現(xiàn)代生化技術(shù)習(xí)題及答案

1、第一章 生物大分子的提取與沉淀分離技術(shù)一、名詞解釋1.生化技術(shù)：是在生物化學(xué)及其相關(guān)學(xué)科應(yīng)用的各種技術(shù)。主要是指生物體內(nèi)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物，特別是生物大分子的分離、檢測(cè)、制備與改造技術(shù)。 2.提?。ㄝ腿。菏窃谝欢ǖ臈l件下，用一定的溶劑處理樣品，使欲分離的物質(zhì)充分釋放到溶劑中的過(guò)程。又稱(chēng)“抽提”或“萃取”。 3.沉淀分離技術(shù)：是通過(guò)改變某些條件或加入某種物質(zhì)，使溶液中某種溶質(zhì)的溶解度降低，從而從溶液中沉淀析出的技術(shù)。 4.鹽溶：低鹽濃度下蛋白質(zhì)的溶解度隨著鹽濃度的升高而增加的現(xiàn)象。 5.鹽析作用：鹽濃度升高到一定程度后，蛋白質(zhì)的溶解度隨著鹽濃度的升高而降低，結(jié)果使蛋白質(zhì)沉淀析出，這種現(xiàn)象即為鹽析

2、作用。 6.等電點(diǎn)沉淀法：是利用蛋白質(zhì)在pI時(shí)溶解度最低，以及不同的蛋白質(zhì)有不同的pI這一特性，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離純化的方法。 7.有機(jī)溶劑沉淀法：利用不同蛋白質(zhì)在不同濃度的有機(jī)溶劑中的溶解度不同而使蛋白質(zhì)分離的方法稱(chēng)為有機(jī)溶劑沉淀法。二、填空1. 現(xiàn)代生化技術(shù)的顯著特點(diǎn)：是以三高所著稱(chēng)，即：高技術(shù)、高投入、及高利潤(rùn)。2. 生物大分子主要包括： 蛋白質(zhì) 、 酶 、 核酸 、 多糖 和 脂類(lèi) ，它們是生物體內(nèi)存在的具有特殊生物學(xué)功能的高分子化合物。3. 生化分離技術(shù)主要有沉淀分離技術(shù)分離、層析分離技術(shù)分離、電泳分離技術(shù)分離和超離心分離技術(shù)分離技術(shù)。4. 蛋白質(zhì)和酶的種類(lèi)繁多，在提取時(shí)應(yīng)根據(jù)其存在的

3、部位、分子結(jié)構(gòu)及溶解性質(zhì)的不同選擇不同的提取方法。5. 影響提取的因素主要有 溶劑 、 溶解度 、 溫度 、 pH 和 濃度差 等。6. 水溶液法提取酶和蛋白質(zhì)時(shí)，要注意控制好鹽濃度、溫度、pH值等因素。7. 沉淀分離技術(shù)包括鹽析 沉淀、等電點(diǎn)沉淀和有機(jī)溶劑沉淀等技術(shù)。8. 在分段鹽析中，在一定的pH和溫度條件下，改變離子強(qiáng)度稱(chēng)為 Ks分段 鹽析，而在一定的鹽和離子強(qiáng)度條件下，改變溫度或pH值稱(chēng)為 分段 鹽析。9. 實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行蛋白質(zhì)鹽析沉淀時(shí)應(yīng)用最多、最廣的鹽是 硫酸銨 。10. 在核蛋白提取時(shí)，應(yīng)選用0.14mol/L的氯化鈉溶液提取 核糖 核蛋白，而選用1mol/L的氯化鈉溶液提取 脫氧核

4、糖 核蛋白。11. 核酸分離時(shí)從pH5沉淀中可分離得到 tRNA 。12. RNA的提取方法主要有 稀鹽溶液 提取和 苯酚水溶液 提取。13. 苯酚水溶液提取核酸時(shí)， 蛋白質(zhì) 和 DNA 沉淀于 苯酚 層中，而 RNA和 多糖 溶解于 水層 中。14. 核酸沉淀分離主要有 有機(jī)溶劑沉淀法 、 等電點(diǎn)沉淀法 、 鈣鹽沉淀法 和 選擇性溶劑沉淀法 四種方法。15. 能夠選擇性地沉淀DNA的試劑是 異丙醇 。三、問(wèn)答題1進(jìn)行細(xì)胞破碎的方法有哪些：機(jī)械破碎法：是通過(guò)機(jī)械運(yùn)動(dòng)所產(chǎn)生的剪切力的作用使細(xì)胞破碎的方法。物理破碎法：用各種物理因素(溫度、壓力、超聲波)的作用使細(xì)胞破碎的方法?；瘜W(xué)破碎法：用化學(xué)試

5、劑可使細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)改變或破壞，改變細(xì)胞膜的通透性。酶學(xué)破碎法：通過(guò)加入酶或利用細(xì)胞本身的酶的作用，使細(xì)胞破碎的方法。 2蛋白質(zhì)和酶提取、分離的一般原則：提取、分離方法條件要溫和使目的蛋白質(zhì)和酶的活性和功能不受損害盡量盡早除去各種雜質(zhì)、脂類(lèi)、核酸及毒素。設(shè)法除去變性的和不需要的蛋白質(zhì)。設(shè)法提高目的蛋白質(zhì)的含量或生物活性。分離純化要在緩沖溶液中進(jìn)行。建立靈敏、特異、精確的檢測(cè)方法。根據(jù)其存在的部位、分子結(jié)構(gòu)及溶解性質(zhì)的不同選擇不同的提取方法。3實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行蛋白質(zhì)鹽析沉淀時(shí)應(yīng)用最多、最廣的是硫酸銨，它的優(yōu)缺點(diǎn)是什么：優(yōu)點(diǎn)：它在水中溶解度大；其溶解度受溫度的影響較?。粌r(jià)廉易得；不易引起蛋白質(zhì)變性；分離效果

6、比其它鹽好。缺點(diǎn)：緩沖能力差；NH4+離子會(huì)干擾蛋白氮的測(cè)定。4核酸提取要注意的原則：防止核酸酶的降解: 在提取分離核酸時(shí)要降低核酸酶的活性，通常加入抑制劑和去激活劑。防止化學(xué)因素的降解: 避免強(qiáng)酸強(qiáng)堿。防止物理因素的降解: 核酸大分子、高溫、機(jī)械作用等均可以破壞核酸分子的完整性，因此核酸提取適于在低溫及避免劇烈攪拌等條件下進(jìn)行。第二章 層析分離技術(shù)一、名詞解釋1.層析分離技術(shù)：是利用混合物中各組分的物理、化學(xué)性質(zhì)（分子的形狀和大小、分子的極性、吸附力、分子的親和力、分子的分配系數(shù)等）的不同，使各組分以不同程度分布在兩相中，當(dāng)流動(dòng)相流過(guò)固定相時(shí)，各組分以不同的速度移動(dòng)，而達(dá)到分離的技術(shù)。 2.

