BioRad分子生物學(xué)研究平臺

1、分子生物學(xué)研究平臺（整體解決方案) 本研究平臺主要由兩部分組成：蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)與基因表達(dá)研究平臺。各系統(tǒng)主要實(shí)驗(yàn)流程與配置如下：一、蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)高靈敏度化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)半干轉(zhuǎn)印槽轉(zhuǎn)印槽電泳儀電泳槽分析軟件電泳成像與分析轉(zhuǎn)印主要流程與配置（1）電泳槽：Mini-Protean Tetra CellMini Protean Tetra Cell凝膠規(guī)格：8.3×7.3cm運(yùn)行數(shù)目：1-4塊膠主要用于分離蛋白樣品（2）通用電泳儀：PowerPac Universal電流0.01-2.5A，功率1-500W電源，對于高通電泳實(shí)驗(yàn)或轉(zhuǎn)印實(shí)驗(yàn)，需要高電流電源，電流低實(shí)驗(yàn)時(shí)間拉長一倍（24cm大膠）

2、輸出插孔都是4對并聯(lián)，可同時(shí)對四個(gè)同類型的電泳槽進(jìn)行電泳主要用于提供穩(wěn)定電壓以進(jìn)行電泳與轉(zhuǎn)?。?）轉(zhuǎn)印槽：Mini Trans-Blot Cell一次能同時(shí)轉(zhuǎn)印兩塊凝膠優(yōu)點(diǎn)：散熱效果好，轉(zhuǎn)印徹底，條件容易控制主要用于長時(shí)間的蛋白樣品轉(zhuǎn)?。◤?fù)雜樣品）（4）半干轉(zhuǎn)印槽：Mini Trans-Blot Cell優(yōu)點(diǎn)：轉(zhuǎn)印速度快，可進(jìn)行不連續(xù)轉(zhuǎn)?。ㄟm合10-100KD大小的蛋白）主要用于快速的蛋白樣品轉(zhuǎn)?。?）高靈敏度化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（ChemiDoc XRS）用途：ChemiDocXRS化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)是當(dāng)前該系列中最先進(jìn)的化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)：可進(jìn)行Chemiluminescence (化學(xué)發(fā)光檢測）

3、，F(xiàn)luorescence （熒光檢測），Colorimetric detection (光密度成像)，Gel documentation (凝膠成像)高靈敏度高分辨率化學(xué)發(fā)光熒光成像儀 CCD分辨率：1,392 x 1,040 (H x V) 冷CCD溫度：-50 (足夠低溫，保證檢測的靈敏度) 讀出噪音：4.5 e-rms 10 MHZ， 4.5 e-rms 10 MHZ 暗電流：0.001 e/p/s 冷卻CCD方式：peltier 像素深度：16位（65,535 灰度） 動(dòng)態(tài)范圍：>4 OD 動(dòng)態(tài)平場技術(shù)： 5% CV （BIO-RAD 專利技術(shù)，圖像平整，保證精確定量）Bio-

4、Rad圖像產(chǎn)品從20042008年，連續(xù)5年獲得美國Life Science Awards年度最佳圖像類產(chǎn)品大獎(jiǎng)詳情請見：http:/www.the-二、基因表達(dá)研究平臺核酸的定量與分析滿足定量PCR、核酸制備或細(xì)胞轉(zhuǎn)染樣品的定量檢測要求，提供吸收值、濃度和純度值，確保下游研究工作的順利開展核酸電泳采用普通瓊脂糖凝膠電泳、SSCP、DGGE、CDGE、TTGE和脈沖場電泳等方法，對不同長度和序列的核酸進(jìn)行鑒別和分離?；虮磉_(dá)研究平臺核酸樣本制備核酸純化產(chǎn)品為大小規(guī)模的質(zhì)粒、基因組DNA、RNA和PCR產(chǎn)物等的純化提供更高效率和產(chǎn)量，同時(shí)具有產(chǎn)量和純度的可重復(fù)性PCR擴(kuò)增進(jìn)行靈敏、高效的逆轉(zhuǎn)錄與

