選修1專題2課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)(第二課時(shí))導(dǎo)學(xué)案教師版(共3頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)（第二課時(shí)）純化大腸桿菌純化大腸桿菌就是為了獲得大腸桿菌的純種菌落，這需在培養(yǎng)時(shí)，盡量使菌落中的菌體來自于一個大腸桿菌的分裂，即這個菌落的細(xì)菌群體由一個大腸桿菌繁殖而來，這就需接種時(shí)盡量接種單個的大腸桿菌。1微生物接種的方法微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法兩種。(1)_ 平板劃線法_通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。將_接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的_棉塞_。將試管口通過酒精燈的_火焰_。將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，

2、_沾取_一環(huán)菌液。將試管口通過酒精燈的火焰，并迅速塞上棉塞。_左手 _將培養(yǎng)皿皿蓋打開一條縫隙，_右手_將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入_平板內(nèi)_，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基。灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將_最后一區(qū)的劃線與_第一區(qū)_相連。將_平板倒置，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(2)_ 稀釋涂布平板法_則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。系列稀釋操作a取盛有9 mL水的6支試管滅菌，并按101106的順序編號。b用移液管吸取1 mL培養(yǎng)的菌液，

3、注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻。c從101倍稀釋的試管中吸取1 mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管內(nèi)吹吸均勻，獲得102倍液。依此類推。涂布平板操作a將_涂布器_浸在盛有酒精的燒杯中。b取不超過0.1 mL的_菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。c將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻810 s。d用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻。2注意事項(xiàng)(1)平板劃線法操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進(jìn)行_滅菌_，劃線操作結(jié)束時(shí)，仍需灼燒_滅菌。從第二次以后的劃線操作總是從_從上一次劃線的末端開始，能

4、使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加逐漸減少，最終得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落?！舅伎肌繛槭裁丛诓僮鞯牡谝徊揭约懊看蝿澗€之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時(shí)，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，

5、殺死菌種。在作第二次以及其后的劃線操作是赤什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。(2)稀釋涂布平板法稀釋涂布平板的操作比較復(fù)雜，且各個細(xì)節(jié)均需保證“_無菌”，應(yīng)特別注意：酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適。吸管頭不要接觸任何其他物體。吸管要在酒精燈火焰周圍使用。3微生物分離純化培養(yǎng)的結(jié)果作出分析與評價(jià)(1)培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對照，若有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。(2)在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。(3)培

6、養(yǎng)12 h和24 h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是時(shí)間越長，菌落中細(xì)菌繁殖越多，菌落體積越大，而菌落的位置不動，只是菌落數(shù)增多。(4)頻繁使用的菌種利用臨時(shí)保藏法保存，長期保存菌種的方法是甘油管藏法。前者利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，保存在4冰箱中，第36個月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點(diǎn)是保存時(shí)間較短，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異；后者將菌種與無菌甘油等量混合后保存在20的冷凍箱中。4菌種的保存為了保持菌種的純凈，需對菌種進(jìn)行保藏。對于頻繁使用的菌種，我們可以采用_臨時(shí)保藏_法；對于需要長期保存的菌種，可以采用_甘油管法_法。習(xí)題鞏固1、有關(guān)平板劃線操作正確的是（ ）A使用已滅菌的接種環(huán)、培養(yǎng)皿，操

7、作過程中不再滅菌B打開含菌種的試管需通過火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞C將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸人平板內(nèi)，劃三至五條平行線即可D最后將平板倒置，放人培養(yǎng)箱中培養(yǎng)2、下面對發(fā)酵工程中滅菌的理解不正確的是（ ）A防止雜菌污染 B消滅雜菌（因?yàn)闇缇哪康氖欠乐闺s菌污染，但實(shí)際操作中不可能只消滅雜菌，而是消滅全部微生物）C培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌 D滅菌必須在接種前3、將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基都放入37恒溫箱的目的是（ ）A對比觀察培養(yǎng)基有沒有被微生物利用 B對比分析培養(yǎng)基是否被雜菌污染C沒必要放入未接種的培養(yǎng)基 D為了下次接種時(shí)再使4、 下列物質(zhì)中，不能用作酵母菌碳源的是

8、（ ）A含碳有機(jī)物 B蛋白胨 C含碳無機(jī)物 D花生粉餅等天然物5、有關(guān)稀釋涂布平板法，敘述錯誤的是（ ）A首先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋B然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面C再放在適宜條件下培養(yǎng) D結(jié)果都可在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落6、涂布平板操作需要用到（ ）A接種環(huán)、滴管、酒精燈 B接種環(huán)、移液管、酒精燈C涂布器、移液管、酒精燈 D涂布器、接種環(huán)、酒精燈7、下表是用于從土壤中分離純化土壤細(xì)菌的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方。請回答：試劑用量牛肉膏5.0 g蛋白胨10.0 gNaCl5.0 g瓊脂20.0 g水1 000 mL(1)培養(yǎng)基的類型很多，但培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。上述培養(yǎng)基配方中能充當(dāng)碳源的成分是_牛肉膏_和_蛋白胨。培養(yǎng)基配制完成以后，一般還要調(diào)節(jié)pH并對培養(yǎng)基進(jìn)行_滅菌_處理。(2)分離純化微生物最常使用的接種方法是_平板劃線法和稀釋涂布