7、吸附層析：是利用吸附劑對(duì)不同物質(zhì)的吸附力不同而使混合物中的各組分分離的技術(shù)。 3.解吸作用：在一定條件下，被吸附物離開(kāi)吸附劑 表面的現(xiàn)象稱(chēng)為解吸作用4.洗脫：加入解吸附劑，使物質(zhì)從固定相上分離下來(lái)的方法。 5.分配層析：是利用各組分的分配系數(shù)不同而予以分離的方法。 6.分配系數(shù)：是一種溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中溶解達(dá)到平衡時(shí)，該溶質(zhì)在兩相溶劑中的濃度比值。 7. 薄層層析：是將固定相的支持劑均勻地鋪在支持板上，成為薄層，把樣品點(diǎn)在薄層上，用適當(dāng)?shù)娜軇┱归_(kāi)，從而使樣品中各組分達(dá)到分離的一種層析技術(shù)。8. 氣相層析：是一種以氣體為流動(dòng)相的一種高效、快速的層析分離技術(shù)。 9. 擔(dān)體：是固定相的“載體

8、”或“固體支持物”，大多為多孔性固體顆粒。 10. 死時(shí)間：從進(jìn)樣到出現(xiàn)空氣峰最高峰的時(shí)間。 11.保留時(shí)間：從進(jìn)樣到出現(xiàn)色譜峰最高點(diǎn)所需的時(shí)間。 12.校正保留時(shí)間：指樣品組分的保留時(shí)間與進(jìn)樣到出現(xiàn)空氣峰最高值的時(shí)間之差。 13. 死體積 ：指從進(jìn)樣到出現(xiàn)空氣峰最高值時(shí)所通過(guò)的載氣體積 14.保留體積：指從進(jìn)樣到出現(xiàn)組分濃度最高峰時(shí)所通過(guò)的載氣體積 15.校正保留體積：指保留體積與死體積之差 16.定量校正因子：是單位峰面積中某物質(zhì)的量 17.離子交換層析：是利用離子交換劑上可解離基團(tuán)(活性基團(tuán))對(duì)各種離子的親和力不同而達(dá)到物質(zhì)分離的一種層析分離技術(shù) 18.凝膠層析：又稱(chēng)之凝膠過(guò)濾，分子篩層

9、析或排阻層析。是用高交聯(lián)度的固體凝膠按照物質(zhì)分子量大小進(jìn)行分離的技術(shù)。 19.洗脫體積：某一組分物質(zhì)從加樣到層析最高峰出現(xiàn)時(shí)所需的洗脫液總體積。20.親和層析：是利用生物分子間所具有的專(zhuān)一而又可逆的親和力而使生物分子分離純化的技術(shù)。 21.配基：又稱(chēng)為“配體”。指親和層析中作為固定相的一方。二、填空1. 層析分離技術(shù)按流動(dòng)相狀態(tài)可分為 液相 層析和 氣相 層析；按分離過(guò)程所主要依據(jù)的物理化學(xué)性質(zhì)分為 吸附層析、分配層析、離子交換 層析、 分子排阻(凝膠過(guò)濾) 層析、 親和 層析等。2. 洗脫方法根據(jù)所用洗脫劑不同分為 溶劑洗脫法 、 置換法(取代法) 、 前緣分析法(前緣洗脫法) 。3. .聚

10、酰胺薄膜層析只適用于 極性分子 的分離。4. 紙上層析是以濾紙纖維 的 結(jié)合水 為固定相，以 有機(jī)溶劑 作為流動(dòng)相，展開(kāi)時(shí)樣品中各物質(zhì)在兩相之間不斷地進(jìn)行分配，由于各物質(zhì)有不同的 分配系數(shù) 、 移動(dòng)的速率 也就不同，從而達(dá)到分離的目的。5. 溶質(zhì)在濾紙上移動(dòng)的速度可用Rf值表示，Rf = 溶質(zhì)斑點(diǎn)中心移動(dòng)的距離溶劑前沿移動(dòng)的距離 ，Rf值決定于 分配 系數(shù)，不同的物質(zhì)在兩相間的 分配系數(shù) 不同，Rf值也不同，由此可根據(jù)Rf值的大小對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性分析。6. 薄層層析中用的薄層板有 硬板(濕板) 與 軟板(干板) 之分，常用的薄層板制作方法有浸涂 法、 噴涂 法、 傾斜涂布法 法和推鋪法 法。7.

11、 氣相層析根據(jù)其固定相的不同可分為 氣固 層析和 氣液 層析兩種。8. 氣相層析具有 分辨率高 、 分析速度快 、 靈敏度高 和 應(yīng)用范圍廣 等特點(diǎn)。9. 氣固層析的固定相為 固體 ，其分離的主要依據(jù)是 吸附劑 對(duì) 被吸附物 的 吸附力 不同，所以又稱(chēng)為 氣相吸附 層析；氣液層析的固定相為 液體 ，其分離的主要依據(jù)是 分配系數(shù) 的不同，又稱(chēng)為 氣相分配 層析。10. 氣相層析的流動(dòng)相是 氣體 ，稱(chēng)為 載氣 ，常用的有 氫氣 、 氮?dú)?、 氦氣 、 氬氣 等。載氣的選擇主要根據(jù)所使用的 檢測(cè)器 和 載體氣流 決定。11. 紅色擔(dān)體用于分離 非極性 和 弱極性 物質(zhì)；白色擔(dān)體用于分離 極性 物質(zhì)1

12、2. 氣相層析時(shí)，樣品在進(jìn)柱前必須變?yōu)闅怏w，有些物質(zhì)難于氣化必須先將其轉(zhuǎn)變?yōu)?易揮發(fā) 的衍生物再進(jìn)行氣相層析。13. 進(jìn)行氣相層析時(shí)，應(yīng)注意控制好 氣體流量 、 進(jìn)樣溫度 、 進(jìn)樣時(shí)間 和進(jìn)樣量。14. 熱導(dǎo)池檢測(cè)器屬于 濃度型檢測(cè)器 。氫焰檢測(cè)器屬于 質(zhì)量型檢測(cè)器 ，其靈敏度比熱導(dǎo)池檢測(cè)器高 倍左右，是目前應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)器之一。15. 離子交換層析的操作過(guò)程包括上柱(加樣) 、 洗脫 和 收集 、樹(shù)脂再生三大步驟。16. 凝膠裝柱時(shí)必須注意柱中不能有 氣泡 或 裂紋 存在三、問(wèn)答題： 1. 選擇吸附劑時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題：吸附劑應(yīng)有適當(dāng)?shù)奈搅捅M量大的表面積；對(duì)被分離物有足夠的分辨率，對(duì)不同物

13、質(zhì)的吸附力不同；對(duì)被吸附物的吸附應(yīng)是可逆的，一定條件下可解吸、洗脫；不溶于所用的溶劑中，不引起被吸附物化學(xué)變化；顆粒均勻，操作時(shí)穩(wěn)定，不會(huì)破裂。 2. 選擇洗脫劑時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題：不與吸附劑起化學(xué)反應(yīng)，且不使吸附劑溶解；對(duì)樣品的各組分溶解度大、粘度小、流動(dòng)性好；不與各組分起化學(xué)反應(yīng)，且易與被洗脫組分分開(kāi)；純度高，無(wú)雜質(zhì)影響。3. 紙層析時(shí)對(duì)濾紙的選擇有何要求：濾紙的厚薄程度、纖維的松緊度不同，使與濾紙纖維結(jié)合的水量不一樣，兩相的體積比也不同。得到的Rf 值也不相同。濾紙中的雜質(zhì)也會(huì)影響Rf 值。因此，層析時(shí)對(duì)濾紙的要求較高：由高純度的棉花制成，質(zhì)地均一、厚薄一致、纖維松緊度適中、有一定的機(jī)械強(qiáng)度

