三七非皂苷類成分分析方法研究進(jìn)展

1、三七非皂苷類成分分析方法研究進(jìn)展 作者：劉波，吳燕紅，沈嘉茵，朱盛山 【摘要】 目的為三七提取的工藝研究提供有效的分析方法。方法對(duì)近年來(lái)國(guó)內(nèi)外有關(guān)三七中非皂苷成分分析方法的大量文獻(xiàn)進(jìn)行總結(jié)。結(jié)果所綜述的分析方法都在非皂苷成分的含量測(cè)定中都取得了成功。結(jié)論綜述非皂苷成分的分析方法對(duì)三七 作者：劉波，吳燕紅，沈嘉茵，朱盛山【摘要】 目的為三七提取的工藝研究提供有效的分析方法。方法對(duì)近年來(lái)國(guó)內(nèi)外有關(guān)三七中非皂苷成分分析方法的大量文獻(xiàn)進(jìn)行總結(jié)。結(jié)果所綜述的分析方法都在非皂苷成分的含量測(cè)定中都取得了成功。結(jié)論綜述非皂苷成分的分析方法對(duì)三七的提取工藝有著重要意義。 【關(guān)鍵詞】 三七； 非皂苷； 分析方法A

2、bstract：ObjectiveTo provide effective analysis methods for extraction technology in Sanqi.MethodsIt is aggreated by collecting lots of documents home and abroad on analysis methods of non-saponin constituents in Sanqi.ResultsThe analysis methods we summarized succeed in the determination of non-sapo

3、nin constituents.ConclusionThe overview on analysis methods of non-saponin constituents in Sanqi is important to the establishment of extraction technology in Sanqi.Key words：Sanqi; Non-saponin; Analysis method 三七是云南道地特產(chǎn)中藥材,來(lái)源于五加科人參屬植物Panax notoginseng(Burk. ) F. H. Chen 的干燥根，主產(chǎn)于云南省文山州。三七主要含有皂苷、多糖、氨

4、基酸等多種化學(xué)成分。三七總皂苷含有人參皂苷Rb1，Rb2，Rc，Rd，Re，Rf，Rg1，Rg2，Rh1 和三七皂苷R1，R2，R3，R4，R6 等20 余種皂苷成分。其中人參皂苷Rb1 (Rb1) 、人參皂苷Rg1 (Rg1) 是三七總皂苷中含量最高的兩個(gè)成分,而三七皂苷R1 (R1) 則是三七總皂苷的特征化合物，但含量較低。三七皂苷的測(cè)定方法主要有：HPLC法、比色法、薄層掃描法等。很多人已對(duì)三七皂苷的檢測(cè)與分析方法進(jìn)行了綜述，如饒高雄1、陸方等2。越來(lái)越多的研究揭示了三七皂苷在抗菌、抗腫瘤、調(diào)節(jié)機(jī)體代謝及免疫、治療心血管疾病和糖尿病等方面具有良好的前景3。近年來(lái)的研究還表明，三七中的非皂

5、苷成分如：揮發(fā)油、黃酮類成分、糖類成分、氨基酸成分、微量元素等也具有很好的生物活性，但是非皂苷成分分析方法的綜述尚未報(bào)道。本文重點(diǎn)就三七中的常見(jiàn)的非皂苷類成分的檢測(cè)和分析方法進(jìn)行較全面的綜述。1 三七中揮發(fā)油成分的測(cè)定 三七中的揮發(fā)油具有強(qiáng)烈三七香氣。揮發(fā)油總油中分離鑒定出34種化合物4，主要有酮、烯烴、環(huán)烷烴、倍半萜類、脂肪酸酯、苯取代物、萘取代物。在醫(yī)藥上三七揮發(fā)油具有微弱消毒及殺菌作用，局部有刺激作用，可松弛肌肉或有興奮作用，內(nèi)服可促進(jìn)胃腸蠕動(dòng)和瀉下。三七中的部分揮發(fā)油更有抑制大腦延髓，鎮(zhèn)靜安神等特殊活性，其中-欖香烯具有抗癌作用。 胥聰?shù)?運(yùn)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用和標(biāo)準(zhǔn)圖譜，對(duì)三七花揮發(fā)

