正交試驗(yàn)法優(yōu)化淫黃顆粒的提取工藝

1、正交試驗(yàn)法優(yōu)化淫黃顆粒的提取工藝 【摘要】 目的優(yōu)化淫黃顆粒的提取工藝。方法采用正交試驗(yàn)法，以提取液中淫羊藿苷的含量為考察指標(biāo)，對(duì)影響水煎提取效果的加水量、浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間、次數(shù)等4個(gè)因素進(jìn)行研究。結(jié)果淫黃顆粒的最佳提取工藝為A2B2C3，即加水量為8倍，提取3次，每次1.5h。結(jié)論該實(shí)驗(yàn)所優(yōu)選的工藝穩(wěn)定，可行。 【關(guān)鍵詞】 淫黃顆粒 總黃酮 淫羊藿苷 提取工藝 正交試驗(yàn)Abstract:ObjectiveOptimise the extract technical of Yinhuang Granules. Method Take orthogonal test, take carriin

2、 content in extract as observation index, study the 4 factors of water amount, sipping time, decocting time and times influencing the decoction extract result. Result The best extract technical is A2B2C3, i.e. 8 times for water, 3 times of extract, 1.5h/time.Conclusion The experiment shows the techn

3、ical is stable and available.Key words:Yinhuang Granules；total flavones；icariin；extract technical；orthogonal test淫黃顆粒系以淫羊藿為君，配伍黃芪而制成的中藥復(fù)方制劑，具有補(bǔ)氣健腎之功效，主要用于腎病綜合征的治療。為確保該制劑的臨床療效，本文采用正交設(shè)計(jì)方法，以干膏收率和總黃酮提取率為指標(biāo)，對(duì)淫黃顆粒水提取工藝進(jìn)行優(yōu)化研究。1 儀器與材料TU1800PC型紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限公司）。淫羊藿苷對(duì)照品（供含量測(cè)定用）購自中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110737200

4、312。藥材購于杭州康佳醫(yī)藥有限公司，經(jīng)鑒定符合中國藥典2005版(二部)1規(guī)定。2 方法與結(jié)果2.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)選用L9(34)正交表，以干膏收率和總黃酮提取率為考核指標(biāo)，考察水提取中的加水量（A）、煎煮時(shí)間（B）和煎煮次數(shù)（C）三個(gè)因素，每個(gè)因素設(shè)三水平。其因素水平見表1。表1 正交試驗(yàn)因素水平表（略）2.2 樣品提取液的制備按處方配比稱取藥材適量，按正交試驗(yàn)表進(jìn)行水提取，藥液經(jīng)濾紙濾過，濾液濃縮至12（藥材藥液），備用。2.3 干膏收率的測(cè)定精密量取上述提取液50ml，濃縮至一定體積，移置于已干燥恒重的蒸發(fā)皿中，在水浴上蒸干后，于105干燥至恒重，計(jì)算干浸膏收率。結(jié)果見表2。2.4 總

5、黃酮含量的測(cè)定精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品10.0mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得（每ml含淫羊藿苷0.4mg）。精密量取上述對(duì)照品溶液0.6ml，置10ml容量瓶中，加0.1mol/L三氯化鋁溶液1.0ml，混勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，于70恒溫水浴中加熱10min，取出后室溫放冷。用TU1800型紫外可見分光光度計(jì)，于400700nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，于412.0nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選擇412.0nm為測(cè)定波長(zhǎng)。精密量取對(duì)照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4ml，分別置10ml容量瓶中，各加0.1mol/L三氯化鋁溶液1.0ml，混

6、勻，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，于70恒溫水浴中放置10min，取出后室溫放冷，于412.0nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），（得標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0125c+0.0068(r=0.9999)。淫羊藿苷在7.8454.88mg/ml濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。 精密量取同一批提取液6份，按含量測(cè)定方法制備，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定吸收度，RSD=0.94%，重現(xiàn)性良好。取已知含量的提取液6份，加入不同量的淫羊藿苷對(duì)照品，按含量測(cè)定方法制備，并按標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定吸收度，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表3。平均回收率為101.12%，RSD=0.85%表3 回收率試驗(yàn)結(jié)果（

7、略）精密量取正交試驗(yàn)提取液1ml，置蒸發(fā)皿中，水浴上蒸干后，殘?jiān)蛹状既芙?，移?0ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取樣品溶液2ml，置10ml容量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“加0.1mol/L三氯化鋁溶液1.0ml”起依法測(cè)定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算黃酮含量和總黃酮提取總量，結(jié)果見表2。表2 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及干膏收率和總黃酮提取率（略） 2.5 結(jié)果分析正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表4和表5。以干浸膏得率為考察指標(biāo)，表32中極差R值大小顯示，各因素作用主次為CBA；方差分析結(jié)果表明：C因素的影響有極顯著性差異（P0.05），A因素和B因素則均無顯著性影響（P0.05），

8、以A3B2C3組合為佳。以總黃酮提取率為考察指標(biāo)，表32中極差R值大小顯示，各因素作用主次為CAB；方差分析結(jié)果表明：A因素和B因素的影響無顯著性差異（P0.05），而C因素的影響有顯著性差異（P0.05），以A2B3C3組合為佳。表4 浸膏得率方差分析表（略）表5 總黃酮提取率方差分析表（略） 2.6 驗(yàn)證試驗(yàn)考慮到總黃酮提取率這一指標(biāo)較重要，同時(shí)兼顧省時(shí)節(jié)能，故擬確定水提取工藝為：A2B2C3。但從表3、5可見，提取次數(shù)對(duì)總黃酮提取率影響較大，故進(jìn)一步比較A2B2C3和A2B2C4。取同一批藥材，根據(jù)處方比例稱取藥材，按A2B2C4和A2B2C3進(jìn)行對(duì)比驗(yàn)證試驗(yàn)，按上述方法測(cè)定浸膏得率及總

9、黃酮含量，結(jié)果見表6。表6 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（略） 由表6可見，以浸膏得率及總黃酮提取率為指標(biāo)，按A2B2C3和A2B2C4進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果顯示兩者幾無差別，故確定水提取工藝為A2B2C3，即加水量為8倍，提取3次，每次1.5h。3 討論方中君藥淫羊藿具有補(bǔ)腎陽、 強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕功效，其主要有效成分是淫羊藿苷和淫羊藿次苷等黃酮類化合物。黃芪為方中輔藥，具有補(bǔ)氣升陽、益衛(wèi)固表、利水消腫、托毒排膿、斂瘡生肌之功效，含皂苷類、多糖類、黃酮類及氨基酸類等，其中皂苷和多糖類被認(rèn)為系主要有效成份。根據(jù)方中各藥的有效成分及其溶解性能，設(shè)計(jì)確定采用水提工藝。淫黃顆粒系復(fù)方制劑，成分復(fù)雜。因此，除以干膏收率為考核指標(biāo)外，同時(shí)選擇以淫羊藿苷為對(duì)照品，測(cè)定總黃酮的含量，以綜合評(píng)價(jià)工藝的合理性。結(jié)果顯示，本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、