14、。 4. 在紙層析前，濾紙和層析裝置為什么要先用層析溶劑平衡：層析前濾紙與層析裝置用溶劑系統(tǒng)的蒸氣飽和。不平衡時(shí)濾紙會(huì)從溶劑中吸收水分，溶劑也會(huì)從濾紙表面揮發(fā)，使溶劑系統(tǒng)的組成發(fā)生改變，導(dǎo)致溶劑前沿不齊，影響層析效果和R值。5. 擔(dān)體應(yīng)具備哪些條件：表面積大；孔徑分布較均勻；表面無(wú)催化或吸附性能；與固定液或被分析的物質(zhì)不起化學(xué)反應(yīng)；熱穩(wěn)定性好；有較好的機(jī)械強(qiáng)度。 6. 離子交換劑選擇時(shí)應(yīng)考慮哪些因素：樣品離子帶何種電荷 陰離子只能被陰離子交換劑吸附，陽(yáng)離子只能被陽(yáng)離子交換劑吸附；離子的濃度 濃度大時(shí)，選擇交換容量大的交換劑型號(hào)被分離物質(zhì)相對(duì)分子量的大小 分子量大時(shí)要求交聯(lián)度低，分子量小時(shí)選擇較

15、高交聯(lián)度更好；離子與交換劑親和力的大小 選擇不同型號(hào)的交換劑，既要考慮吸附，還要考慮便于洗脫；樣品物質(zhì)及交換樹(shù)脂的物理化學(xué)特性 根據(jù)其對(duì)酸、堿、溫度的敏感情況，控制好環(huán)境條件。7. 試述凝膠層析的基本原理： 凝膠是一種多微孔的多孔徑網(wǎng)狀支持物組成進(jìn)行分子過(guò)濾的分子篩；物質(zhì)分子在層析柱中的運(yùn)動(dòng)有重力的垂直方向運(yùn)動(dòng)和無(wú)定向擴(kuò)散的布郎運(yùn)動(dòng)；大分子物質(zhì)不能進(jìn)入微孔在凝膠空隙間快速流出層析柱；小分子能夠進(jìn)入微孔，因而在凝膠中許多孔中穿行，因通過(guò)的距離長(zhǎng)，后流出層析柱；分子直徑越小能夠進(jìn)入的孔越多，流出層析柱越慢；根據(jù)分子篩這一原理可依據(jù)物質(zhì)分子直徑的大小按照由大到小的順序流出層析柱而得到分離。因此，它是

16、一個(gè)反篩。第三章 電泳技術(shù)一、名詞解釋?zhuān)?. 電泳：是帶電粒子在電場(chǎng)中向著與本身所帶電荷相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。 2. 泳動(dòng)度：泳動(dòng)度()帶電顆粒在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的泳動(dòng)速度3. 薄層電泳：是將支持物與緩沖液調(diào)制成適當(dāng)厚度的薄層而進(jìn)行電泳的技術(shù) 4. 凝膠電泳：是以各種具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的多孔凝膠作為支持物的電泳技術(shù)。 5. 等電聚集電泳：是在電泳系統(tǒng)中，加進(jìn)兩性電解質(zhì)載體。當(dāng)通以直流電時(shí)，兩性電解質(zhì)載體即形成一個(gè)由陽(yáng)極到陰極連續(xù)增高的pH梯度。當(dāng)不同等電點(diǎn)的分子進(jìn)入這個(gè)體系時(shí)，各自聚集到與其等電點(diǎn)相當(dāng)?shù)膒H位置上，從而使不同等電點(diǎn)的分子得以分離的電泳技術(shù)。二、填空1. 按所使用的支持體的不同分為 紙

17、電泳、 薄層 電泳、 薄膜 電泳、 凝膠 電泳和 等電聚焦 電泳。按支持介質(zhì)的形狀分為 平板 電泳和 柱狀 電泳。2. 分子在電場(chǎng)中移動(dòng)的方向決定于所帶 電荷 的種類(lèi)，帶正電荷的向的 負(fù)極 移動(dòng)；帶負(fù)電荷的向 正極 移動(dòng)； 靜電荷為零 的分子在電場(chǎng)中不移動(dòng)。分子在電場(chǎng)中移動(dòng)的速度主要決定于于顆粒所帶 凈電荷的量 ，同時(shí)受分子的 大小 和 形狀 的影響。3. 影響電泳的外界因素有電場(chǎng)強(qiáng)度 、 溶液的pH值 、 溶液的離子強(qiáng)度 、 電滲 以及緩沖液的粘度和溫度。4. 凝膠電泳與其他電泳的主要區(qū)別，在于凝膠電泳同時(shí)具有電荷效應(yīng) 和 分子篩效應(yīng)的雙重作用，具有很高的 篩選效率 。5. 聚丙烯酰胺凝膠電

18、泳按其凝膠系統(tǒng)的組成可分成 連續(xù) 凝膠電泳 、 不連續(xù) 凝膠電泳、 梯度 凝膠電泳和 SDS 凝膠電泳。6. 不連續(xù)電泳的凝膠由上至下可分為 樣品膠 、 濃縮膠 、 分離膠 。7. 蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠電泳中，其遷移率主要取決于它 所帶的電荷 以及分子的大小和形狀 。在聚丙烯酰胺系統(tǒng)中加入SDS，則蛋白質(zhì)分子的遷移率主要取決于其 相對(duì)分質(zhì)量 ，而與它的 所帶的電荷 及 分子的形狀無(wú)關(guān)。8. 在聚丙烯酰胺凝膠不連續(xù)電泳系統(tǒng)中不僅具有 電荷效應(yīng) 效應(yīng)和分子篩效應(yīng) 效應(yīng)，而且還具有 濃縮效應(yīng) 效應(yīng)，因此比連續(xù)電泳系統(tǒng)具有更高的分辨率和區(qū)帶清晰度。三、問(wèn)答題1. 試述聚丙烯酰胺凝膠具有哪些的優(yōu)點(diǎn)：（

19、）在一定濃度時(shí)，凝膠透明，有彈性，機(jī)械性能好；(2)化學(xué)性能穩(wěn)定，與被分離物不起化學(xué)反應(yīng)，在很多溶劑中不溶；(3)對(duì)pH和溫度變化較穩(wěn)定；(4)幾乎無(wú)吸附和電滲作用，只要Acr純度高，操作條件一致，則樣品分離重復(fù)性好；(5)樣品不易擴(kuò)散，且用量少，其靈敏度可達(dá)10-6g；(6)凝膠孔徑可調(diào)節(jié)，根據(jù)被分離物的分子量選擇合適的濃度,通過(guò)改變單體及交聯(lián)劑的濃度調(diào)節(jié)凝膠的孔徑；(7)分辨率高,尤其在不連續(xù)凝膠電泳中，集濃縮、分子篩和電荷效應(yīng)為一體。因而較醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂糖電泳等有更高的分辨率。 2. 等電聚集電泳具有哪些優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 分辨率高；隨電泳時(shí)間增加區(qū)帶越來(lái)越窄；樣品加在任何部位都可以

