腦脊液常規(guī)操作規(guī)程

1、1. 檢指導(dǎo)腦脊液（CSF）常規(guī)測(cè)定。2. 方法原理腦脊液是存在于腦室及蛛網(wǎng)膜下腔中的無(wú)色透明液體。由于脈絡(luò)叢上皮細(xì)胞對(duì)血漿中各種物質(zhì)的選擇性分泌和超濾作用，血漿中各種成分對(duì)血腦屏障的通透性各有不同。其中最易通過(guò)血腦屏障的是氯、鈉、鎂離子及乙醇；其次為清蛋白、葡萄糖、鈣離子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐；纖維蛋白原、補(bǔ)體、抗體、某些藥物、膽紅素、膽固醇則極難或不能通過(guò)。中樞神經(jīng)系統(tǒng)任何部位發(fā)生器質(zhì)性病變時(shí)，如感染、炎癥、腫瘤、外傷、水腫和阻塞等都可以引起腦脊液成分的改變。通過(guò)對(duì)腦脊液理學(xué)檢查，顯微鏡檢查、化學(xué)和免疫學(xué)檢查及腦脊液病原學(xué)檢查，可對(duì)疾病的診斷、治療和預(yù)后判斷提供依據(jù)。腦脊液（CSF常規(guī)

2、測(cè)定內(nèi)容包括：顏色、性狀、有核細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、潘氏試驗(yàn)、細(xì)困等。潘氏（pandys）試驗(yàn)：CSF中的球蛋白與苯酚結(jié)合，形成不溶性的蛋白鹽而產(chǎn)生白色混濁或沉淀。3. 方法性能參數(shù)（如線性、檢出限、測(cè)量區(qū)間、不確定度、準(zhǔn)確性、精密度、靈敏度1顏色（COLOR）6中性粒細(xì)胞（NE）2透明度（clearity）7淋巴細(xì)胞（LY）3凝固性(coagulability )8單核細(xì)胞（MO4腦脊液有核細(xì)胞計(jì)數(shù)（CSNUCL）9潘氏試驗(yàn)（pandys test ）5腦脊液紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（CSF-RBC）和特4. 標(biāo)本類型標(biāo)本類型：新鮮CSF標(biāo)本拒收條件：拒收延遲室溫 2h、冷藏6h未送達(dá)標(biāo)本。標(biāo)本保存與穩(wěn)定

3、性：一般室溫1h內(nèi)完成檢驗(yàn)，久置可致細(xì)胞破壞，影響細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類檢查。5. 要求的容器、防腐劑或添加物、儀器、試劑或分析系統(tǒng)標(biāo)本容器：BD無(wú)促凝成分紅頭管或潔凈干燥帶蓋玻璃管。試劑生理鹽水%Nacl溶液白細(xì)胞稀釋液1%冰乙酸（1ml分析純冰醋酸+蒸餾水至100ml）劉氏快速瑞氏染色液A液：曙紅、甲醇B液：亞甲藍(lán)潘氏試劑10%苯酚溶液（純苯酚10ml+蒸餾水至100ml）試劑存儲(chǔ)和有效期:試劑名稱存儲(chǔ)條件有效期開(kāi)瓶有效期位置生理鹽水室溫1年1年存貨柜/血常規(guī)室操作臺(tái)冰乙酸室溫2年1年藥品柜1匯酸冷藏1年1年試劑冰箱10嘛酚溶液室溫1年1年藥品柜劉氏快速瑞氏染色液室溫2年6個(gè)月藥品柜/染色操作臺(tái)儀

4、器：OLYMPU光學(xué)顯微鏡，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板。6. 校準(zhǔn)程序（計(jì)量學(xué)溯源性）不適用7. 質(zhì)量控制，控制品使用水平和頻率，允許限的糾正措施不適用8. 程序步驟一般性狀檢查：輕輕混勻 CSF觀察量、顏色、有無(wú)凝塊和透明度（一般細(xì)胞數(shù)/ 卩I個(gè)時(shí)或蛋白增加可產(chǎn)生混濁），并記錄。300顯微鏡檢查（1）清或微混標(biāo)本：a）混勻后直接沖入計(jì)數(shù)池，計(jì)數(shù)四角四大方格內(nèi)細(xì)胞總數(shù)（包括RBC NUCL。b）用白細(xì)胞稀釋液作1:1稀釋，計(jì)數(shù)有核細(xì)胞數(shù)C）紅細(xì)胞數(shù)=細(xì)胞總數(shù)-有核細(xì)胞數(shù)（當(dāng)白細(xì)胞數(shù)30個(gè)/卩I時(shí)，在白細(xì)胞計(jì)數(shù)池中直接分類至少 50個(gè)白細(xì)胞）a）稀釋標(biāo)本：于清潔試管中按上表進(jìn)行稀外觀稀釋樣本量稀釋液/溶解劑粉

