果蠅唾腺染色體標(biāo)本的制備及觀察

1、果蠅唾腺染色體標(biāo)本的制備和觀察摘要本實(shí)驗(yàn)通過(guò)用黑腹果蠅的三齡幼蟲(chóng)的唾腺，來(lái)觀察果蠅的唾腺染色體。目的在于學(xué)會(huì)辨認(rèn)果蠅的唾腺 的特征和識(shí)別各條不同的染色體以及掌握其基本的特征。了解唾腺染色體的作用和意義。1.引言果繩唾睬染色休為多線染色休，形成原因是由于染色休不斷復(fù)制，但細(xì)胞不分裂從而形成 了多線染色休，其上每一橫紋相當(dāng)于一個(gè)順?lè)醋?，橫紋的形態(tài)特征有著種的特異性和穩(wěn)定性。1881因此果蠅唾睬染色休成為了研究染色休結(jié)構(gòu)、基因定位、基因功能的重要實(shí)驗(yàn)材料。年Babia ni首次在搖蚊幼蟲(chóng)的唾腺細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)多線染色體.20世紀(jì)30年代Pain ter首先用果蠅唾腺體作為遺傳學(xué)數(shù)據(jù)在細(xì)胞學(xué)上的驗(yàn)證材料，他

2、研究了多線染色體上的橫紋跟基因的關(guān)聯(lián)性以及染色體的物種特異性。Bridges也對(duì)果蠅唾腺體進(jìn)行了廣泛詳細(xì)的研究，制成一系列與已有的基因連鎖圖相對(duì)應(yīng)的果蠅細(xì)胞學(xué)圖。2 .實(shí)驗(yàn)材料和方法2.1實(shí)驗(yàn)材料受精的雌果蠅、蓋玻片和載玻片、鑷子、解剖針解剖鏡和顯微鏡、醋酸地衣紅染液、指 甲油 生理鹽水、香柏油、鏡頭紙。2.2實(shí)驗(yàn)方法 2.2. 1實(shí)驗(yàn)材料的獲取和處理(1)三齡幼蟲(chóng)的培養(yǎng)： 取20-30只受精的雌果蠅于培養(yǎng)基中，在22攝氏度的恒溫冰箱中飼 養(yǎng)7天得到肥大的果蠅三齡幼蟲(chóng)。(2)唾腺的剝?nèi)『椭破?取果蠅三齡幼蟲(chóng)于一滴加了生理鹽水的載玻片上,用兩根解剖針,一根扎住口器，一根扎住體前1/3處像兩端拉

3、唾腺腺體隨之而出。唾腺是一對(duì)透明的茄子狀腺體，外有白色的脂肪組織(不透明)在腺體的前端各延伸出一細(xì)管匯合在一起與口器相連,相對(duì)于其他組織唾腺最為透明因此在黑色背景下其他組織呈白色,而唾腺是半透明的，辨別時(shí)應(yīng)在明亮的光源下進(jìn)行， 果蠅的唾腺細(xì)胞很大， 在解剖鏡下可以看見(jiàn)其輪廓。幼蟲(chóng)被拉斷時(shí)唾腺也可能隨之被拉出，也可能仍連在口器上，這時(shí)可用解剖針輕輕將其擠壓出來(lái)。 拉出的腺體有可能仍為完整的左右對(duì)稱的長(zhǎng)茄狀囊體，也可能分開(kāi)、斷裂。去除幼蟲(chóng)其它組織部分,并把唾腺周圍的白色脂肪剝離干凈?？焖俚膶⑼傧偃旧w轉(zhuǎn)移到另一干凈的載玻片上,每片2-3個(gè)，然后用醋酸地衣紅染液染色10-15分鐘，用吸水紙吸去多余的

4、染液蓋好蓋玻片，敲散細(xì)胞，壓勻，涂上指甲油。然后鏡檢。3 .實(shí)驗(yàn)結(jié)果理想情況下，果蠅的唾腺染色體應(yīng)該是清晰的5條長(zhǎng)臂加一條短臂。5條長(zhǎng)臂分別為X、2R、2L、3R、3L和短臂4號(hào)染色體。X染色體明顯的特征是在接近末端有一段永久性的膨突，另外，X染色體和4號(hào)染色體都僅僅只有一條臂且X染色體是除了 4號(hào)染色體之外的最短的一條臂。4號(hào)染色體最短，很容易分辨出來(lái)；其次2號(hào)和3號(hào)的染色體的兩條臂不容易區(qū)別，但是,仔細(xì)的看還是有差別的，根據(jù)理想的染色體圖，我們可以發(fā)現(xiàn)，一般情況下3L末端有一個(gè)縊縮，楊大翔在“果蠅唾腺染色體的制備與觀察實(shí)驗(yàn)”的背景知識(shí)一文中用圖片的形勢(shì)展示了各條臂的末端的主要的特點(diǎn)，可以根