20、聚焦到等電點(diǎn)pH位置；很稀的樣品都可分離，且重現(xiàn)性好；可用于測(cè)定多肽或蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。缺點(diǎn)：要求使用無(wú)鹽溶液，但某些蛋白質(zhì)在無(wú)鹽溶液中溶解度低，易產(chǎn)生沉淀。對(duì)一些在pI不溶解或發(fā)生變性的蛋白質(zhì)不適用。 3. 對(duì)載體兩性電解質(zhì)有什么要求：在pI處必須有足夠的緩沖能力，以便控制pH梯度。在pI處必須有足夠的電導(dǎo)，以便使一定電流通過(guò)。而且，各不同pI值的載體有相同的電導(dǎo)系數(shù)，使整個(gè)體系中電導(dǎo)均勻，獲得均勻的電場(chǎng)。相對(duì)分子質(zhì)量要小，以便在聚焦后能容易地和蛋白質(zhì)組分分開(kāi)?；瘜W(xué)組分不同于被分離物質(zhì)，以免干擾測(cè)定。不與被分離物質(zhì)起化學(xué)反應(yīng)，也不會(huì)引起被分離物質(zhì)變化。 第四章 離心分離技術(shù)一、名詞解釋1. 離

21、心分離技術(shù)：是借助于離心機(jī)旋轉(zhuǎn)所產(chǎn)生的離心力，根據(jù)物質(zhì)顆粒的沉降系數(shù)、質(zhì)量、密度、浮力等因素的不同而使物質(zhì)分離的技術(shù)。 2. 沉降系數(shù)：指在單位離心作用下，粒子的沉降速度。單位：S ( Sverdberg ), 1S = 1×1013cm/s 3. 差速離心：采用不同的離心速度和離心時(shí)間，使沉降速度不同的顆粒分批分離的方法。 4. 密度梯度離心：是樣品在密度梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心，使沉降系數(shù)比較接近的物質(zhì)得以分離的一種區(qū)帶分離方法。 5. 等密度梯度離心：是不同的顆粒在離心力的作用下，不同浮力密度的物質(zhì)顆粒向下沉降或向上漂浮，一起移動(dòng)到它們各自浮力密度恰好相等的位置(等密度點(diǎn))，形成區(qū)帶

22、的方法。(又稱(chēng)為平衡等密度離心)。 6. 相對(duì)離心力 ( RCF )：指顆粒所受的離心力(c)與地心引力(重力Fg )之比二、填空1. 通常按離心機(jī)轉(zhuǎn)速的不同，將其分為 常速 離心機(jī) 、 高速 離心機(jī)和 超速 離心機(jī)三種。P812. 常速離心機(jī)的轉(zhuǎn)速通常在 8000 r/min以?xún)?nèi)，高速離心機(jī)的轉(zhuǎn)速在 10000-25000 r/min，轉(zhuǎn)速大于 25000 r/min的離心機(jī)稱(chēng)為超速離心機(jī)。3. 在超速離心中，離心方法可分為 差速離心 、 密度梯度離心 和 等密度梯度離心 。P824. 物質(zhì)顆粒在離心場(chǎng)中所受離心力( Fc )的大小，決定于顆粒的 質(zhì)量（m） 和離心加速度 離心加速度（c）

23、。三、問(wèn)答題 1.根據(jù)離心方法的不同，離心時(shí)間所表達(dá)的含義有什么區(qū)別：離心時(shí)間是影響離心效果的主要因素之一，其概念按離心方法不同有所差別。差速離心的離心時(shí)間：指某種顆粒完全沉降到離心管底的時(shí)間。又稱(chēng)澄清時(shí)間、沉降時(shí)間。密度梯度離心的離心時(shí)間：指形成界限分明的區(qū)帶的時(shí)間。等密度梯度離心的離心時(shí)間：指顆粒完全到達(dá)等密度點(diǎn)的平衡時(shí)間。第五章 化學(xué)檢測(cè)技術(shù)一、名詞解釋1. 化學(xué)檢測(cè)技術(shù)：是根據(jù)物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性、定量測(cè)定的方法 2. 蛋白質(zhì)的免疫化學(xué)檢測(cè)：利用抗原與抗體之間特異的結(jié)合而對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行定性定量分析的技術(shù)稱(chēng)為蛋白質(zhì)的免疫化學(xué)檢測(cè)技術(shù)。 3. 抗原：能刺激動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生抗體，并能特異

24、地與這種抗體結(jié)合的物質(zhì)。 4. 抗體：是在動(dòng)物體內(nèi)對(duì)于抗原的反應(yīng)而產(chǎn)生的能特異性地與這種抗原結(jié)合的一類(lèi)免疫球蛋白。 5. 抗原決定簇：蛋白質(zhì)的抗原特性是由蛋白質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)決定的，蛋白質(zhì)多肽鏈的一部分或某些特定的基團(tuán)可與抗體結(jié)合，稱(chēng)為抗原決定簇或抗原的決定基。 6. 凝集反應(yīng)：細(xì)胞性抗原與相應(yīng)的抗體相混合時(shí)，就會(huì)凝集成團(tuán)，這種抗原-抗體反應(yīng)稱(chēng)為凝集反應(yīng)。 7. 抗血清的效價(jià)：免疫血清在一定量抗原存在下，能顯現(xiàn)明確的沉淀反應(yīng)的最大稀釋度的倒數(shù)。 8. 抗體的沉淀反應(yīng)：將可溶性抗原(蛋白質(zhì))與相應(yīng)抗體混合，當(dāng)兩者的比例適當(dāng)，并有適當(dāng)?shù)柠}類(lèi)存在時(shí)，可形成沉淀，這種現(xiàn)象叫抗體的沉淀反應(yīng)。9. 免疫擴(kuò)散：

25、是利用蛋白質(zhì)在半固體基質(zhì)上的擴(kuò)散作用，使抗原和抗體在濃度比例合適的部位產(chǎn)生沉淀帶或沉淀環(huán)，從而檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法。10. 免疫電泳：將免疫擴(kuò)散和電泳技術(shù)結(jié)合起來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)的技術(shù)。 二、填空1. 糖類(lèi)的化學(xué)檢測(cè)主要是利用游離羰基的還原性與試劑進(jìn)行氧化還原反應(yīng)而進(jìn)行測(cè)定的。2. 糖類(lèi)的化學(xué)檢測(cè)中，最常用的試劑是 斐林 試劑，其基本組成是由A液和B液兩液組成，A液的主要成分是 CuSO4 ，B液主要由 酒石酸鉀鈉 和 NaOH 組成。3. 糖液滴入斐林試劑中時(shí)，酒石酸鉀鈉銅是一種 氧化 劑，可與還原糖的游離 羰基 發(fā)生 氧化還原 反應(yīng)，生成 紅 色的 氧化亞銅 沉淀。4. 蛋白質(zhì)的含氮量幾乎是恒定的，

