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1、第25卷第2期2006年3月食品與生物技術(shù)學(xué)報Journal of Food Science and Biotechnology Vol.25No.2Mar.2006文章編號:167321689(2006022*收稿日期:2005204230;修回日期:2005206211.基金項目:江蘇省農(nóng)業(yè)攻關(guān)項目(B E2004340.作者簡介:朱衛(wèi)紅(19692,女,江蘇吳江人,工程師,食品科學(xué)與工程碩士研究生;3通訊作者.以改性淀粉為壁材制備微膠囊化薄荷油朱衛(wèi)紅,許時嬰3,江波(江南大學(xué)食品科學(xué)與安全教育部重點實驗室,江蘇無錫214036摘要:采用兩種辛烯基琥珀酸酯化淀粉H I 2CA P100和N

2、 2LO K 為壁材,薄荷油為芯材,通過噴霧干燥法制備微膠囊化薄荷油,研究了不同壁材和不同薄荷油載量對微膠囊化產(chǎn)品的產(chǎn)率、效率和保留率的影響。通過正交試驗優(yōu)化了微膠囊化工藝條件,結(jié)果表明,以HI 2CA P100為壁材、薄荷油載量為質(zhì)量分?jǐn)?shù)40%的微膠囊化薄荷油產(chǎn)品的最佳工藝條件為:固形物質(zhì)量分?jǐn)?shù)45%,均質(zhì)壓力35M Pa 、噴霧干燥進(jìn)風(fēng)溫度195。采用差示掃描量熱分析法測定H I 2CA P100為壁材的微膠囊化薄荷油產(chǎn)品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度為53,因此以辛烯基琥珀酸酯化淀粉為壁材制備的微膠囊化薄荷油產(chǎn)品在室溫下具有良好的貯存穩(wěn)定性。關(guān)鍵詞:微膠囊;薄荷油;辛烯基琥珀酸酯化淀粉;噴霧干燥中圖分

3、類號:TS 201.1文獻(xiàn)標(biāo)識碼:APreparation of Microencapsulated Mint Oil Using Starch OctenylsuccinateZHU Wei 2hong ,XU Shi 2ying 3,J IAN G Bo(The K ey Laboratory of Food Science and Safety ,Ministry of Education ,S outhern Y angtze University ,Wuxi 214036China Abstract :Two kinds of starch octenylsuccinates wer

4、e used as wall material to prepare t he microencap sulated mint oil by spray drying.The effect s of different starch and mint oil loading capacity on yield and encap sulation efficiency were st udied.The optimal parameters byort hogo nal experiment s were obtained as follows :solids co ntent 45%,hom

5、ogenizing pressure 35M Pa and dryer inlet temperat ure 195.Furt hermore ,t he glass t ransition temperat ure ofmicroencap sulated mint oilmeasured by DSC was 53,which indicated t hat t hemicroencap sulated mint oil wit h starch octenylsuccinate as wall material displayed good storage stability at ro

6、om temperat ure.K ey w ords :microencap sulation ;mint oil ;starch octenylsuccinate ;spray drying 微膠囊技術(shù)是一種用成膜材料將固體、液體或氣體包覆形成微小粒子,并在一定條件下將其釋放出來的技術(shù)。被包覆的材料稱為芯材,包覆的材料稱為壁材。采用微膠囊技術(shù)可以對很多食品配料如香精、色素、維生素、礦物質(zhì)、酶制劑和微生物等進(jìn)行包覆處理。將香精香料微膠囊化具有以下作用:防止風(fēng)味成份的揮發(fā)、減少風(fēng)味的損失;減少風(fēng)味物質(zhì)和外界環(huán)境的接觸,從而防止變質(zhì);使風(fēng)味物質(zhì)具有緩釋或控釋作用;將液體香精變成固體粉末,使其在食