6、油化學(xué)成分進(jìn)行了分析研究。氣相色譜條件為：30 m0.25 mm SE-54石英毛細(xì)管柱；柱溫80200（3min-1）；柱前壓力6ph-2；載氣：He；氣化室溫度230；進(jìn)樣量0.2 l。質(zhì)譜測(cè)定條件：電離方式EI；電子源溫度170；倍增電壓1 200 V；電離電壓70eV；發(fā)射電流0.25 mA；掃描范圍35350；掃描速度1次/s。最終氣相色譜測(cè)出106個(gè)峰，質(zhì)譜測(cè)出59個(gè)化合物，從中鑒定出37種成分，并測(cè)定其相對(duì)含量，以倍半萜類化合物為主。 施麗娜等6用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用并利用標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖集分析了市售三七藥材揮發(fā)油的組成，從中鑒定了34種成分，測(cè)定了相對(duì)含量，其中有13個(gè)倍半萜烯和2個(gè)倍

7、半萜醇。 呂晴等7采用自制的同時(shí)蒸餾萃取裝置提?。ㄋ魵庹麴s，乙醚萃?。┰颇衔纳饺呋ǖ膿]發(fā)油成分，然后經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。結(jié)果揮發(fā)油中共分離出91個(gè)成分，鑒定了53個(gè)化合物，主要為萜烯類及其含氧衍生物（71.15%）。該方法提取和測(cè)定揮發(fā)油高效、適用、準(zhǔn)確。2 三七中糖類成分的測(cè)定 三七含有單糖、鼠李糖、木糖、葡萄糖以及低聚糖和多糖。多糖是三七的有效成分之一,具有多方面的生理活性，部分多糖具有抗腫瘤活性。三七多糖還具有增強(qiáng)免疫功能等活性8, 毒性很低，在較低劑量即有效,對(duì)增強(qiáng)T細(xì)胞功能有較高的選擇性。中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所1987年對(duì)三七多糖進(jìn)行了分離純化, 證明其PNB組分有較強(qiáng)

8、的免疫活性。PNB為分子量110,000道爾頓的雜多糖,由阿位伯糖及半乳糖組成, 其摩爾比為0.611。 劉剛等9采用3，5-二硝基水楊酸法測(cè)定了三七和三七根莖中總糖和還原糖的含量。將樣品、蒸餾水和3，5-二硝基水楊酸混合均勻，在沸水浴中加熱5 min，隨后冷水冷卻，最后于722分光光度計(jì)520 nm處測(cè)定吸光度A。結(jié)果總糖和還原糖的回收率分別為：98.78%(RSD=0.78%)，99.29%（RSD=0.23%）。 崔秀明等10采用苯酚-硫酸比色法分析不同產(chǎn)地、不同規(guī)格、不同采收期三七中的多糖含量，并考察其變化規(guī)律。作者取樣品溶液于具塞試管中，加水至0.4 ml，加入5 %苯酚0. 2 m

9、l混勻，迅速加入濃硫酸1 ml,搖勻，沸水浴加熱20 min，取出，迅速在冰上冷卻，用Beckman 650UV/ V 分光光度計(jì)于490 nm 處測(cè)定吸光度A。結(jié)果顯示，加樣回收率為99%，效果較好，可作為檢測(cè)三七中多糖成分的有效方法。3 三七中脂肪酸成分的測(cè)定 三七種子進(jìn)行風(fēng)干后，用索氏提取器提取得到種仁油。種仁油呈淡黃色，具有三七特有的香氣，其組成主要為脂肪酸。 魯歧等11用GC法分析測(cè)定了人參屬植物的脂肪酸含量。其GC條件為：氯離子化檢測(cè)器，量程2，衰減4；擔(dān)體：Gas Chromsorb Q 100-200目；固定液為DEGS；色譜柱為毛細(xì)管玻璃柱（300 mm32 mm）；固定相配

10、比5%；載氣流速：氮?dú)?0 mlmin-1，氫氣60 mlmin-1，空氣500 mlmin-1；柱溫180，氣化室溫度240，檢測(cè)室溫度240。最后確定三七脂肪酸的組成：棕櫚酸18.02%，油酸14.14%，亞油酸62.80%，亞麻油酸5.04%。 劉潤(rùn)民等12用氣相色譜法鑒定了三七種仁油脂肪酸的組成。作者對(duì)種仁油進(jìn)行皂化，總脂肪酸得率為73.3%，不皂化物2.0%?？傊舅峒柞セ笥脷庀嗌V法分析，其條件為：(1)SE-54-30 m毛細(xì)管柱， 柱溫80-200，程序升溫3min-1，進(jìn)樣量0.1 l；(2)10%DEGSCHRO填充柱，柱溫180，進(jìn)樣量0.13 l。結(jié)合紅外光譜法（IR