26、平均含氮量為16%，只要測(cè)出蛋白質(zhì)含氮量，乘以 6.25 ，即為蛋白質(zhì)的含量。5. 在蛋白質(zhì)是由多種 氨基酸 以 肽鍵 相互聯(lián)接而成的，在一級(jí)結(jié)構(gòu)中可發(fā)現(xiàn)，它的主鏈中， 肽 鍵占 1/3 ，沒(méi)有任何一種物質(zhì)含 肽 鍵量如此豐富。因此，可用一些該鍵所能發(fā)生的反應(yīng)，對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。6. 凱氏定氮的主要步驟有： 消化 、 蒸餾 、 滴定 與 計(jì)算 。7. 雙縮脲反應(yīng)是指蛋白質(zhì)在 堿性 溶液中與Cu2+ 結(jié)合，生成 紫紅色 絡(luò)合物的反應(yīng)。8. 一般氨基酸與茚三酮反應(yīng)生成 紫色 化合物，而亞氨基酸反應(yīng)后生成 黃色 化合物。9. 抗體是一類(lèi) 免疫球蛋白 ，由兩條 重鏈 和兩條 輕鏈 通過(guò)多個(gè) 二硫鍵 連

27、接成 Y 型，抗體分子的 N 端是抗體與抗原決定簇的結(jié)合部位，它決定了抗體的 特異性 ，當(dāng)抗原決定簇與抗體的 N 端結(jié)合時(shí)，產(chǎn)生變構(gòu)效應(yīng)，使 C 端的某些部位結(jié)構(gòu)改變，而產(chǎn)生一系列的 免疫效應(yīng) 。10. 利用免疫化學(xué)檢測(cè)蛋白質(zhì)的方法主要有 凝集 反應(yīng)和 沉淀 反應(yīng)。11. 根據(jù)核酸中所含的磷及戊糖的化學(xué)性質(zhì)可用 定磷法 、二苯胺法 和 地衣酚法等進(jìn)行檢測(cè)。12. DNA中脫氧核糖在酸性環(huán)境中與二苯胺試劑一起加熱，產(chǎn)生藍(lán)色 反應(yīng)。在595nm處有最大吸收峰，通過(guò)測(cè)定光密度、光吸收值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上可查出DNA含量。13. RNA中的核糖在濃鹽酸和三氯化鐵存在下，與 地衣酚 在100共熱，產(chǎn)生 綠色

28、 物質(zhì)，它在 670 nm處有吸收高峰，因此，該反應(yīng)檢測(cè)和定量RNA。第六章 光學(xué)檢測(cè)技術(shù)一、名詞解釋 1. 光學(xué)檢測(cè)技術(shù)：是利用物質(zhì)所具有的各種光學(xué)性質(zhì)，對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性、定量及結(jié)構(gòu)分析的技術(shù) 2. 旋光檢測(cè)技術(shù)：利用旋光計(jì)測(cè)量出旋光物質(zhì)(光學(xué)活性物質(zhì))對(duì)偏振光放置角度的方向和大小。從而進(jìn)行定性與定量分析的技術(shù)。 3. 分光光度檢測(cè)：又稱(chēng)分子吸收光譜檢測(cè)。是利用物質(zhì)分子所特有的吸收光譜而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性、定量測(cè)定的檢測(cè)技術(shù)。二、填空1. 光學(xué)檢測(cè)技術(shù)多種多樣，生化領(lǐng)域常用的有 旋光檢測(cè) 技術(shù) 、 熒光檢測(cè) 技術(shù)和 分光光度檢測(cè) 技術(shù)。2. 分子中具有不對(duì)稱(chēng)碳原子的物質(zhì)能夠使偏振光的偏振面產(chǎn)生 旋

29、轉(zhuǎn) 作用，即旋光作用。3. 根據(jù)物質(zhì)吸收光譜的頻率范圍不同分光光度檢測(cè)可分為：紫外分光光度檢測(cè) 、 可見(jiàn)光分光光度檢測(cè) 和 紅外光分光光度檢測(cè) 。4. 核酸分子由于含有 共軛雙鍵 ，所以有強(qiáng)烈的紫外光吸收性質(zhì)，其最大吸收高峰為 260 nm；蛋白質(zhì)由于含有 苯環(huán) 等紫外吸收基團(tuán)，故也有紫外光吸收性質(zhì)，但其吸收高峰在 280 nm處。三、問(wèn)答題 1. 在生化領(lǐng)域中，應(yīng)用熒光檢測(cè)的方法在哪些：在生化領(lǐng)域中，應(yīng)用熒光檢測(cè)的方法分三類(lèi)：直接用熒光性物質(zhì)檢測(cè)利用非熒光性物質(zhì)與熒光試劑反應(yīng)，生成熒光性物質(zhì)在熒光性物質(zhì)溶液中加入消光物質(zhì)第七章 氣體檢測(cè)技術(shù)一、名詞解釋?zhuān)?氣體檢測(cè)技術(shù)：是利用物質(zhì)在生化反應(yīng)或

30、化學(xué)反應(yīng)中放出或吸收的氣體的性質(zhì)，通過(guò)測(cè)定氣體量的變化而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析的技術(shù)。二、填空：應(yīng)用于氣體檢測(cè)技術(shù)的儀器主要有兩種：華勃氏(Warbury)呼吸儀和范·斯萊克(Van Slyke)檢測(cè)儀。前者主要用于測(cè)O2的吸收量或CO2的放出量；后者主要用于檢測(cè)-氨基酸與亞硝酸反應(yīng)產(chǎn)生的N2，從而計(jì)算氨基酸含量。第八章 放射性同位素檢測(cè)技術(shù)一、名詞解釋1. 放射性同位素檢測(cè)技術(shù)：是利用放射性同位素研究物質(zhì)的運(yùn)動(dòng)和變化的技術(shù)。 2. 同位素：凡是原子序數(shù)相同，而質(zhì)量數(shù)不同的元素稱(chēng)為同位素。即原子核內(nèi)質(zhì)子數(shù)相同，而中子數(shù)不同的元素。 3. 衰變：放射性同位素的原子核自發(fā)地按一定規(guī)律變

31、化，同時(shí)放出各種射線(xiàn)的過(guò)程稱(chēng)為衰變或蛻變。 4. 放射性半衰期：指放射性元素的原子核數(shù)目因衰變而減少一半所需的時(shí)間。5. 放射性強(qiáng)度：指單位時(shí)間內(nèi)原子核衰變的數(shù)目。單位：居里(Curie，Ci)6. 比放射性：指單位質(zhì)量(克)或體積(ml)樣品在單位時(shí)間內(nèi)原子核衰變的數(shù)目。 7. 放射自顯影技術(shù) ( autoradiography )：是利用樣品中放射性物質(zhì)放出的射線(xiàn)，作用于核子乳膠片，而在膠片上顯影，從而探測(cè)放射性物質(zhì)的位置和分布情況的技術(shù)。 8. 本底值：指未加樣品前空白測(cè)量所得 (來(lái)自?xún)x器本身、宇宙射線(xiàn)或其它放射線(xiàn)引起) 的計(jì)數(shù)。 9. 熄滅(猝死)：是液體閃爍測(cè)量系統(tǒng)內(nèi)使射線(xiàn)探測(cè)效率下