5、擴(kuò)增，在大動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)獲得完美的核酸擴(kuò)增性能熒光定量PCR儀熒光定量PCR方法可以對基因的變化進(jìn)行準(zhǔn)確的定量分析圖像分析對電泳凝膠進(jìn)行成像與結(jié)果分析，如定量、條帶分析，然后輸出結(jié)果（1）、核酸蛋白測定儀（分光光度計(jì)）SmartSpec plus Spectrophotometerv 200800nM連續(xù)波長v 用于DNA,RNA,寡核苷酸和蛋白定量(Bradford, Lowry,BCA檢測法)v 可存儲10個(gè)自定用戶名的標(biāo)準(zhǔn)曲線v 精致小巧的外觀設(shè)計(jì)用途：用于樣品濃度檢測，以控制實(shí)驗(yàn)條件的一致（2）多功能梯度PCR儀C1000 和S1000 PCR儀具有以下突出的特點(diǎn)： 市場上最容易更換模塊的

6、PCR 儀器； 唯一一款帶有獨(dú)立控制雙加熱模塊的PCR 儀器； 唯一一款帶有溫度梯度功能的雙加熱模塊PCR儀器 快速運(yùn)行，升降溫速度快，設(shè)定時(shí)間短 唯一一款帶有全自動(dòng)程序編寫功能的儀器 創(chuàng)新的熱蓋設(shè)計(jì)，適用的反應(yīng)管范圍最廣，支持低體積的PCR反應(yīng) 唯一一款能通過USB 閃存?zhèn)鬏敂U(kuò)增程序和登錄文件的儀器 唯一一款能通過電腦編寫擴(kuò)增程序的儀器 最個(gè)性化的平臺，能適配用戶不同的反應(yīng)耗材和檢測通量需求，包括定量檢測高亮顯示，隨時(shí)變化的步驟和區(qū)域，適合初學(xué)者編程使用預(yù)計(jì)運(yùn)行的時(shí)間 熱蓋設(shè)定的溫度 （3）水平電泳槽：Mini-Sub GT Cell凝膠盤: 帶有熒光標(biāo)尺的紫外線透光多種凝膠盤大?。?x10

7、、15 x 20、25x25 cm多種不同大小的手鋪膠選擇適合所有需要的電泳多通道移液器兼容電泳梳主要用于對PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳，然后檢測（4）基礎(chǔ)電泳儀：PowerPac Basic電流4-400mA，功率75W，電壓：10-300V，輸出插孔：4對并聯(lián)，可同時(shí)對四個(gè)同類型的電泳槽進(jìn)行電泳主要用于提供穩(wěn)定電壓以進(jìn)行電泳（5）凝膠成像系統(tǒng)：ChemiDoc XRS 上面蛋白轉(zhuǎn)印系統(tǒng)中的第（5）項(xiàng)高靈敏度化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)，已包括普通凝膠成像的功能，所以只需配備一臺成像系統(tǒng)即可。（6）梯度實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀：CFX96CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR儀的主要特點(diǎn)：n結(jié)果可靠光源和檢測器采用一體化的光

8、梭，長壽命的LED和光敏二極管整合在一起，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠；n快速得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果光學(xué)系統(tǒng)出廠時(shí)即經(jīng)過嚴(yán)格校正，儀器即插即用，能夠在數(shù)分鐘內(nèi)完成安裝，開始實(shí)驗(yàn)n縮短實(shí)驗(yàn)運(yùn)行時(shí)間快速的升降溫速度，能夠在30分鐘內(nèi)完成定量PCR 實(shí)驗(yàn)n快速優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件溫度梯度功能能夠在一次實(shí)驗(yàn)中既能找到最優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件n減少實(shí)驗(yàn)樣品和試劑的消耗10 µl反應(yīng)體系即能得到穩(wěn)定可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果n根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選擇數(shù)據(jù)采集方法支持SYBR Green 快速掃描模式n隨時(shí)隨地分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果軟件能自動(dòng)通過電子郵件將實(shí)驗(yàn)結(jié)果作為附件發(fā)送n提高檢測通道一臺電腦能夠控制多大4臺CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR 儀 CFX96 實(shí)時(shí)定量

