食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的測定（二）

1、食品中三氯蔗糖(蔗糖素)的測定（二） 5.1.1 含蛋白脂肪試樣 5.1.1.1 稱取粉碎勻稱后固體試樣1g2g(精確到0.001g),混勻后液體試樣1g5g(精確到 0.001g)置于50ml離心管中，加入5ml水,渦旋混合器上振蕩3min后加入15ml,繼續(xù)振蕩 30s,超聲波提取20min,以3000r/min離心10min,將上清液移入50ml離心管中。沉淀物加入 5.0ml水溶液(75+25),玻棒攪拌勻稱后，渦旋混合器上振蕩30s,以3000r/min離心10min,重 復提取2次,將上清液合并于150ml分液漏斗中。 5.1.1.2 在150ml分液漏斗內，加入30ml,振搖2m

2、in,靜置分層，20min后，下層水相移置 于50ml蒸發(fā)皿。蒸發(fā)皿于沸水浴上蒸發(fā)，當蒸發(fā)皿中液體在1ml左右時用9ml水分三次沖洗蒸 發(fā)皿，沖洗液合并移置于15ml離心管中，超聲波處理5min,以3000r/min離心10min。 5.1.1.3 取所有上清液移入已活化的固相萃取柱,控制液體流速不超過每秒1滴,柱上液面為2mm左 右時加入1ml水,繼續(xù)保持液體流速為每秒1滴，到柱中液體徹低排出后,用3ml洗脫,收集甲 醇洗脫液。洗脫液置于50ml蒸發(fā)皿內，于沸水浴上蒸干，殘渣用1.00ml水溶液(11+89)溶解 (如溶液有渾濁現象可將其移入離心管，10000r/min離心5min),溶液過

3、0.45um濾膜,濾液為制備的 試樣溶液,備用。 注：果凍類樣品經提取后的上清液需50水浴加熱后趁熱過柱，否則易阻塞萃取柱。 5.1.2 醬及醬制品、醋、醬油 稱取混勻后試樣2g(精確到0.001g),置于50ml離心管中，加入1.0g中性，加入3ml 水，渦旋混合器上振蕩3min后加入15ml甲醇，以下步驟自5.1.1.1“繼續(xù)振蕩30s,超聲波提取 20min,以3000r/min離心10min”開頭，到5.1.1.3“濾液為制備的試樣溶液，備用”為止依次處理。 5.1.3 含酒精的試樣(發(fā)酵酒、配制酒) 稱取混勻后試樣5g(精確到0.001g),置于50ml蒸發(fā)皿中，于沸水浴上蒸干,殘渣

4、用1.00ml乙腈水溶液(11+89)溶解,溶液過0.45um濾膜,濾液為制備的試樣溶液,備用。 5.1.4 飲料 稱取混勻后試樣5g(精確到0.001g),置于15ml離心管中，加入5ml水，渦旋混合器上振蕩30s。以3000r/mim離心10mim。以下步驟按5.1.1.3 處理。 5.1.5 風味發(fā)酵乳、奶茶 稱取混勻后試樣1g5g(精確到0.001g)置于50ml離心管中，加入5ml水，渦旋混合器上振蕩3mim后加入15ml甲醇、0.50ml溶液,0.50ml溶液，以下步驟自5.1.1.1“繼續(xù)振 蕩30s,超聲波提取20mim,以3000r/mim離心10mim”開頭，到5.1.1.

5、3“濾液為制備的試樣溶液，備 用?！睘橹挂来翁幚?。 不同試樣的前處理需要同時做試樣空白實驗。 5.2 儀器參考條件 5.2.1 色譜柱:c18柱(4.6mm×150mm,5um)或性能相當者。 5.2.2 流淌相：水+乙腈=89+11。 注：當檢測樣品基質復雜,強保留物質影響后續(xù)檢測時,可實行洗脫程序(蒸發(fā)光散射檢測器適用)。 5.2.3 流速：1.0ml/mim。 5.2.4 柱溫：35。 5.2.5 示差檢測器條件： 檢測池溫度：35； 敏捷度:16。 5.2.6 蒸發(fā)光散射檢測器條件:按不同品牌蒸發(fā)光散射檢測器在高水相流淌相條件下的要求設置。 如sedex75: 霧化壓力：3.

6、5ear；增益：8；蒸發(fā)溫度：40?；蛐阅芟喈斦摺?5.2.7 進樣量：20.0ul。 5.3 標準曲線的制作 5.3.1 示差檢測器 取標準工作液分離進樣20.0ul,在上述色譜條件下測定峰面積,然后作峰面積-三氯蔗糖濃度(mg/ml)標準曲線，曲線方程依示差檢測原理,見式(1)： y=ax+b.(1) 式中： y峰面積； a、b與檢測池溫度、流淌相性質等試驗條件有關的常數； x三氯蔗糖的濃度,單位為毫克每毫升(mg/ml)。 5.3.2 蒸發(fā)光散射檢測器 取三氯蔗糖標準工作液分離進樣20.0ml,在給定的色譜條件下測定峰面積,然后作峰面積-三氯蔗糖濃度(mg/ml)標準曲線，曲線方程依蒸發(fā)

7、光散射檢測原理,見式(2)： y=bxa.(2) 式中： y峰面積； a、b與蒸發(fā)室溫度、流淌相性質等試驗條件有關的常數； x三氯蔗糖的濃度,單位為毫克每毫升(mg/ml)。 按儀器數據處理軟件的處理方式不同，也可作對數方程，即1gy=b+algx。 5.4 試樣溶液的測定 取制備的試樣溶液和空白試樣溶液各20.0ul進樣,舉行高效液相色譜分析。以保留時光定性，以峰面積外標法定量。 6 分析結果的表述 試樣中三氯蔗糖含量按式(3)計算： 式中： x試樣中三氯蔗糖的含量,單位為克每千克(g/kg); c由標準曲線查得試樣進樣液中三氯蔗糖的濃度,單位為毫克每毫升(mg/ml)； c0由標準曲線查得空白試樣進樣液中三氯蔗糖的濃度,單位為毫克每毫升(mg/ml)； v試樣定容體積,單位為毫升(ml)； m試樣質量，單位為克(g)； 1000換算系數。 結果保留三位有效數字