酸等。2.6.3.2 對于腸道粘膜病變經(jīng)久不愈者，同時采用保留灌腸療法，可用 1：5000 呋喃西林液 150ml ，或 5 1 0%大蒜溶液 150ml 加潑尼松 20mg 及 0.25% 普魯卡因 10ml ，保留灌腸，每晚一次， 1014 日為一療

13、程。3 擬進行的實驗室操作3.1 檢測項目3.1.1 痢疾桿菌的涂片染色鏡檢3.1.2 痢疾桿菌的分離培養(yǎng)鑒定3.2 可能產(chǎn)生生物危害的實驗步驟3.2.1 標(biāo)本采集過程中接觸病原體，痢疾檢測標(biāo)本包括糞便、嘔吐物、 水源、食品等。3.2.2 糞便的鏡檢過程中接觸病原微生物。3.2.3 培養(yǎng)皿上菌落的挑取、涂片和鏡檢3.2.4 試驗廢棄物污染4. 實驗室感染的預(yù)防措施4.1 個人防護4.1.1 防護用品細菌性痢疾實驗室人員使用的防護用品應(yīng)符合國家的有關(guān)標(biāo)準。1）防護服：一次性使用的防護服應(yīng)符合醫(yī)用一次性防護服技術(shù)要求GB19082-2003 。防護口罩：應(yīng)符合醫(yī)用防護口罩技術(shù)要求 GB19083-

14、2003 。 防護眼鏡：視野寬闊，透亮度好，有較好的防濺性能，彈力帶佩戴。 手套：醫(yī)用一次性乳膠手套或橡膠手套。 鞋套：為防水、防污染鞋套。長筒膠鞋 醫(yī)用工作服 醫(yī)用工作帽 實驗室操作人員實施二級防護。穿普通工作服、戴工作帽、外罩一 戴防護眼鏡和防護口罩（離開污染區(qū)后更換） ，戴乳膠手套、穿鞋套。（2）（3）（4）（5）（6）（7）（8）4.1.2 層防護服、 必要時應(yīng)戴橡膠手套，穿長筒膠鞋。每次實驗操作后應(yīng)立即進行手清洗和消毒， 方法同一級防護。防護用品的穿脫順序：（1）穿戴防護用品順序步驟 1 ：戴口罩，一只手托著口罩，扣于面部適當(dāng)?shù)牟课?，另一只手將口?帶戴在合適的部位，壓緊鼻夾，緊貼于

15、鼻梁處。在此過程中，雙手不接觸面部任 何部位。步驟 2 ：戴帽子，戴帽子時注意雙手不接觸面部。步驟 3 ：穿防護服。步驟 4 ：戴上防護眼鏡，注意雙手不接觸面部。步驟 5 ：穿上鞋套或膠鞋。步驟 6 ：戴上手套，將手套套在防護服袖口外面。（2）脫掉防護用品順序步驟 1 ：摘下防護鏡，放入消毒液中。步驟 2 ：脫掉防護服，將反面朝外，放入黃色塑料袋中。步驟 3 ：摘掉手套，一次性手套應(yīng)將反面朝外，放入黃色塑料袋中，橡膠手 套放入消毒液中。步驟 4：將手指反掏進帽子， 將帽子輕輕摘， 反面朝外， 放入黃色塑料袋中。步驟 5 ：脫下鞋套或膠鞋，將鞋套反面朝外，放入黃色塑料袋中，將膠鞋放 入消毒液中。

16、步驟 6 ：摘口罩，一手按住口罩，另一只手將口罩帶摘下，放入黃色塑料袋 中，注意雙手不接觸面部。4.2 安全操作（1）工作時 ，禁止或限制人員進入實驗室。一般情況下， 易感人員或感染 后會出現(xiàn)嚴重后果的人員，不允許進入實驗室 。（2）實驗室人員接受適當(dāng)?shù)摹⒑蛯嶒炇抑刑幚砘驅(qū)⒁幚淼牟≡从嘘P(guān)的免 疫接種或測試；（3）制定的標(biāo)準操作程序或生物安全手冊中， 應(yīng)包括生物安全程序。 實驗 及其輔助人員接受適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)， 包括和工作有關(guān)的可能存在的風(fēng)險、 防止暴露的 必要措施和暴露評估程序。（4）存在外源性病源時，實驗室入口處應(yīng)貼有生物危險標(biāo)志，并顯示以下 信息：有關(guān)病源、生物安全級別、免疫接種要求、研究人

17、員姓名、電話號碼、在 實驗室中必須佩帶的個人防護設(shè)施、出實驗室所要求的程序（5）不許在工作區(qū)域飲食、吸煙、清洗隱型眼鏡和化妝。不允許在工作區(qū) 存放食物和日常生活用品。在實驗室中，戴隱型眼鏡的人，也需戴口罩或面罩。（6）不能用嘴移液，制定銳器安全使用規(guī)范。盡可能不要用銳器。打碎的 玻璃器皿不能直接用手處理，必須用其它工具。盛污染的針頭、銳器、碎玻璃的 容器在倒掉前，應(yīng)按照規(guī)定進行消毒。（7）所有的操作過程應(yīng)盡量細心， 避免產(chǎn)生和濺出氣溶膠； 消毒至少一天 一次。（8）所有的培養(yǎng)物、儲存物及其它規(guī)定的廢物在丟棄前，均應(yīng)使用可行的 消毒方法進行消毒，如高壓滅菌。轉(zhuǎn)移運輸?shù)膹U棄物應(yīng)置于耐用、防漏容器內(nèi)

18、， 密封運出實驗室，其包裝應(yīng)符合國家有關(guān)規(guī)定。4.3 剩余樣品處理4.3.1 感染性廢棄物的處理被檢驗樣品污染的攜帶病原微生物的可引發(fā)痢疾桿菌傳播危險的廢棄物， 包括痢疾桿菌的培養(yǎng)基、標(biāo)本、菌種、保存液、使用后的一次性衛(wèi)生用品，一次性醫(yī)療器械、一次性隔離服、手套、帽子、鞋套、口罩?？刹捎?21 r高壓蒸汽30 分鐘滅菌，裝入生物垃圾袋后運出實驗室，按醫(yī)用固體廢棄物的處理程序處 置。4.3.2 損傷性廢棄物的處理檢驗中使用的玻璃試管、載玻片等能刺傷或割傷人體的廢棄物，采用121 r高壓蒸汽 30 分鐘滅菌，單獨分類裝入生物垃圾袋后運出實驗室，按醫(yī)用固體廢 棄物的處理程序處置。4.4 污水的處理實驗用水、洗手用水統(tǒng)一收集，加氯消毒，再采用121 r高壓蒸汽30分鐘滅菌，無害化處理后再排放。4.5 污染場地處理4.5.1 每次檢驗完成后，實驗室地面、試驗臺，周圍環(huán)境可用5福爾馬林按 500ml/m2 噴灑消毒三次，或用 20%的漂白粉水溶液按 200ml/m 2 噴霧作 用12小時。4.5.2 如果在實驗過程中發(fā)生感染性物質(zhì)的溢出或濺出，應(yīng)由經(jīng)過正規(guī)培 訓(xùn)的專業(yè)人員進行消毒和清理4.6 空氣消