7、品加工和食品配方中使用更為方便。薄荷油系由薄荷的新鮮莖和葉經(jīng)水蒸氣蒸餾得到的一種芳香植物油,它不僅具有較強(qiáng)的藥理作用,而且具有宜人的香味,在食品、醫(yī)藥和日用化工等方面有廣泛的應(yīng)用,但薄荷油極易揮發(fā),長時間貯存可使其含量下降,制備微膠囊化薄荷油1-3可降低薄荷油的揮發(fā)性,增加穩(wěn)定性,并有利于其在食品中的應(yīng)用。采用噴霧干燥法制備微膠囊化香精油具有操作方便、成本低廉、易于實現(xiàn)連續(xù)化、工業(yè)化生產(chǎn),產(chǎn)品顆粒分散性和復(fù)水性好等優(yōu)點,是目前使用最為廣泛的微膠囊化方法,其理想的壁材應(yīng)具有良好的乳化穩(wěn)定性和成膜性、低粘度、無味、價格便宜等特點4。阿拉伯膠被認(rèn)為是采用噴霧干燥法制備香精香料微膠囊的傳統(tǒng)壁材,20世

8、紀(jì)30年代人們便以阿拉伯膠為壁材,用噴霧干燥法制備微膠囊化香精油5。由于阿拉伯膠價格昂貴,尋求香精香料微膠囊化的新型壁材已成為近年來研究的一個熱點,將淀粉進(jìn)行改性使其具有乳化性,可作為微膠囊壁材替代阿拉伯膠,降低成本。辛烯基琥珀酸酯化淀粉是以淀粉衍生物(包括熱解淀粉、酸解淀粉、酶解淀粉等為原料,與辛烯基琥珀酸酐經(jīng)酯化反應(yīng)而得到的產(chǎn)物。FDA批準(zhǔn)取代度不超過0.02的辛烯基琥珀酸酯化淀粉可作為食品添加劑。由于在淀粉中引入了疏水基,使得辛烯基琥珀酸酯化淀粉同時具有親水和親油的兩性性質(zhì),辛烯基琥珀酸酯化淀粉不僅具有良好的乳化性質(zhì),還具有極佳的乳化穩(wěn)定性6和懸浮穩(wěn)定性7。與阿拉伯膠相比,采用辛烯基琥珀

9、酸酯化淀粉作壁材制備的微膠囊化桔油具有更高的微膠囊化效率8;Y ou2Jin J eon等人采用辛烯基琥珀酸酯化淀粉制備微膠囊化肉類香精9,龍明貴等人以此為壁材制備醬油粉10。作者以國民淀粉公司生產(chǎn)的兩種辛烯基琥珀酸酯化淀粉HI2CAP100和N2LO K為壁材,薄荷油為芯材,制備載量高且穩(wěn)定性好的微膠囊化薄荷油產(chǎn)品。1材料與方法1.1主要試劑及儀器HI2CA P100,N2LO K:國民淀粉有限公司產(chǎn)品;薄荷素油:南通薄荷油廠產(chǎn)品;無水乙醚:上?;瘜W(xué)試劑公司;Ult ra2t urrax T25型高速分散器:德國J anke&Kukel公司制造;A PV1000型均質(zhì)機(jī):丹麥A PV

10、公司制造;QZ25型高速離心噴霧干燥機(jī):無錫市林洲噴霧干燥設(shè)備廠制造;Mastersizer2000型激光粒度分析儀:英國Malvern公司制造;AR1000流變儀:英國TA公司制造;UV1100紫外-可見分光光度計:北京瑞利分析儀器公司制造;Pyris21DSC熱分析儀:美國PE公司制造。1.2實驗方法1.2.1壁材溶液靜態(tài)流變性質(zhì)的測定采用AR1000流變儀,選擇D40mm平行板測量系統(tǒng)(平行板間距0.5mm,測定不同濃度的壁材溶液在20時表觀粘度隨剪切速率的變化,并記錄剪切速率為11s21時的表觀粘度。1.2.2乳狀液穩(wěn)定性的測定制備質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的HI2CA P100和N2LO K溶

11、液,分別在其中加入不同質(zhì)量的薄荷油,攪拌,高速分散器分散1min (22000r/min,高壓均質(zhì)兩次(一級均質(zhì)壓力為30 M Pa,二級均質(zhì)壓力為5MPa,制得不同薄荷油載量的乳狀液。采用Mastersizer2000激光粒度分析儀測定新制備的乳狀液和20放置6h后的乳狀液的粒徑分布和平均粒徑d0.5。1.2.3微膠囊化薄荷油的制備將去離子水加熱到82,在磁力攪拌器上邊攪拌邊加入一定量的H I2CA P100或N2LO K至其完全溶解,冷卻至室溫后,加入薄荷油,攪拌均勻,用高速分散器分散1 min(22000r/min,再進(jìn)行高壓均質(zhì)兩次(一級均質(zhì)壓力為30M Pa,二級均質(zhì)壓力為5M Pa

