實(shí)驗(yàn)二真菌形態(tài)觀察(一).

1、實(shí)驗(yàn)二、真菌形態(tài)觀察（一） 1 目的： 認(rèn)識(shí)真菌營(yíng)養(yǎng)體及變態(tài)，認(rèn)識(shí)真菌無性和有性孢子類型。掌握鞭毛菌亞門和接合菌亞門的主要形態(tài)特征。掌握臨時(shí)玻片的制作方法和繪圖技術(shù)。2原理： 真菌營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)階段的結(jié)構(gòu)稱為營(yíng)養(yǎng)體，當(dāng)營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)進(jìn)行到一定時(shí)期，就開始轉(zhuǎn)入繁殖階段，形成繁殖體，即子實(shí)體。營(yíng)養(yǎng)體主要為菌絲 體，主要變態(tài)有吸器、假根、菌核、子座以及根狀索菌等。繁殖體主 要包括無性孢子和有性孢子。通常制作臨時(shí)玻片來觀察病原物在植物上著生的情況以及病原物的形 態(tài)特征。3 材料用具番茄晚疫病菌裝片，辣椒疫霉病菌裝片，黑根霉裝片，酵母菌懸浮 液等培養(yǎng)真菌，植物病害組織。挑針，刀片，木塊，酒精燈，火柴， 載玻片，蓋玻

2、片，紗布，乳酚油，二甲苯，顯微鏡，吸水紙，擦鏡 紙。投影儀，多媒體課件等 4內(nèi)容與方法（自己寫，包括主要內(nèi)容即可） 4.1 臨時(shí)玻片41 .1浮載劑 制作臨時(shí)玻片都要使用浮載劑，浮載劑的作用是防 止材料干燥和集中光線，以利于顯微鏡下觀察。浮載劑的種類很多， 最常用的是水和乳酚油，其次是甘油、甘油明膠，希爾浮載劑等。（1 水：水浮載劑一般使用蒸餾水，應(yīng)用最為方便。對(duì)細(xì)菌、真菌 孢子等無不利影響。觀察細(xì)菌、線蟲活動(dòng)，真菌孢子萌發(fā)都必須用水 作浮載劑。測(cè)量真菌菌絲直徑和真菌孢子大小時(shí)也以水作浮載劑為好。但是用水作浮載劑制片時(shí)較易形成氣泡，制成的玻片也易干燥而 不能保存。(2乳酚油：乳酚油長(zhǎng)期以來一直

3、是真菌學(xué)和植物病理學(xué)工作者習(xí)慣使 用的浮載劑。乳酚油的組成如下：苯酚結(jié)晶(加熱熔化20ml，乳酸 20ml，甘油40ml、水20ml。各成分混合后成為油狀粘稠液體，具殺死 和固定病原物的作用，可使干癟的真菌孢子膨脹復(fù)原，還可使病組織 變得略為透明。如在乳酚油中加入 005-01的染料制成棉藍(lán)乳酚 油，藏紅乳酚油等，還能使菌絲或孢子略微著色，更便于觀察。用乳 粉油制作的玻片可長(zhǎng)期保持濕潤(rùn)不會(huì)干燥，它的缺點(diǎn)中，很難精確測(cè) 量病原物的大小。另外，乳酚油能與許多封固劑起作用，蓋玻片也易 滑動(dòng)，不易封固41.2 臨時(shí)玻片的制作 臨時(shí)玻片制作方法很多，如涂，撕、粘， 挑和切片等，可根據(jù)病原物的類型選擇使用

4、。(1涂抹法，細(xì)菌和酵母菌的培養(yǎng)物常用涂抹法制片。將細(xì)菌或酵 母菌的懸浮液均勻地涂在潔凈的載玻片上，在酒精燈火焰上烘干，固 定，再加蓋玻片封固。加蓋玻片前還可進(jìn)行染色處理，使菌體或鞭毛 著色而易于觀察。(2 撕取法，用小金屬鑷子仔細(xì)撕下病部表皮或表皮毛制成臨時(shí)玻 片。此法可以觀察著生在寄主或基物表面的菌絲和孢子，寄主表皮細(xì) 胞內(nèi)的真菌菌絲、吸器和休眠孢子囊堆，以及病毒病的內(nèi)含體等。試以小麥白粉病葉，煙草花葉病病葉，蠶豆花葉病葉，受禾谷多 粘茵為害的小麥病根等為材料，用撕取法制作臨時(shí)玻片，觀察病原物 的形態(tài)。(3粘貼法：將塑料膠帶紙剪成邊長(zhǎng) 5mm左右的小塊，使膠面朝下 貼在病部，輕按一下后揭下