9、PCR儀的描述：CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR儀是BIO-RAD 實(shí)時(shí)定量PCR儀的延續(xù)，融合了現(xiàn)有實(shí)時(shí)定量PCR儀的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)。CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR儀是在C1000 PCR儀的快速而靈活的基礎(chǔ)上，增加CFX96 光學(xué)檢測模塊形成的。CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR儀易于安裝、檢測靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，能夠用于各種實(shí)時(shí)定量PCR 的應(yīng)用, 包括絕對定量、基因變異分析和基因表達(dá)分析。快速升降溫度 CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR儀在運(yùn)行過程中，能夠保持很好的溫度均一性?？焖俣鴾?zhǔn)確的溫度控制能夠在30分鐘內(nèi)得到準(zhǔn)確的定量結(jié)果。溫度控制的關(guān)鍵指標(biāo)：n5°C/秒的最大升降溫速度n溫度準(zhǔn)確性：+/-0

10、.2°Cn溫度均一性：+/-0.4°C （在10秒鐘內(nèi)達(dá)到）n溫度范圍：0 100°C PCR反應(yīng)的整體運(yùn)行時(shí)間取決于很多參數(shù)，包括擴(kuò)增程序的設(shè)計(jì)（孵育時(shí)間、循環(huán)次數(shù)等）、PCR反應(yīng)的生物學(xué)特性和溫度控制的能力。要得到最優(yōu)化的快速PCR 反應(yīng)條件，必須綜合考量以上所有的參數(shù)。CFX96 實(shí)時(shí)PCR 系統(tǒng)具有快速的升降溫速度和很短的設(shè)定時(shí)間等特點(diǎn)。這些特點(diǎn)取決于儀器加熱模塊的特殊設(shè)計(jì)和先進(jìn)的邏輯式溫度控制方法。“蜂巢式” 反應(yīng)模塊CFX96 采用專利的“蜂巢式”加熱模塊，減少了加熱模塊的質(zhì)量，使熱量傳導(dǎo)更快。在反應(yīng)模塊的反應(yīng)孔之間以及反應(yīng)孔的橫向和縱向，都有小孔，這

11、樣的設(shè)計(jì)使得反應(yīng)模塊的整體質(zhì)量較少30% ，使得熱量傳導(dǎo)更快。專利的“蜂巢式”加熱模塊設(shè)計(jì)還保證了卓越的溫度準(zhǔn)確性和均一性。 CFX96 多個(gè)溫度控制單元，使得儀器在運(yùn)行，包括升溫和降溫過程中，每一個(gè)反應(yīng)孔都保持很好的溫度均一性。只有10秒的設(shè)定時(shí)間，能夠快速到達(dá)設(shè)定溫度，縮短了PCR反應(yīng)的運(yùn)行時(shí)間。檢測15個(gè)孔的溫度變化曲線溫度梯度功能CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR儀的溫度梯度功能，是功能強(qiáng)大的優(yōu)化工具，能夠在一次實(shí)驗(yàn)中找到最合適的退火溫度。溫度梯度的范圍是1-24°C ，每一行一個(gè)溫度，由內(nèi)向外溫度逐漸降低（最里面一行溫度最高）。CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR 儀采用了“動(dòng)態(tài)變溫”的溫度

12、梯度形成方式，確保每一行的溫度同時(shí)到達(dá)設(shè)定的溫度，因此不同溫度條件下的所有樣品維持相同的孵育時(shí)間。沒有溫度梯度功能，必須運(yùn)行幾次實(shí)驗(yàn)，來優(yōu)化最好的實(shí)驗(yàn)條件。67oC62oC56oCEfficiency = 68%Efficiency = 99%Efficiency = 98%使用溫度梯度功能，優(yōu)化退火溫度。10倍(106 10 拷貝)稀釋的含有GAPDH 的質(zhì)粒為模板，在55 到 68oC 退火溫度條件下，以SYBR Green染料擴(kuò)增。 上圖為3個(gè)溫度條件下的結(jié)果，顯示出62oC是最合適的退火條件Ct值小，標(biāo)準(zhǔn)曲線的擴(kuò)增效率最高。光學(xué)檢測器CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR 儀采用一體化掃描式的光梭