12、,采用QZ25型高速離心噴霧干燥機(jī)進(jìn)行噴霧干燥,進(jìn)風(fēng)溫度為195,出風(fēng)溫度為95,制備微膠囊化薄荷油產(chǎn)品。1.2.4微膠囊化薄荷油的質(zhì)量評定1微膠囊化薄荷油產(chǎn)品總油的測定:采用水蒸汽蒸餾法11。2微膠囊化薄荷油產(chǎn)品表面油的測定:采用紫外分光光度法。取一定質(zhì)量濃度的薄荷油無水乙醚溶液,進(jìn)行紫外-可見掃描,得薄荷油最大吸收峰為max為203 nm,再取不同濃度的薄荷油無水乙醚溶液測定203 nm處的吸光值(以無水乙醚溶液為參比,以吸光值(A203nm為縱坐標(biāo),薄荷油質(zhì)量濃度(g/mL為橫坐標(biāo)繪制薄荷油工作曲線(見圖1 。圖1薄荷油工作曲線Fig.1Experimental curve of min

13、t oil稱取一定量的微膠囊化薄荷油產(chǎn)品,加入無水乙醚,振蕩、過濾,重復(fù)3次,合并濾液,定容,加入16第2期朱衛(wèi)紅等:以改性淀粉為壁材制備微膠囊化薄荷油無水硫酸鈉脫水,在203nm 處測定吸光值(A 203nm ,計算微膠囊化薄荷油表面油的含量。微膠囊化效率/%=微膠囊包埋芯材的量/(微膠囊包埋芯材的量+微膠囊表面未被包埋芯材的量×100%微膠囊化產(chǎn)率/%=(微膠囊包埋芯材的量+微膠囊表面未被包埋芯材的量/投入產(chǎn)品中芯材的總量×100%微膠囊保留率/%=貯存一定時間的微膠囊包埋芯材的量/貯薦前微膠囊包埋芯材的量×100%1.2.5微膠囊化薄荷油產(chǎn)品玻璃化轉(zhuǎn)變溫度的

14、測定采用Pyris 21DSC 熱分析儀測定微膠囊化薄荷油產(chǎn)品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度,樣品加到DSC 的樣品盒中,同時以空白為參照,從室溫以5/min 升溫至90,記錄加熱過程中的差熱曲線,測定玻璃化轉(zhuǎn)變溫度。2結(jié)果與討論2.1不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)壁材溶液的靜態(tài)流變性質(zhì)由圖2可以看出,兩種辛烯基琥珀酸酯化淀粉H I 2CA P100和N 2LO K 溶液的粘度基本不隨剪切速率的變化而變化,呈現(xiàn)牛頓流體的流動特性 。(a HI 2 CAP100(b N 2LO K圖2壁材質(zhì)量分?jǐn)?shù)對辛烯基琥珀酸酯化淀粉溶液表觀粘度的影響Fig.2E ffect of concentration on viscosity of

15、starch oc 2tenylsuccinate solution由圖3可知,在相同的剪切速率(11s 21下,隨著質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加,H I 2CA P100溶液的粘度緩慢上升,甚至當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)高達(dá)40%時仍能保持低粘度(97.5mPa s ,這有利于在進(jìn)行噴霧干燥時提高固形物含量,是一種理想的微膠囊壁材;而N 2LO K 溶液當(dāng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)從30%升至40%時, 粘度升高較快。圖3不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的辛烯基琥珀酸酯化淀粉溶液在剪切速率為11s 21時的表觀粘度Fig.3Apparent viscosity of starch octenylsuccinate so 2lution with differ