32、降的現(xiàn)象。二、填空1. 同位素分為兩種：一種是原子核結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，不會(huì)自行發(fā)生變化的稱(chēng) 穩(wěn)定 同位素；另一種其原子核結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，會(huì)自行地發(fā)生變化，不斷地放出各種射線(xiàn)，最后衰變?yōu)榱硪环N元素，這種同位素是 不穩(wěn)定 同位素，通常稱(chēng)為放射性同位素。2. 放射性同位素衰變過(guò)程中放射出的射線(xiàn)主要有三種： 射線(xiàn)即粒子 ，帶正電荷； 射線(xiàn)即 粒子 ，帶負(fù)電荷； 射線(xiàn)，即不帶電荷的 光子 。3. 生化領(lǐng)域使用的放射性同位素，多數(shù)是發(fā)射射線(xiàn)或射線(xiàn)，或同時(shí)發(fā)射射線(xiàn)和射線(xiàn)的同位素。4. 放射性同位素危害人體的途徑有 內(nèi)照射 和 外照射 兩種。5. 檢測(cè)放射性的方法很多，常用的有： 放射自顯影 技術(shù)、 蓋革計(jì)數(shù)管 探測(cè)和

33、閃爍計(jì)數(shù)器 探測(cè)。三、問(wèn)答題簡(jiǎn)單說(shuō)明放射性同位素?fù)饺爰捌浞椒ǎ悍派湫酝凰氐膿饺胧侵阜派湫酝凰赝ㄟ^(guò)一定方法與物質(zhì)分子結(jié)合，成為分子結(jié)構(gòu)的一部分的過(guò)程。摻入方法：主要有三種 化學(xué)合成法 用化學(xué)方法將其引入到物質(zhì)分子中。生物合成法 在生物體內(nèi)，經(jīng)新陳代謝引入到物質(zhì)分子中。如，加入培養(yǎng)基中；酶促合成法 利用酶的催化作用，引入到物質(zhì)分子中。第九章 生物檢測(cè)技術(shù)一、名詞解釋1. 生物檢測(cè)技術(shù)：是利用生物體對(duì)被檢測(cè)物質(zhì)的特有反應(yīng)而鑒定被檢物質(zhì)的質(zhì)量和功效的方法。2. 半致死量(LD50)：指被試驗(yàn)動(dòng)物中死亡率達(dá)50%時(shí)的藥物劑量。 3. 局部刺激性試驗(yàn)：是將被檢藥物注射進(jìn)生物體內(nèi)，觀察在注射部位是否出現(xiàn)

34、炎癥或產(chǎn)生過(guò)敏反應(yīng)等局部刺激現(xiàn)象。 4. 溶血試驗(yàn)：是指檢測(cè)藥物是否引起紅血細(xì)胞膜破裂而釋放出血紅蛋白。 5. 熱原試驗(yàn)：指檢測(cè)藥物中有沒(méi)有使動(dòng)物體溫升高的致熱物質(zhì)存在。 6. 過(guò)敏性試驗(yàn)：指檢測(cè)藥物中有無(wú)引起過(guò)敏反應(yīng)的物質(zhì)存在的一種方法。 7. 變異原試驗(yàn)：是檢驗(yàn)藥物或食物中有無(wú)引起生物產(chǎn)生變異的物質(zhì)存在的試驗(yàn)。 8. 變異原：引起生物明顯地產(chǎn)生變異的物質(zhì)。 9. 生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)是對(duì)生物的生長(zhǎng)繁殖有促進(jìn)作用或不可欠缺的物質(zhì)。如，維生素、氨基酸、激素等。：二、填空1生物檢測(cè)的范圍主要是：生物效價(jià) 測(cè)定和 安全性 試驗(yàn)。2.效價(jià)是指某一物質(zhì)引起 生物反應(yīng) 的 功效 單位。 生物反應(yīng) 是指生物體對(duì)一

35、物質(zhì)的特有反應(yīng)。3安全性試驗(yàn)主要包括 毒性試驗(yàn) 、 局部刺激性實(shí)驗(yàn) 、 溶血實(shí)驗(yàn) 、 熱原實(shí)驗(yàn) 、 過(guò)敏試驗(yàn) 和 變異原實(shí)驗(yàn) 。4過(guò)敏反應(yīng)是一種 變態(tài) 反應(yīng)。指動(dòng)物非經(jīng)口注入異種蛋白質(zhì)后所表現(xiàn)的一種 反應(yīng)性 增高現(xiàn)象。引起過(guò)敏反應(yīng)的物質(zhì)稱(chēng)為 致敏原 。5抗生素可用 化學(xué) 檢測(cè)法、 光學(xué) 檢測(cè)法和 生物 檢測(cè)法。6抗生素的生物檢測(cè)法是利用抗生素對(duì)特定 微生物 的生長(zhǎng)起 抑制作用而進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)。7抗生素的生物檢測(cè)方法主要有 稀釋法 和 擴(kuò)散法 兩種。8生長(zhǎng)促進(jìn)物質(zhì)的生物檢測(cè)，一般以 微生物 作為試驗(yàn)材料。第十章 核磁共振檢測(cè)技術(shù)一、名詞解釋1核磁共振：具有磁距的原子核在高強(qiáng)度磁場(chǎng)作用下，可吸收適

36、宜頻率的電磁輻射，由低能態(tài)躍遷到高能態(tài)的現(xiàn)象。不同分子中原子核的化學(xué)環(huán)境不同， 將會(huì)有不同的共振頻率，產(chǎn)生不同的共振譜。 2齊曼效應(yīng)：具有核自旋性質(zhì)的原子核在磁場(chǎng)的作用下，這些原子核的自旋狀態(tài)可分為不同的能級(jí)的現(xiàn)象。 3化學(xué)位移：當(dāng)相同的原子核處在分子中的不同基團(tuán)時(shí)，其所吸收的電磁波頻率稍有不同的現(xiàn)象。 4自旋偶合：不同原子自旋之間產(chǎn)生的互相干擾現(xiàn)象，也稱(chēng)為自旋-自旋偶合。 5自旋分裂( spin-spin splitting )：由于自旋偶合的結(jié)果，使共振圖譜由單峰變?yōu)槎嘀胤宓默F(xiàn)象。 6自旋偶合強(qiáng)度：即原子核自旋的相互干擾的強(qiáng)度。自旋偶合常數(shù)(J )表示。 7自旋解偶合( spin deco

37、upling 即 自旋去偶 )：指核A的自旋偶合對(duì)核B的波譜的影響，由于對(duì)核A進(jìn)行共振頻率的輻射而被消除。 8弛豫現(xiàn)象：指高能級(jí)的核，回到低能級(jí)而放出能量的過(guò)程。二、填空1磁共振技術(shù)主要包括 核磁共振 和 電子自旋共振。2核磁共振的基本原理主要包括 変曼效應(yīng) 、 化學(xué)移位 、自旋偶合和 弛豫現(xiàn)象 。3弛豫過(guò)程有兩種：放出的能量以熱的形式散發(fā)在固體晶格或液體溶劑之中，稱(chēng)為 自旋-晶格 弛豫。放出的能量轉(zhuǎn)移到另一個(gè)自旋的原子核中，稱(chēng)為 自旋-自旋 弛豫。三、問(wèn)答題： 1如何進(jìn)行共振圖譜的解析：共振圖譜的解析主要抓住四個(gè)方面：根據(jù)磁場(chǎng)強(qiáng)度和照射電磁波的頻率，確定是否含有某種元素。一定強(qiáng)度的外加磁場(chǎng)中