13、為檢測器，能夠精確定量和區(qū)分目標(biāo)基因。光梭由6個(gè)用于激發(fā)不同波長熒光的、帶有濾光片的LED和相對應(yīng)的用于檢測熒光的帶濾光片的光敏二極管所組成。每一組激發(fā)和發(fā)射濾光片對于特定波長的熒光染料來說，都是最合適的。LED 光源非常穩(wěn)定，在使用過程中無需校正。CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR 儀的光學(xué)結(jié)構(gòu)檢測通道激發(fā)波長 (nm)檢測波長 (nm)校正過的熒光素1450-490515-530FAM, SYBR Green I2515-535560-580VIC®, HEX, TET, Cal Gold 5403560-590610-650ROX, TEXAS RED®, Cal Red 6

14、104620-650675-690CY5, Quasar 6705672-684705-730Quasar 7056450-490560-580None (和FRET 探針匹配)CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR儀的濾光片和出廠前校正過的熒光素CFX96 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀的掃描模式采用X 軸方向，即沿著樣品板的每一行掃描。這種掃描方式減少了移動(dòng)部件的磨損，數(shù)據(jù)采集時(shí)更安靜、穩(wěn)定。移動(dòng)部件采用了專利的技術(shù)，確保在每一次掃描前，光梭都回到起始位置，偏差控制在3微米之內(nèi)。在樣品板的任意位置，每一次掃描，光梭都緊貼樣品板，聚焦在樣品孔的中心位置，重復(fù)性很好。對于任意一個(gè)樣品孔位置， 都具有最佳的光程，無

15、熒光之間的交叉干擾，因此不需要空間因子的校正或有單獨(dú)的通道，采集陽性的染料，如ROX等的信號，來校正光程差。CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR 的光梭，緊貼樣品板進(jìn)行掃描CFX96實(shí)時(shí)定量PCR儀具有多通道檢測能力，可以同時(shí)檢測不同的熒光信號。在多通道掃描模式下，系統(tǒng)在通道1-5 檢測不同的熒光信號，掃描完一塊96孔板只需要12秒鐘的時(shí)間，因此能在一個(gè)反應(yīng)管中同時(shí)檢測5種不同的靶基因。 如果僅使用SYBR Green I 或FAM標(biāo)記的探針檢測方法，可以使用快速掃描模式，在通道1采集信號，掃描完一塊96孔板僅需要3秒鐘。CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR儀還能有一個(gè)單獨(dú)的通道，用于能量共振轉(zhuǎn)移探針的檢測（FR

16、ET 探針），以FAM 的波長為激發(fā)光，檢測HEX波長的發(fā)射光，給使用者的實(shí)驗(yàn)多了一種方法的選擇。12345FamHexTxRedCy5Q7050100002000030000400005000060000ChannelSignalFluorophore在CFX96 實(shí)時(shí)定量PCR儀上用通道1-5檢測常用的熒光染料得到的原始數(shù)據(jù)，顯示出不同的通道之間幾乎沒有熒光信號的交叉干擾操作軟件實(shí)驗(yàn)設(shè)定CFX Manager 軟件帶有的啟動(dòng)向?qū)Ы缑?，使得開始定量PCR 實(shí)驗(yàn)顯得非常簡單。在實(shí)驗(yàn)設(shè)置界面（Experiment Setup），使用快速上載（Express loading）功能，能快速打開文件，包括軟件預(yù)設(shè)的擴(kuò)增程序、反應(yīng)板設(shè)置文件等。你還可以快速運(yùn)行程序，在實(shí)驗(yàn)運(yùn)行過程中，或運(yùn)行以后在編輯反應(yīng)板設(shè)置，節(jié)約實(shí)驗(yàn)的時(shí)間。結(jié)果分析CFX Manager 軟件在實(shí)驗(yàn)運(yùn)行結(jié)束后，能將實(shí)驗(yàn)結(jié)果文件做為附件用電子郵件發(fā)送到電子信箱，你可以隨時(shí)隨地分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 你可以根據(jù)需要分析數(shù)據(jù)和顯示數(shù)據(jù)，一步就能將任何曲線圖、