16、ent concentration at 11s 212.2不同壁材和不同薄荷油載量對微膠囊化效率和產(chǎn)率的影響分別以H I 2CA P100和N 2LO K 為壁材制備具有不同薄荷油載量的微膠囊化薄荷油產(chǎn)品,測定其微膠囊化效率和產(chǎn)率。由圖4可以看出,以H I 2CA P100為壁材包埋薄荷油,隨著薄荷油載量的提高,微膠囊化效率和產(chǎn)率均有所下降,但是當(dāng)薄荷油載量為40%時,微膠囊化效率仍可達(dá)到95.4%。在薄荷油載量相同的情況下,以N 2LO K 為壁材制備的微膠囊化薄荷油產(chǎn)品,無論是微膠囊化效率和產(chǎn)率都不如HI 2CA P100為壁材制備的產(chǎn)品,而且隨著薄荷油載量的提高,以N 2LO K 為壁

17、材的產(chǎn)品微膠囊化效率和產(chǎn)率下降得較多 。(a 微膠囊化效率(b 微膠囊化產(chǎn)率圖4不同壁材和不同薄荷油載量對微膠囊化效率和產(chǎn)率的影響Fig.4E ffect of different w all m aterials and mint oilloading capacity on encapsulation eff iciency and encapsulation yield26食品與生物技術(shù)學(xué)報第25卷2.3不同壁材和不同薄荷油載量對微膠囊化薄荷油產(chǎn)品保留率的影響采用HI 2CA P100和N 2LO K 作壁材制備具有不同薄荷油載量的微膠囊化薄荷油產(chǎn)品,將其置于40貯存,定期測定微膠囊化薄

18、荷油的保留率。由圖5可知,采用兩種辛烯基琥珀酸酯化淀粉作壁材制備的微膠囊化薄荷油產(chǎn)品在40貯存均具有較高的保留率,在薄荷油載量和貯存條件相同的情況下,以HI 2CA P100為壁材比以N 2LO K 為壁材制備的微膠囊產(chǎn)品具有更高的保留率,當(dāng)薄荷油載量為40%時,以H I 2CA P100為壁材制備的微膠囊化薄荷油產(chǎn)品在40貯存60d ,其保留率仍達(dá)到97.8%, 顯示出很高的貯存穩(wěn)定性。(a HI 2CAP100(b N 2LO K圖5不同壁材制備的不同薄荷油載量的微膠囊化薄荷油產(chǎn)品在40貯存時的保留率Fig.5E ffect of different w all m aterials an

19、d mint oilloading capacity on retention rate of encapsula 2ted mint oil at 402.4噴霧干燥工藝條件的優(yōu)化以HI 2CA P100為壁材,薄荷油載量為40%,采用噴霧干燥法制備微膠囊化薄荷油產(chǎn)品。采用三因素三水平正交試驗表(見表1,以產(chǎn)品的微膠囊化效率為指標(biāo),對噴霧干燥工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。表1噴霧干燥實驗設(shè)計與結(jié)果T ab.1Spray 2drying experimental design and results試驗號固形物質(zhì)量分?jǐn)?shù)/%均質(zhì)壓力/MPa進(jìn)風(fēng)溫度/微膠囊化效率/%11(351(251(18593.121(

20、352(352(19593.631(353(453(20591.642(401(252(19595.552(402(353(20595.862(403(451(18594.573(451(253(20597.283(452(351(18598.693(453(452(19598.0K 192.895.395.4K 295.396.095.7K 397.994.794.9極差5.11.30.8由圖6可知,對微膠囊化效率影響最大的因素是進(jìn)料的固形物質(zhì)量分?jǐn)?shù),均質(zhì)壓力次之,噴霧干燥的進(jìn)風(fēng)溫度對微膠囊化效率的影響最小。隨著進(jìn)料固形物質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加,微膠囊化效率逐漸提高,這是由于在噴霧干燥過程中,料液進(jìn)

21、入干燥塔與熱空氣接觸,液滴表面的水分迅速揮發(fā),很快在其表面形成一層能透過水分子卻阻隔大多數(shù)揮發(fā)性物質(zhì)通過的半透膜,提高進(jìn)料的固形物質(zhì)量分?jǐn)?shù)有利于縮短液滴表面形成半透膜的時間,從而減少揮發(fā)性物質(zhì)在干燥過程中的損失12,而過分提高進(jìn)料的固形物含量將導(dǎo)致物料粘度太高從而不利于噴霧干燥。試驗結(jié)果表明,噴霧干燥工藝的優(yōu)化條件是固形物質(zhì)量分?jǐn)?shù)45%、均質(zhì)壓力35MPa 、進(jìn)風(fēng)溫度195 。圖6正交試驗因素指標(biāo)關(guān)系圖Fig.6R elationship betw een orthogonal experimental indexes and factors36第2期朱衛(wèi)紅等:以改性淀粉為壁材制備微膠囊化薄荷