5、據(jù)圖示來(lái)辨別各條臂。2 R3 R命點(diǎn)iS;訛疤評(píng)嗨訂®林欽二*'©*琳易4辛切皿列吧d仙Z兀 繳靈測(cè)測(cè)叭4.討論4. 1實(shí)驗(yàn)總結(jié)做好本次實(shí)驗(yàn)，材料很重要。為獲得良好的觀察材料，我們要使果蠅幼蟲(chóng)處于“養(yǎng)尊處優(yōu)”的狀態(tài)，長(zhǎng)得肥肥胖胖。用雌果蠅于22攝氏度恒溫冰箱中培養(yǎng) 7天的到的三齡幼蟲(chóng)的效果最佳，實(shí)驗(yàn)用的黑腹果蠅品種最好為野生和黑檀，這兩種唾腺染色體大，易觀察;在本實(shí)驗(yàn)中，我們用醋酸地衣紅染液代替了傳統(tǒng)的卡寶品紅,省去了染色的步驟；在實(shí)驗(yàn)中，分離唾腺時(shí)由于操作的熟練性,轉(zhuǎn)移時(shí)間間隔較長(zhǎng)， 期間唾腺很容易干燥， 我們可以在載玻片上滴加一定量的生理鹽水,在染色時(shí)吸干就行；

6、壓片時(shí)蓋玻片不能動(dòng)，有一些人在寫(xiě)關(guān)于這個(gè)實(shí)驗(yàn)時(shí)說(shuō)的是揉動(dòng)蓋玻片,但是這樣很容易使染色體斷裂，此法不科學(xué)。4. 2唾腺染色體Painter研究發(fā)現(xiàn)，每種生物的唾腺染色體上的條紋是恒定的、特異性的；將突變體的唾腺染色體與野生型的比較 ，就能將相應(yīng)的基因定位在唾腺染色體臂上，這代表一個(gè)基因在染色體上的實(shí)際位置。1染色體（X根據(jù)這個(gè)性質(zhì)，Bridges制作了第一張果蠅的唾腺染色體圖譜，他規(guī)定：第 染色體）為1 一 20 區(qū),第2染色體為21 一 60區(qū)（左臂21 一 40,右臂41 一 60）,第3染色體為61一 100區(qū)（左臂61 一 80右臂81 一 100）,第4染色體為101 一 102。每一

7、區(qū)又分 A 一 F6段,每一段又按照橫紋的數(shù)目標(biāo)記數(shù)字1、2、3. ,使每一條橫紋都有一定的標(biāo)號(hào)，如 6A2指X染色體的第6區(qū)A亞區(qū)第2條橫紋?，F(xiàn)在國(guó)際上已經(jīng)有成熟的果蠅唾腺染色體圖譜供 研究者參考。果蠅的性別決定是X、 Y型的，但是在雄蟲(chóng)的唾腺染色體中我們沒(méi)有發(fā)現(xiàn)屬于Y染色體的臂，那么Y染色體被整合到哪里去了呢，前蘇聯(lián)的女細(xì)胞遺傳學(xué)Prokofyeva-Belgovskaya（1937）系統(tǒng)地研究了并回答了這個(gè)問(wèn)題。她認(rèn)為部分丫染色體臂與臂近染色體中心的區(qū)段聯(lián)合 ，而臂的其他部分則參與染色中心的形成。與其他臂共同構(gòu)成染其上不形成色中心。染色中心由于其形成的是由各染色體的著絲粒中的異染色質(zhì)共同組成, 條紋，非常的雜亂無(wú)章，不形成固定的條紋，目前也沒(méi)有研究出什么特定的規(guī)律來(lái)。1張志達(dá).參考文獻(xiàn)如何做好，果蠅唾腺染色體觀察”實(shí)驗(yàn)廊坊師專學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）1997年第3期.2楊大翔."果蠅唾腺染色體的制備與觀察實(shí)驗(yàn)"的背景知識(shí).生物學(xué)教學(xué)2005年（第30卷）第4期.:3許祖國(guó).遺傳學(xué)研究的一種重要的實(shí)驗(yàn)材