有關(guān)燈盞花素磷脂復(fù)合物對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用探析

1、有關(guān)燈盞花素磷脂復(fù)合物對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用探析         你正在瀏覽的臨床醫(yī)學(xué)論文是有關(guān)燈盞花素磷脂復(fù)合物對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用探析                    【摘要】 目的 觀察燈盞花素磷脂復(fù)合物(BerPC)對腦缺血再灌注大鼠腦損傷的影響。方法 復(fù)制大鼠大腦中動脈腦缺血再灌注

2、損傷模型，觀察缺血后大鼠神經(jīng)功能障礙情況，測定再灌注后缺血側(cè)腦梗死范圍及腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX)的活性及丙二醛(MDA)的含量。結(jié)果 BerPC劑量依賴性減輕腦缺血再灌注損傷大鼠的神經(jīng)功能障礙，減少腦梗死面積，拮抗缺血腦組織MDA含量的增加，提高腦組織SOD、GSHPX活性。結(jié)論 BerPC對腦缺血再灌注損傷大鼠具有明顯的保護(hù)作用，具有良好的新藥開發(fā)前景。        【關(guān)鍵詞】 燈盞花素磷脂復(fù)合物;腦缺血;再灌注;大鼠    &#

3、160;   Abstract:Objective To study the protective effects of breviscapine phosphatidylcholine complex (BerPC) against brain injury in rats undergone focal ischemia reperfusion. Methods Wistar rats were treated with BerPC for 14 days and were subjected to focal ischemia reperfusion by

4、middle cerebral artery occlusion (MCAO) using intraluminal thread. After 2 hours of MCAO reperfusion was allowed by retracting the thread. The nerve symptoms were observed after 1 hour of reperfusion and the infracted area, the level of MDA, the activity of SOD, and GSH-PX in ischemic brain tissue w

5、ere observed after 24 hours. Results BerPC could improve behavior disorder induced by MCAO and reduce brain infracted area through increasing the activity of SOD and GSHPX , decreasing the level of MDA in brain tissue. Conclusion BerPC could protect against focal brain injury induced by reperfusion

6、injury in middle cerebral artery of rats and could be a promising product.        Key words:Breviscapine phosphatidylcholine complex;cerebral ischemia;perfusion;rat        前言       

7、0;燈盞花素(Ber)是從菊科植物短葶飛蓬中提取的有效活性成分，是治療心腦血管疾病的常用天然藥物。它能有效清除氧自由基和過多的NO，防止腦缺血造成的細(xì)胞膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)紊亂，阻止細(xì)胞內(nèi)鈣超載，保護(hù)腦細(xì)胞，增加腦血流量，改善腦血管循環(huán)等 1，2。但其結(jié)構(gòu)特點(diǎn)決定其口服不易吸收，生物利用度較低3。因此筆者將燈盞花素與磷脂(PC)復(fù)合，形成燈盞花素磷脂復(fù)合物 (BerPC) ，以提高生物利用度，改善臨床療效。本實(shí)驗研究BerPC對大鼠腦缺血再灌注(IR)損傷的保護(hù)作用，并與Ber進(jìn)行比較，旨在為新藥開發(fā)提供藥效學(xué)依據(jù)。       &#

8、160;1材料與方法        1.1藥物與試劑        Ber(云南植物藥廠，批號 000908)，PC(上海試劑二廠，批號 031104)。BerPC 由武漢俊民醫(yī)藥研究所提供，批號 010311，其制備方法為：取Ber溶于丙酮中，加溫至60 促溶，以質(zhì)量比11.6比例加入大豆磷脂，攪拌2.5 h后，揮除有機(jī)溶劑，殘余物室溫減壓干燥10 h 后得磷脂復(fù)合物。三苯基氯化四氮唑(TTC) 染液(中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司，批