38、，不同原子核共振吸收的電磁波頻率各不相同，容易做出判斷；根據(jù)化學(xué)位移（值）判斷該元素在哪一個(gè)基團(tuán)中 因不同基因中所受屏蔽作用不同，使共振吸收的電磁波頻率稍有不同?？蓪D譜位置與文獻(xiàn)中記載的各基因的化學(xué)位移（值）作比較而確定基團(tuán)名稱(chēng)；根據(jù)圖譜的自旋分裂情況以及自旋偶合常數(shù)（J）的值，得知鄰近的基團(tuán)結(jié)構(gòu)；測(cè)定圖譜的峰面積，通過(guò)面積比得知元素的數(shù)目或確定化合物的含量。第十一章 酶技術(shù)一、名詞解釋1.操縱子：在DNA分子中按一定的次序排列的調(diào)節(jié)基因、起動(dòng)基因、操縱基因和受它控制的若干個(gè)結(jié)構(gòu)基因一起被稱(chēng)為操縱子。 2.產(chǎn)物阻遏作用：指酶的反應(yīng)產(chǎn)物或代謝途徑的末端產(chǎn)物對(duì)酶合成的阻遏作用。 3.固定化酶：指

39、固定在載體上，在一定的空間范圍內(nèi)進(jìn)行催化反應(yīng)的酶。 4.固定化細(xì)胞：固定在載體上，在一定的空間范圍內(nèi)進(jìn)行生命的活動(dòng)稱(chēng)為固定化細(xì)胞。又稱(chēng)為固定化活細(xì)胞、固定化增殖細(xì)胞或固定化完整細(xì)胞。 5.固定化原生質(zhì)體：是固定在載體上，在一定的空間范圍內(nèi)進(jìn)行新陳代謝的原生質(zhì)體。 6.交聯(lián)固定化技術(shù)：借助雙功能團(tuán)試劑使酶蛋白分子之間發(fā)生交聯(lián)，可制成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的固定化酶。此固定化法稱(chēng)為交聯(lián)固定化技術(shù)。 7.酶分子修飾：通過(guò)各種方法使酶分子結(jié)構(gòu)發(fā)生某些改變。從而改變酶的某些特性和功能的過(guò)程，稱(chēng)為酶分子修飾。 8.大分子結(jié)合修飾法：利用水溶性大分子與酶結(jié)合，使酶的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些精細(xì)的改變，從而改變酶的特性與功能的方法

40、稱(chēng)為大分子結(jié)合修飾法。簡(jiǎn)稱(chēng)為大分子結(jié)合法。 9.肽鏈有限水解修飾：是利用肽鏈的有限水解，使酶的空間結(jié)構(gòu)發(fā)生某些精細(xì)的改變，從而改變酶的特性和功能的方法。 10.氨基酸置換修飾：將肽鏈上的某一個(gè)氨基酸換成另一個(gè)氨基酸，則會(huì)引起酶蛋白空間構(gòu)象的某些改變，從而改變酶的某些特性和功能。這種修飾方法稱(chēng)為氨基酸置換修飾。 11.蛋白質(zhì)工程：蛋白質(zhì)工程又被稱(chēng)為第二代遺傳工程。是指通過(guò)改造與蛋白質(zhì)相對(duì)應(yīng)的基因中的堿基排列次序，或設(shè)計(jì)合成新的基因，將它克隆到寄主細(xì)胞中，通過(guò)基因表達(dá)而獲得具有新的特性的蛋白質(zhì)的技術(shù)過(guò)程。 二、填空1生物工程主要包括： 基因工程 、 細(xì)胞工程 、 酶工程 和 發(fā)酵工程 。2生物工程

41、領(lǐng)域廣泛應(yīng)用的基本操作技術(shù)主要包括 酶 技術(shù)、 克隆 技術(shù)以及 細(xì)胞和原生質(zhì)體融合 技術(shù)。3酶技術(shù)主要包括： 酶生物合成的調(diào)節(jié) 技術(shù)、 酶的分離純化 技術(shù)、酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究 技術(shù)、 酶分子修飾 技術(shù)和 酶、細(xì)胞和原生質(zhì)體固化技術(shù)。4許多酶的生物合成都是通過(guò)誘導(dǎo)物的 誘導(dǎo) 作用而進(jìn)行的。在適當(dāng)?shù)臅r(shí)候添加適當(dāng)?shù)恼T導(dǎo)物，可以大大提高酶的產(chǎn)量。誘導(dǎo)物可分為 酶的作用底物 、 酶的反應(yīng)產(chǎn)物 和 酶的底物類(lèi)似物 三大類(lèi)。5.酶生物合成的阻遏作用有 產(chǎn)物阻遏 作用和 分解代謝物阻遏 作用。6.分解代謝物阻遏作用與 環(huán)腺苷酸(cAMP) 的濃度有關(guān)。在容易利用的碳源充足時(shí)， cAMP 濃度低， 受體蛋白(CR

42、P) 不能與cAMP形成復(fù)合物，就不能與啟動(dòng)基因結(jié)合，RNA聚合酶亦無(wú)法結(jié)合，酶就無(wú)法合成，即呈現(xiàn)分解代謝物阻遏遏作用。在容易利用的碳源不存在或缺乏時(shí)， cAMP 濃度增高，易與 cAMP受體蛋白(CRP) 形成復(fù)合物。此復(fù)合物與啟動(dòng)基因結(jié)合，RNA聚合酶才能結(jié)合到啟動(dòng)基因位點(diǎn)上，分解代謝物阻遏作用解除，通過(guò) 轉(zhuǎn)錄 和 翻譯 ，進(jìn)行酶的合成。7.酶的可逆抑制作用有 競(jìng)爭(zhēng)性抑制 作用、 非競(jìng)爭(zhēng)性抑制 作用和 反競(jìng)爭(zhēng)性抑制 作用三類(lèi)。8.隨著抑制劑濃度I的增加 Km 增加， Vmax 不變，屬于競(jìng)爭(zhēng)性抑制；Km不變， Vmax 值減小。屬于非競(jìng)爭(zhēng)性抑制； Km 和Vmax 值都減小， Km/ Vm

43、ax 不變，屬于反競(jìng)爭(zhēng)性抑制。9.酶、細(xì)胞或原生質(zhì)的固定化方法有 吸附法、 包埋法 、結(jié)合法 和 交聯(lián)法 。10. 雙倒數(shù)作圖法是以 1/v 對(duì) 1/S 作圖，其縱軸截距是 1/ Vmax ，橫軸截距是 -1/Km ，斜率為 Km/ Vmax 。三、問(wèn)答題1.酶的誘導(dǎo)合成需要哪些條件: 酶的誘導(dǎo)合成不是任何情況下都可進(jìn)行的，而是有條件的。主要有下列三點(diǎn)： 基因必須完整：酶的合成是在基因的控制下進(jìn)行的，若基因受到破壞或變異，酶的合成將受影響。因?yàn)椋?若酶所對(duì)應(yīng)的結(jié)構(gòu)基因改變，該酶將無(wú)法合成。 若同一操縱子中，第一位的結(jié)構(gòu)基因受破壞，則第二位及其以后的各個(gè)結(jié)構(gòu)基因即使完好，也無(wú)法合成相應(yīng)的酶。 若