5、制成玻片。粘貼法用于菌絲或子實(shí)體著生 于病組織或基物衷面的材料制片，特別適用于觀察分生袍子在分生抱 子梗上的著生情況。(4 挑取法，采用挑取法可以直接用挑針從病組織或基物 (如培養(yǎng)基器，上挑取表面的霉?fàn)钗?、粉狀物或孢子團(tuán)制成玻片。也可以先將埋生或 半埋生的真菌子實(shí)體 (如子座、分生孢子器,于囊殼等連同部分病組織 一同排列在載玻片上,再用挑針將病菌子實(shí)體剝離出來制片。還可以 用刀片刮取或用小鑷子鑷取病部子實(shí)體來制片。(5組織透明法：用水合氯醛或乳酚油或氫氧化鉀液將病組織整體 透明后再制成玻片。用于觀察寄主組織內(nèi)的細(xì)菌、真菌菌絲。吸器, 子實(shí)體等,可以觀察到病原物在寄主內(nèi)的原有狀態(tài)。取病組織小塊浸

6、在乳酚油內(nèi)煮 30分鐘,材料透明后取出制片。如 病原物結(jié)構(gòu)無色時(shí)還可加棉藍(lán),苯胺藍(lán)或酸性品紅等染料染色。少量 病組織材料可以放在載玻片上,滴加乳酚油后在酒精燈上徐徐加熱至 蒸氣出現(xiàn)。如此處理數(shù)次,待組織透明后加蓋玻片進(jìn)行鏡檢。(6徒手切片：徒手切片是日常制作臨時(shí)玻片時(shí)最常用的一種方 法。制成的玻片可保持寄主組織和病原物原有的色澤,還可以觀察病 組織和病原物的解剖結(jié)構(gòu)。切得好的徒手切片并不比石蠟切片差,而 且非常方便。用樹脂,指甲油或油漆封固后還可以作為半永久玻片保 存。選取病狀典型，病征明顯的病組織材料制作徒手切片，先在病健 交界處切取病組織小塊(邊長(zhǎng)5 8mm, 般的葉片或莖稈皮層組織可 直

7、接放在載玻片上或小木塊上，用食指輕輕壓住，隨著手指慢慢地后 退,用刀片將壓住的病組織小塊切成很薄的絲或片,切下的薄片立即 放在盛有清水的培養(yǎng)皿或載玻片上的水滴中,用挑針或接種針挑取薄 而合適的材料放在另一干凈載玻片上的浮載劑液滴中央,蓋上蓋玻 片,仔細(xì)擦去多余的浮載劑,即制成一張臨時(shí)玻片。病材料較粗大堅(jiān)硬的,可用手指捏緊后用鋒利的剃刀或單面刀片 切。材料較小而柔軟的,可夾在新鮮的胡蘿卜或馬鈴薯塊中間,連同 夾持物一起切成薄片, 以下的制作步驟同葉片病組織制片。病組織材料很干燥的, 為防止切片時(shí)發(fā)生破碎,可先沾少量水濕 潤(rùn)軟化后再切。徒手切片獲得的是病組織及病原物的剖面薄片, 因而 能夠觀察著生

8、于寄主表面的病原物形態(tài),也能夠觀察寄主組織內(nèi)部的病原物。如寄主薄壁細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌、埋生于寄主組織內(nèi)的真菌子實(shí)體 結(jié)構(gòu)等等。此外，徒手切片還可以用來觀察和研究寄主組織的病理變 化情況。如分期或分段取病組織材料做徒手切片，能夠觀察病原物的 侵染過程，病原物在寄主組織內(nèi)的擴(kuò)展情況，以及寄主組織本身的病 理反應(yīng)和變化等。4.2鞭毛菌疫霉屬（Phytophthora：觀察番茄晚疫病裝片和辣椒疫霉病裝片。觀 察無隔菌絲，孢子囊是什么形狀？孢囊梗和菌絲的形態(tài)有何不同？晚疫 菌的孢子囊梗與菌絲的形態(tài)有明顯區(qū)別。嚴(yán)4 J用-?rVV 扌八 “* VF*致病疫霉鏡下圖- - ,. 1I11、抱子r 馬鈴薯晚疫病真的KSrtBJt 札有4.3接合菌觀察黑根霉裝片