食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉(甜蜜素)的測定（一）

1、食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉(甜蜜素)的測定（一） gb 5009.97-2016規(guī)定了食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉測定的三種辦法，包括氣相色譜法、液相色譜法和液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法。 (一)氣相色譜法 氣相色譜法適用于飲料類、蜜餞涼果、果丹類、話化類、帶殼及脫殼熟制堅(jiān)果與籽類、水果罐頭、果醬、糕點(diǎn)、面包、餅干、冷凍飲品、果凍、復(fù)合調(diào)味料、腌漬蔬菜、腐乳等食品中的測定。氣相色譜法不適用于白酒中該化合物的測定。 1.測定原理 食品中用水提取，在介質(zhì)中與亞硝酸反應(yīng)，生成環(huán)己醇亞硝酸酯，利用氣相色譜氫火焰離子化檢測器舉行分別及分析，保留時(shí)光定性，外標(biāo)法定量。 2試劑和儀器 (1)試劑 正庚烷ch3(ch2)5c

2、h3、(nacl)、：沸程為3060。 (naoh)溶液：40g/l。 溶液：200g/l。 k4fe(cn)6·3h2o 溶液：150g/l。稱取折合15g，溶于水并稀釋至100ml，混勻。 硫酸鋅(znso4·7h2o)溶液：300g/l。稱取折合30g，溶于水并稀釋至100 ml，混勻。 (nano2)溶液：50g/l。稱取25g，溶于水并稀釋至500ml,混勻。 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(5.00mg/ml )：精確稱取0.5612g環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品(純度99%)，加水溶解并定容至100ml，此溶液1.00ml相當(dāng)于環(huán)己基氨基磺酸5.00mg。置于14冰箱中保存，可保存12

3、個(gè)月。 環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)用法液(1.00mg/ml )：精確移取20.0ml環(huán)己基氨基磺酸鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用水稀釋并定容至100ml。置于14冰箱中可保存6個(gè)月。 (2)儀器及設(shè)備 氣相色譜儀(配氫火焰離子化檢測器)。 渦旋混合器，離心機(jī)(轉(zhuǎn)速)4000r/min)，超聲波振蕩器，樣品粉碎機(jī)，10ul微量注射器，恒溫水浴鍋，天平(感量1 mg, 0.1mg)。 3.測定步驟 (1)取樣及樣品處理 液體試樣：一般液體試樣：搖勻后稱取25.0g試樣(如需要可過濾)，用水定容至50ml備用。 含co2的試樣：稱取25.0g試樣于燒杯中，60水浴加熱30min以除去co2，放冷，用水定容至50ml備用

4、。 含酒精的試樣：稱取25.0g試樣于燒杯中，用naoh溶液調(diào)至弱堿性ph 78, 60水浴加熱30min以除去酒精，放冷，用水定容至50ml備用。 固體、半固體試樣：低脂、低蛋白樣品(果醬、果凍、水果罐頭、果丹類、蜜餞涼果類、濃縮果汁、面包、糕點(diǎn)、餅干、復(fù)合調(diào)味料、帶殼熟制堅(jiān)果和籽類、腌漬蔬菜等)：稱取打碎、混勻的樣品3.005.00g于50ml離心管中，加30ml水，振搖，超聲提取20min,混勻，離心(3000r/min) 10min，過濾，用水分次洗滌殘?jiān)?，收集濾液并定容至50ml，混勻備用。 高蛋白、高脂樣品(酸乳、雪糕、冰淇淋等奶制品及豆制品、腐乳等)：冰棒、雪糕、冰淇淋等分離放置

5、于250 ml燒杯中，待溶化后攪勻，稱取樣品3.005.00g于50ml離心管中，加30ml水，超聲提取20min，加2ml亞鐵氰化鉀溶液混勻，再加入2ml硫酸鋅溶液，混勻，離心(3000r/min)10min，過濾，用水分次洗滌殘?jiān)?，收集濾液并定容至50 ml ,混勻備用。 高脂樣品(奶油制品、海魚罐頭、熟肉制品等)：稱取打碎、混勻的樣品3.005.00g于50ml離心管中，加入25 ml石油醚，振搖，超聲提取3 min，再混勻，離心(1000r/min以上)10min，棄石，再用25ml提取一次，棄石油醚，60水浴揮發(fā)除去，殘?jiān)?0ml水，混勻，超聲提取20min，加2ml溶液混勻，再加

6、入2ml溶液，混勻，離心(3000r/min) 10min，過濾，用水分次洗滌殘?jiān)?，收集濾液并定容至50ml,混勻備用。 (2)試樣衍生化精確移取處理好的液體試樣、固體、半固體試樣溶液10.0ml于50ml帶蓋離心管中。離心管置試管架上冰浴5 min后，精確加入5.00ml，再加入2.5 ml溶液，2.5 ml硫酸溶液，蓋緊離心管蓋，在冰浴中放置30min，期間振搖35次；加入2.5g，蓋上蓋后置渦旋混合器上振蕩1 min，低溫離心(3000r/min )10min分層，或低溫靜置20min至澄清分層后取上清液，放置于14冰箱中保存?zhèn)溆谩?(3)標(biāo)準(zhǔn)溶液系列的制備及衍生化精確移取1.00mg/

7、ml標(biāo)準(zhǔn)溶液0.50、1.00、2.50、5.00、10.0、25.0ml于50ml容量瓶中，加水定容，配成標(biāo)準(zhǔn)溶液系列濃度為0.01、0.02、0.05、0.10、0.20、0.50mg/ml, 臨用時(shí)配制以備衍生化。精確移取系列標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0ml舉行衍生化，辦法同步驟(2)。 (4)色譜條件 色譜柱：弱極性石英毛細(xì)管柱(內(nèi)涂5苯基甲基聚硅氧烷，30m×0.53mm×1.0um)或等效柱。 柱溫升溫程序：初溫55保持3min, ioc/min升溫至90保持0.5min, 20'c/min升溫至200保持3min。 進(jìn)樣口：溫度230；進(jìn)樣量1ul，不分流/分流進(jìn)

8、樣，分流比1:5(分流比及方式可按照色譜儀器條件調(diào)節(jié))。 檢測器：氫火焰離子化檢測器(fid)，溫度260。 載氣：高純氮?dú)?，流?2.0ml/min，尾吹20ml/min。 氫氣：30ml/min；空氣330ml/min(載氣、空氣流量大小可按照儀器條件舉行調(diào)節(jié))。 (5)測定辦法分離吸取1ul經(jīng)衍生化處理的標(biāo)準(zhǔn)系列濃度上清液，注入氣相色譜儀中，測得不同濃度被測物的相應(yīng)峰面積值，以濃度為橫坐標(biāo)，以環(huán)己醇亞硝酸酯和兩峰面積之和為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 在徹低相同的條件下進(jìn)樣1 ul經(jīng)衍生化處理的試樣待測液上清液，保留時(shí)光定性，測得峰面積，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣液中的組分濃度；試樣上清液響應(yīng)值若超出線性范圍，應(yīng)用正庚烷稀釋后再進(jìn)樣分析，平行測定次數(shù)不少于兩次。 4結(jié)果計(jì)算 式中x試樣中環(huán)己基氨基磺酸的含量，g/kg; p由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出定容樣液中的濃