9、號 010411)?？捡R斯亮藍(lán)蛋白測定試劑盒(批號 030307)，超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒(批號030704)，谷胱甘肽過氧化物酶(GSHPX)測定試劑盒(批號 030715)，丙二醛(MDA)測定試劑盒(批號 030715)均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品。        1.2動物        Wistar大鼠，雄性，體質(zhì)量300350 g，1012月齡，由武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗動物中心提供，合格證號：SCXK(鄂)2003

10、-0002。        1.3儀器        754紫外可見分光光度計(上海精密科學(xué)儀器有限公司分析儀器廠)，BPS130電子分析天平(北京賽多麗斯天平有限公司)，電熱灼燒器(上海醫(yī)療器械八廠生產(chǎn))。        2實(shí)驗方法        2.1分組及給藥 &

11、#160;      取上述大鼠70只，隨機(jī)分為7組，每組10只，即單純?nèi)毖俟嘧?IR)組及假手術(shù)(Sham)組;Ber 200 mg·kg-1組;BerPC 50 、100、200 mg·kg-1組(劑量以Ber計);PC 320 mg·kg-1組(相當(dāng)于BerPC 200 mg·kg-1 組中PC的量)。其中Sham組及IR組均給予等體積的0.5%CMC(10 mL·kg-1)溶液。動物每天灌胃給藥1次，連續(xù)給藥14 d。     

12、;   2.2大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型的制備4        末次給藥后1 h，大鼠稱重，腹腔注射3%的戊巴比妥鈉溶液1mL·kg-1麻醉，仰臥固定于恒溫手術(shù)臺上。頸部皮膚正中切口，分離左側(cè)頸總動脈及其分支。將直徑為0.26 mm，頭端灼燒膨大且光圓的尼龍線經(jīng)頸總動脈插入頸內(nèi)動脈入大腦中動脈分支處，進(jìn)線深度均距頸內(nèi)、頸外動脈分叉18 mm處，阻斷左側(cè)大腦中動脈血流2 h，拔出尼龍線予以再灌注24 h，Sham組僅手術(shù)分離，不插尼龍線。   

13、     2.3對大鼠神經(jīng)功能的影響        大鼠清醒后，觀察其行為學(xué)變化，神經(jīng)癥狀按文獻(xiàn)45級4分制評分。評分標(biāo)準(zhǔn)：無神經(jīng)損傷癥狀為0分;不能完全伸展右側(cè)前爪為1分;向右側(cè)轉(zhuǎn)圈為2分;行走時向右側(cè)傾倒為3分;不能自發(fā)行走或意識昏迷為4分。        2.4對大鼠腦梗死面積的影響        各組

14、大鼠再灌注24 h后，開顱取腦， 取梗死側(cè)腦組織冰浴上(4 以下)冠狀切成5片，迅速將腦片置于2% TTC染液中，37 染色20 min，10%()甲醛固定。經(jīng)染色后非缺血區(qū)腦組織呈玫瑰紅色，梗死區(qū)呈白色，將白色組織挖下稱重。以梗死區(qū)腦質(zhì)量與總切片腦質(zhì)量的百分比作為梗死范圍。        2.5對SOD、GSHPX活性及MDA含量的影響        各組大鼠于再灌注24 h后，取缺血側(cè)同一部位腦組織用0.9%冰氯化鈉溶液制成10%腦

15、組織勻漿，將勻漿以3 000 r·min-1 離心10 min，取上清液，按試劑盒說明書操作，分別測定SOD、GSHPX活性及MDA含量。以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品，用考馬斯亮藍(lán)法測定各樣品中蛋白質(zhì)含量。        2.6統(tǒng)計學(xué)處理        實(shí)驗數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較采用t檢驗，P<0.05認(rèn)為差異有顯著性。        

16、3結(jié) 果        3.1對神經(jīng)功能評分的影響        與Sham組比較，IR組大鼠出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能障礙。腹腔注射BerPC 50 、100、200 mg·kg-1，連續(xù)14 d，可劑量依賴性降低大鼠神經(jīng)功能評分，且100、200 mg·kg-1組與IR組比較，差異具有極顯著性(P<0.01)。與Ber組相比較，BerPC 200 mg·kg-1組作用明顯強(qiáng)于相同劑量的Ber組(P<