5、色/輕度混濁1:2020卩l(xiāng)380 卩 l紅色/混濁1:5010卩l(xiāng)490 卩 l帶血量極高/極度混濁1:10010卩l(xiāng)990 卩 l（2）混濁及以上標(biāo)本:釋，用以計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)；b）溶解RBC于清潔試管中按上表進(jìn)行稀釋，用以計(jì)數(shù)有核細(xì)胞數(shù);C）沖池；計(jì)數(shù)d）紅細(xì)胞數(shù)二細(xì)胞總數(shù)-有核細(xì)胞數(shù) 有凝塊或粘稠標(biāo)本：(1)(2):(3)(4)5min離心,吸出上用吸管旋轉(zhuǎn)并擠壓凝塊，擠出里面的液體及細(xì)胞。2000rpm5min離心，分離上清液和沉渣?；靹虺猎?，涂片，用高倍鏡觀察 NUCL、RBC。 報(bào)告每高倍鏡視野的紅細(xì)胞和有核細(xì)胞數(shù)。譏I時(shí)進(jìn)行操作。清液于另一試管，并在試管上編號(hào)。將沉渣混勻涂片，厚薄

6、根據(jù)有核細(xì)胞數(shù)而定，血性標(biāo)本可考慮推片。待干后，瑞氏染色進(jìn)行分類100（分個(gè)NUCL ;如見(jiàn)有不能分類細(xì)胞或懷疑有惡性細(xì)胞時(shí),請(qǐng)示上級(jí)主管，由有經(jīng)驗(yàn)的上級(jí)主管進(jìn)行分析，并在報(bào)告時(shí)另行描述報(bào)告，如腦膜白血病或腫瘤細(xì)胞等。潘氏試驗(yàn)取小試管一支，加入10%勺石碳酸水溶液約5ml，用一次性吸管加一滴CSF上清液立即在黑色背景燈照下觀察結(jié)果。弱陽(yáng)性（）:微呈白霧狀，在黑色背景下才能看到。陽(yáng)性（+）:灰白色云霧狀。2+）：白色渾濁。3+） ：白色濃絮狀沉淀。4+）：白色凝塊。9. 計(jì)算結(jié)果原理顏色為區(qū)別蛛網(wǎng)膜下腔出血和穿刺損傷應(yīng)注意：(1)離心沉淀后：如上層液體呈黃色， 隱血試驗(yàn)陽(yáng)性， 多為蛛網(wǎng)膜下腔出血

7、，且出血時(shí)間已經(jīng)超過(guò) 4 小時(shí)。如上層液體澄清無(wú)色， 紅細(xì)胞均沉管底，多為穿刺出血或因病變所致的新鮮出血。2）紅細(xì)胞皺縮，不僅見(jiàn)于陳舊性出血，在穿刺損傷引起出血時(shí)也可看到，因腦脊液滲透壓較血漿高所致。腦膜炎、重癥如核黃疸等引起。素血癥和膿性腦脊液。透明度：腦脊液混濁程度與細(xì)胞數(shù)量有關(guān)， 腦脊液中細(xì)胞數(shù)超過(guò)300X10/L時(shí)，可出現(xiàn)混濁。蛋白質(zhì)含量增加或含大量微生物也可產(chǎn)生混濁。凝固性：結(jié)核性腦膜炎靜置 12-24 小時(shí)后，標(biāo)本表面有纖細(xì)的網(wǎng)膜形成。蛛網(wǎng)膜下腔梗阻時(shí)，可產(chǎn)生黃色膠凍狀。潘氏試驗(yàn)：有腦組織和腦脊髓膜疾患時(shí)常成陽(yáng)性反應(yīng)如化膿性腦脊髓膜炎、梅毒性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病、脊髓灰質(zhì)炎、流行性腦炎

8、等。腦出血時(shí)多呈陽(yáng)性反應(yīng)，如外傷性血液混入腦脊液中，亦呈陽(yáng)性反應(yīng)。細(xì)胞分類：性質(zhì)有關(guān)。常以淋巴細(xì)胞為主。10. 生物參考區(qū)間顏色（COLOR）無(wú)色透明度（clearity）透明凝固性（coagulability ）無(wú)凝塊潘氏試驗(yàn)（pandystest ）陰性O(shè)R弱陽(yáng)性有核細(xì)胞計(jì)數(shù)（CSNUCL）6成人（0-8 ） X10/L中性粒細(xì)胞（NE）成人（0-6%）兒童（0-15） X106/L新生兒（0-8%）新生兒（0-30） X06/L淋巴細(xì)胞（LY）成人（40-80%單核細(xì)胞（MO成人（15-45%）新生兒（5-35%）新生兒（50-90%）紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（CSF RBC）0X10/L（正常腦脊液中白細(xì)胞主要為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞，之比約為7:3，可含極少中性粒細(xì)胞）。11. 警告值、危急值（適用時(shí)）12. 檢驗(yàn)結(jié)果可報(bào)告區(qū)間13. 對(duì)超出可報(bào)告范圍的結(jié)果的處理如檢到細(xì)菌時(shí)應(yīng)建議培養(yǎng)確認(rèn)。有不能分類細(xì)胞，應(yīng)請(qǐng)示上級(jí)主管，并另行描述報(bào)告，如腦膜白血病或腫瘤細(xì)胞。14. 實(shí)驗(yàn)室解釋15. 安全防護(hù)措施所有樣品按具有潛在傳染性的標(biāo)本處理。測(cè)定完成后，上清液及沉渣試管于 2000mg/L有效氯消毒液浸泡4小時(shí)以上，倒入 醫(yī)療廢物下水槽，由醫(yī)院統(tǒng)一消毒處理；塑料試管或容器等容器等醫(yī)療廢棄物倒入黃色醫(yī)療垃圾袋，貼上標(biāo)簽并封口，由醫(yī)院統(tǒng)一銷毀處理。原液保存48小時(shí)或以上，倒入黃色醫(yī)療垃