11、）確定了脂肪酸的組成為：棕櫚酸3.0%，硬脂酸0.54，花生酸0.46%，棕櫚油酸0.53%，油酸87.48%，亞油酸7.07% ，亞油烯酸0.21%。不皂化物用IR進(jìn)行分析，確定其組成為羽扇豆醇，白樺脂醇，16-羥基羽扇豆醇和豆甾醇。由此可見(jiàn)，紅外光譜和氣相色譜相結(jié)合可有效地鑒定三七種仁油中的成分和測(cè)定其各自的含量。4 三七中黃酮成分的測(cè)定 三七絨根中含有少量的黃酮類成分,魏均嫻等13 從中分離出兩種黃酮類成分：一種是槲皮素，另外一種苷元為槲皮素，糖元鑒定為木糖、葡萄糖和葡萄糖酸，糖的連接次序及位置未定。 鄭瑩等14從三七莖葉中分離得到6個(gè)黃酮類單體化合物，分別為：山柰酚、槲皮素、山柰酚-7

12、-O-L-鼠李糖苷、山柰酚-3-O-D-半乳糖苷、山柰酚-3-O-D-半乳糖葡萄糖苷、槲皮素-3-O-D-半乳糖（21）葡萄糖苷。 槲皮素及其導(dǎo)入親水性基團(tuán)后的衍生物，具有祛痰、止咳、平喘、強(qiáng)心、降血壓、擴(kuò)冠、降血酯、抗炎、抗過(guò)敏、解痙、抗癌、抗出血作用，可作為治療循環(huán)障礙、動(dòng)脈粥樣硬化及閉塞性腦血管疾病藥物。三七黃酮與皂苷合用, 生理活性最強(qiáng), 分開(kāi)使用則證明黃酮能顯著增加心肌冠脈流量。 張仕秀15采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法對(duì)三七莖葉內(nèi)的黃酮類物質(zhì)含量進(jìn)行了初步測(cè)定。作者采用索氏提取法70%的乙醇為溶劑加熱回流4 h，過(guò)濾，取濾液加5%NaNO2 溶液，放置6 min，加10%Al（NO3）

13、3 ，反應(yīng)生成紅色絡(luò)合物，再放置6 min，加4%NaOH溶液加水放置15 min，在500 nm處測(cè)定吸光度，測(cè)定效果可行。 鄭瑩等16用RP-HPLC法測(cè)定了三七葉中兩種主要的黃酮類成分：山柰酚-3-O-D-半乳糖（2 1）葡萄糖苷()和槲皮素-3-O-D-半乳糖（2 1）葡萄糖苷（）的含量。采用ZORBAX Extend C18柱（250 mm4.6 mm，5 m），流動(dòng)相為甲醇-0.15%乙酸水溶液（35：65），流速1.2 mlmin-1，檢測(cè)波長(zhǎng)268 nm，柱溫25。結(jié)果顯示，化合物的平均加樣回收率為97.5%，RSD為0.78%；化合物的平均加樣回收率為101.8%，RSD為1

14、.1%。該方法簡(jiǎn)便快捷，準(zhǔn)確度高。5 三七中三七素的測(cè)定 文山三七中含有19種以上的氨基酸，有7種是體內(nèi)必需的17，其中一種特殊氨基酸稱為三七素（dencichine），具有非常好的止血作用。人參屬的幾種名貴中藥均含有止血成分三七素，但以三七含量最高（0.90），人參次之（0.50），西洋參最低（0.31），因此，三七的止血活性最好。三七素的結(jié)構(gòu)為： 1981年日本小菅卓夫首次從三七中得到了三七素并證明有止血活性。 付春梅等18用HPLC法測(cè)定了三七及其制劑中三七素的含量。迪馬DiamonsilTM C18色譜柱(200 mm4.6 mm，5 m)，自填國(guó)產(chǎn)CYW C18保護(hù)柱(10 mm4.5 mm，5 m)，流動(dòng)相為含3.5 mmolL-1磷酸二氫鈉的甲醇-0.03%四丁基氫氧化胺(2080，磷酸調(diào)pH為3.8)，體積流量為1 mlmin-1，柱溫40，檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm，進(jìn)樣量為20 l。結(jié)果顯示平均加樣回收率為98.8%，RSD為1.7%。 朱靜等19采用柱前衍生化高效液相色譜法測(cè)定了三七及其制劑中三七素的含量。以硼砂緩沖液(pH