17、0.01)，見表1。        表1對腦缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能的影響    略        3.2對腦梗死面積的影響        與Sham組比較，IR組大鼠腦梗死面積百分率顯著增加(P<0.01)，顯示缺血再灌注引起腦組織明顯壞死。腹腔注射給予BerPC 50 、100、200 mg·kg

18、-1，連續(xù)14 d，可劑量依賴性縮小腦梗死面積，且50 、100、200 mg·kg-1組與IR組比較，差異具有極顯著性(P<0.01)。且BerPC 200 mg·kg-1組作用明        顯強(qiáng)于相同劑量的Ber組(P<0.01)。見表2。        3.3對SOD、GSHPX活性及MDA含量的影響        

19、與Sham組比較， IR組SOD、GSHPX活性明顯降低，MDA含量顯著升高(P<0.01)。與IR組比較，Ber組、BerPC 3個劑量組SOD活性顯著升高，差異有顯著性(P<0.05或P<0.01)，且 BerPC 200 mg·kg-1組作用明顯強(qiáng)于相同劑量的Ber組(P<0.05)。與IR組比較，Ber組、BerPC 3個劑量組GSHPX活性顯著升高，差異有顯著性(P<0.05或P<0.01)。與IR組比較，所有給藥組MDA含量均顯著降低，差異有極顯著性(P<0.01)。見表3。     

20、60;   表2對大鼠腦梗死面積的影響     略        表3對SOD、GSHPX活性及MDA含量的影響(略)        4討 論        在缺血性腦損傷的過程中，由于大量自由基產(chǎn)生，導(dǎo)致膜脂質(zhì)發(fā)生過氧化，破壞了膜脂質(zhì)的代謝和結(jié)構(gòu)，從而改變酶蛋白的微環(huán)境。另一方面，自由基

21、也可直接氧化酶蛋白氨基酸殘基，引起酶蛋白構(gòu)象改變，使酶失活。GSHPX在細(xì)胞質(zhì)中直接參與清除H2O2，SOD能清除超氧陰離子自由基，保護(hù)細(xì)胞免受損傷。大鼠腦缺血后，SOD和GSHPX活性明顯低于正常，清除自由基能力下降，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA生成增多。從本文結(jié)果看：預(yù)先給予BerPC可明顯減輕大鼠缺血后的行為障礙，減小腦梗死體積百分比，明顯降低SOD和GSHPX的活性抑制，減少M(fèi)DA的生成，與文獻(xiàn)2報道Ber藥理作用基本一致，顯示BerPC對大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用與其抗脂質(zhì)過氧化有關(guān)。細(xì)胞膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)紊亂，細(xì)胞內(nèi)鈣離子超載是引起腦缺血再灌注的重要因素，BerPC對細(xì)胞內(nèi)鈣離子的影響，我

22、們將另行研究。        燈盞乙素是Ber的主要有效成分之一，為黃酮木脂素類化合物，其結(jié)構(gòu)決定Ber溶解度較低，口服不易吸收，這在一定程度上影響了其療效的發(fā)揮。磷脂為體內(nèi)細(xì)胞膜的基本組成物質(zhì)，與細(xì)胞膜的親合力強(qiáng)。文獻(xiàn)5報道，磷脂在一定條件下與天然活性成分藥物進(jìn)行復(fù)合, 得到天然活性成分磷脂復(fù)合物(phytosomes),其理化性質(zhì)和生物特性較原化合物均有不同程度的改變。phytosomes以磷脂作載體，可以使黃酮類化合物很容易透過細(xì)胞的脂質(zhì)膜，顯著地改變其生物有效性。本文實(shí)驗證實(shí)了BerPC的藥理作用明顯強(qiáng)于等劑量的Ber，且PC無明顯的藥理作用，提示 Ber和磷脂形成一種全新的復(fù)合化合物，可能提高了Ber的生物利用度。        【參考文獻(xiàn)】