22、油2.5影響乳狀液穩(wěn)定性的因素2.5.1均質(zhì)壓力物料經(jīng)均質(zhì)后,體系中的乳化劑吸附在油滴表面以降低界面張力,形成穩(wěn)定的乳狀液。乳狀液液滴的粒徑大小是影響乳狀液穩(wěn)定性的一個重要參數(shù),乳狀液液滴粒徑分布均一且平均粒徑小有利于壁材包覆在油滴表面并阻止乳狀液在均質(zhì)后發(fā)生聚結(jié)13。在相同條件下,隨著時間的延長,乳狀液液滴的平均粒徑增加的速度越慢,則表示壁材的乳化穩(wěn)定性越好。由圖7可知,隨均質(zhì)壓力的提高,乳狀液的平均粒徑略有下降,但變化不大,這與Y oung D.K im 13的研究結(jié)果較為一致。(a 均質(zhì)0h 乳狀液的粒徑分布(b 均質(zhì)6h 乳狀液的粒徑分布圖7均質(zhì)壓力對乳狀液粒徑分布的影響Fig.7E

23、ffect of homogenizing pressure on particle sizedistribution of emulsion從表2可以發(fā)現(xiàn),隨著均質(zhì)壓力的提高,乳狀液的穩(wěn)定性具有先增加后減小的趨勢,這是由于均質(zhì)壓力過高導(dǎo)致分散相顆粒變小,表面能急劇增加,使體系不穩(wěn)定,因而有自動縮小界面的趨勢,即小液滴重新合并變大。表2均質(zhì)壓力對乳狀液穩(wěn)定性的影響3T ab.2E ffect of homogenizing pressure on emulsion stability(ES均質(zhì)條件一級均質(zhì)壓力/MPa二級均質(zhì)壓力/MPa0h 的平均粒徑d 0.5/m 6h 后的平均粒徑d 0.

24、5/m 12050.2880.37123050.2810.35734050.2800.6623采用HI 2CA P100制備乳狀液,薄荷油載量為30%此外,均質(zhì)壓力過高,乳狀液液滴變小,增加大量油-水界面面積,如果具有乳化性能的辛烯基琥珀酸酯化淀粉分子不能及時遷移到界面,亦會導(dǎo)致油滴間聚結(jié)速度加快,從而使乳狀液變得不穩(wěn)定。結(jié)果表明,均質(zhì)壓力為35M Pa 時,形成的乳狀液最穩(wěn)定,而乳狀液越穩(wěn)定,則最終噴霧干燥效率越高。2.5.2不同壁材由圖8可知,在相同薄荷油載量40%的條件下,以HI 2CA P100為壁材制備的乳狀液較N 2LO K 為壁材制備的乳狀液具有更小的平均粒徑,說明HI 2CA

25、P100較N 2LO K 具有更強(qiáng)的乳化能力。從放置6h 后的乳狀液平均粒徑的測定情況看(見表3,H I 2CA P100 為壁材制備的乳狀液較N 2LO K 制備的乳狀液平均粒徑上升更緩慢,說明前者具有更好的乳化穩(wěn)定性。圖8不同壁材對乳狀液粒徑分布的影響Fig.8E ffect of different w all m aterials on particle sizedistribution of emulsion表3不同壁材和不同薄荷油載量對乳狀液穩(wěn)定性的影響T ab.3E ffect of different w all m aterials and mint oil loadingc