44、操縱基因變異，將出現(xiàn)二種相反的情況：一是操縱基因變異后阻抑蛋白不能與之結(jié)合，那么將不受誘導(dǎo)物或阻遏物的影響，酶都可以合成；二是操縱基因變異后，與阻抑蛋白牢固結(jié)合，那么，就無(wú)論是否有誘導(dǎo)物，酶均無(wú)法合成相應(yīng)的酶。 若調(diào)節(jié)基因變異，不能合成相應(yīng)的阻抑蛋白。酶的合成也不受誘導(dǎo)物或阻遏物的影響。只有各有關(guān)基因完整，才能在添加誘導(dǎo)物時(shí)，有可能使酶誘導(dǎo)合成。 阻抑蛋白活性 當(dāng)添加誘導(dǎo)物時(shí)，誘導(dǎo)物與阻抑蛋白結(jié)合，使其與操縱基因分離，才能進(jìn)行酶的合成。 阻遏物 在添加誘導(dǎo)物時(shí)，細(xì)胞所處環(huán)境中，不能有高濃度的分解代謝阻遏物或其它強(qiáng)阻遏劑存在，否則將無(wú)法誘導(dǎo)。因此，只有阻遏解除后，酶才能誘導(dǎo)合成。 2.酶動(dòng)力學(xué)的

45、研究主要包括哪些內(nèi)容: 酶動(dòng)力學(xué)研究主要包括：酶反應(yīng)初速度的測(cè)定；底物濃度對(duì)酶反應(yīng)速度的影響；米氏常數(shù)Km和最大反應(yīng)速度vmax的測(cè)定；溫度對(duì)酶反應(yīng)速度的影響；酶反應(yīng)活化能的測(cè)定；pH對(duì)酶反應(yīng)速度的影響；激活劑的作用；抑制劑對(duì)反應(yīng)速度的影響；抑制類(lèi)型的確定3.酶分子修飾技術(shù)不斷發(fā)展，主要的修飾方法有哪些: 酶分子修飾技術(shù)不斷發(fā)展，修飾方法多種多樣。主要的有：金屬離子置換修飾；大分子結(jié)合修飾；肽鏈有限水解修飾；酶蛋白側(cè)鏈基團(tuán)修飾；氨基酸置換修飾；物理修飾。4.試述蛋白質(zhì)工程的主要步驟:新蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)根據(jù)已知蛋白質(zhì)或酶的化學(xué)結(jié)構(gòu)、空間結(jié)構(gòu)及其特性，確定欲得到的新蛋白質(zhì)或酶的氨基酸排列次序，確定

46、欲置換的氨基酸及位置。突變基因的核苷酸序列的確定根據(jù)欲得到的蛋白質(zhì)的氨基酸序列，確定其對(duì)應(yīng)的mRNA上的核苷酸序列。再根據(jù)互補(bǔ)原則，從mRNA核苷酸序列確定其所對(duì)應(yīng)的突變基因上的核苷酸序列。根據(jù)欲置換的氨基酸確定需要置換的核苷酸及其位置。突變基因的獲得根據(jù)欲得到的突變基因的核苷酸序列以及需要置換的核苷酸位置，首先用DNA合成儀合成有一個(gè)或幾個(gè)核苷酸被置換了的寡核苷酸。再用此寡核苷酸為引物，通過(guò)定點(diǎn)突變(Site directed mutagenesis)技術(shù)，而獲得所需的突變基因。這稱(chēng)之為寡核苷酸誘導(dǎo)的定位突變，是蛋白質(zhì)工程中常用的技術(shù)。新蛋白質(zhì)的產(chǎn)生將上述獲得的突變基因插入到合適的基因載體中

47、，轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)到宿主細(xì)胞之中，在適宜的條件下進(jìn)行表達(dá)，就可產(chǎn)生出經(jīng)過(guò)氨基酸置換的新的蛋白質(zhì)或酶。第十二章 克隆技術(shù)一、名詞解釋1.克隆技術(shù): 是在分子的水平上，通過(guò)人工方法將外源基因引入細(xì)胞，而獲得具有新的遺傳特性的細(xì)胞技術(shù)，又稱(chēng)重組DNA技術(shù)。 2.基因: 是載有遺傳信息的DNA(有的是RNA)片段，是遺傳性狀在分子水平上的物質(zhì)基礎(chǔ)。 3.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction): 簡(jiǎn)稱(chēng)PCR，是由穆利斯(K. B. Mullis)于1988年首創(chuàng)的一種在體外模擬發(fā)生于細(xì)胞內(nèi)的DNA快速擴(kuò)增特定基因或DNA序列的復(fù)制過(guò)程的技術(shù)。 4.質(zhì)粒: 質(zhì)粒是染色體外的遺傳因子

48、，是一種雙鏈環(huán)狀的DNA分子。質(zhì)粒本身含有復(fù)制基因，能在細(xì)胞質(zhì)中獨(dú)立自主地進(jìn)行自我復(fù)制。 5.限制性?xún)?nèi)切酶: 是生物體內(nèi)能識(shí)別并切割特異的雙鏈DNA序列的一種專(zhuān)一性很強(qiáng)的核酸內(nèi)切酶，是目前克隆技術(shù)不可缺少的工具酶。 6.基因重組: 是通過(guò)酶的作用，使特異的基因(外源DNA)和載體DNA在試管中進(jìn)行重新組合，而得到雜種DNA分子的方法。 二、填空1.獲得特異基因的主要方法有： 分離 法、 反轉(zhuǎn)錄合成 法、 化學(xué)合成 法和 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR) 技術(shù)。2.真核細(xì)胞的mRNA一般在3-末端含有多聚腺嘌呤核苷酸(Poly A) 的尾巴，可以用接上 寡聚脫氧胸腺嘧啶核苷酸 的纖維素柱進(jìn)行 親和 層析

49、，而從RNA復(fù)合物中分離得到 mRNA 。3.雙鏈DNA在加熱或堿性條件下，雙鏈之間的 氫鍵 斷開(kāi)，解離為單鏈DNA，這稱(chēng)為DNA的 變性 。4.單鏈DNA在溫度逐漸 降低 時(shí)，會(huì)重新與其互補(bǔ)的引物或另一條單鏈結(jié)合，形成雙鏈，這叫 退火 。5.在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，是以目標(biāo) DNA 為模板，以 引物 為固定起點(diǎn)，以 為底物，在 四種脫氧核苷三磷酸(dNTP) 的作用下，由 DNA聚合酶5-端 向 3-端 的方向進(jìn)行DNA復(fù)制。6.在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，反應(yīng)液中加入 50mmol/L的KCl 有利于退火，但過(guò)高則對(duì) Taq DNA聚合酶 有抑制作用。明膠和牛血清蛋白等蛋白質(zhì)，以及吐溫20等非離子型表面活性劑對(duì) Taq DNA聚合酶 有穩(wěn)定作用，必要時(shí)可適量添加。7.Ti質(zhì)粒是 根瘤農(nóng)桿菌 的質(zhì)粒，在 植物基因工程方面是一種常用的基因載體。8.選擇質(zhì)粒作為基因載體時(shí)，要考慮兩個(gè)條件：首先是經(jīng)限制性?xún)?nèi)切酶 作用后，仍保留 復(fù)制起始區(qū) 。此外是仍要有 抗藥標(biāo)記 ，以利于重組體的篩