26、ap acity on ES壁材薄荷油載量/%0h 的平均粒徑d 0.5/m 6h 后的平均粒徑d 0.5/m HI 2CA P200.2780.358300.2810.367400.3260.504N 2LO K200.4790.617300.4920.684400.5100.8263均質(zhì)條件:一級均質(zhì)壓力30MPa ,二級均質(zhì)壓力5MPa2.5.3薄荷油載量從圖9和表3可以看出,隨著薄荷油載量的提高,采用兩種辛烯基琥珀酸酯化淀粉制備的乳狀液的平均粒徑均有所增加而穩(wěn)定性則有所下降,這是由于隨著分散相(薄荷油體積分?jǐn)?shù)的增加,乳狀液的總界面面積增加,若辛烯基琥珀酸酯化淀粉分子不能及時遷移到油-水

27、界面,則油滴間聚結(jié)速度加快,使乳狀液不穩(wěn)定。但即使當(dāng)薄荷油載量高達(dá)40%時,由這兩種壁材制備的乳狀液在放置6h 后的平均粒徑都小于1m ,說明兩者46食品與生物技術(shù)學(xué)報第25卷 2期 第 朱衛(wèi)紅等 : 以改性淀粉為壁材制備微膠囊化薄荷油 品較好的貯存穩(wěn)定性 。 65 均具有良好的乳壓并穩(wěn)定薄荷油的能力 。 圖9 薄荷油載量對乳狀液粒徑分布的影響 Fig. 9 Effect of mint oil loading capacity on particle size distribution of emulsion 圖 10 微膠囊化薄荷油產(chǎn)品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度 Fig. 10 G lass tra

28、nsition temperature of encapsulated mint oil 2. 6 微膠囊化薄荷油產(chǎn)品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度 玻璃態(tài)與橡膠態(tài)之間的轉(zhuǎn)變 , 稱為玻璃化轉(zhuǎn) 變 , 玻璃化轉(zhuǎn)變時對應(yīng)的溫度為玻璃化轉(zhuǎn)變溫度 ( glass t ransitio n temperat ure , Tg 。物質(zhì)在 Tg 以下 呈玻璃態(tài) ,此時其自由體積幾乎為 0 ,體系粘度非常 大 ,高達(dá) 1012 1014 Pa s ,分子流動阻力極大 ,因而 體系中的分子擴(kuò)散速率很小 ,分子間相互作用和反 應(yīng)速率亦很小 ,食品中常見的氧化 、 褐變 、 風(fēng)味散失 14 等都很緩慢 。由圖 10 可知 ,

29、薄荷油載量為 40 % 的微膠囊化薄荷油產(chǎn)品的玻璃化轉(zhuǎn)變溫度約為 53 ,高于通常的貯存溫度 , 貯存在室溫下的微膠囊 化薄荷油處于玻璃態(tài) , 因而賦予微膠囊化薄荷油產(chǎn) 3 結(jié) 論 辛烯基琥珀酸酯化淀粉 H I2CA P100 是制備的 微膠囊化薄荷油產(chǎn)品的理想壁材 ,它在包埋高載量 薄荷油時具有高的微膠囊化產(chǎn)率 、 效率及保留率 , 噴霧干燥法制備微膠囊化薄荷油產(chǎn)品的最佳工藝 條件為固形物含量 45 % 、 均質(zhì)壓力 35 M Pa 、 進(jìn)風(fēng)溫 度為 195 。微膠囊化薄荷油產(chǎn)品的玻璃化轉(zhuǎn)變 溫度約為 53 ,因此 , 微膠囊化薄荷油產(chǎn)品在常溫 下貯存處于玻璃態(tài) ,具有較好的貯存穩(wěn)定性 。

30、( 責(zé)任編輯 : 李春麗 參考文獻(xiàn) : 1 陸寧 ,宛曉春 ,劉文琴 . 薄荷油 環(huán)狀糊精包結(jié)效果的多指標(biāo)綜合評判 J . 糧油食品科技 ,2004 ,12 (2 :23 - 24. 2 丁燕飛 ,姚瑤 ,陶昱斐 ,等 . 薄荷油乙基纖維素微囊的制備 J . 湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報 ,2003 ,23 ( 3 :21 - 22. 3 彭榮淮 ,徐華軍 ,雍國平 ,等 . 相分離 - 凝聚法制備薄荷醇微膠囊試驗 J . 煙草科技 ,2003 ,193 ( 8 :27 - 28. 45 - 54. 151. 4 Sara J . Risch and Gary A. Reineccius , F1avo

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