中藥含藥血清藥理研究方法

1、中藥含藥血清藥理研究方法Pharmacological method of the drug-contained serum for Chinese Materia Medica in vitro概述中藥血清藥理研究方法：1、2、是指動物灌胃給予中藥及制劑，經(jīng)吸收進入機體血液循環(huán)，在一 定時間內(nèi)采取血液，分離所得血清，必定含有一定量的該藥物成分， 此時的血藥濃度反映了機體的真實血藥濃度， 以此血清加入到體外細 胞培養(yǎng)體系，觀察其藥理作用的體外實驗方法。 中藥血清藥理學研究方法的意義： 采取的含藥物血清與機體內(nèi)環(huán)境相一致且排除了中藥制劑 的各種影響因素（如pH ,滲透壓等），將其加入到體外細胞

2、培養(yǎng)體系，觀察其藥理作用，具有更好的科學性，可行性； 同時，使中藥的研究易于深入到 細胞分子水平 ，對于創(chuàng)建中 藥細胞分子藥理學研究具有重要的促進作用。 于灌胃給藥后不同時間采取的血清， 其體外藥理實驗的效應 及其變化，可以反映機體真實的血藥濃度及其變化， 無疑開 創(chuàng)了對于許多成分不明或復方中藥制劑 藥動學 研究的一種 新方法。3、如采用中藥血清藥理學方法進行中藥藥效學研究時， 同時分 析測定血清中藥物成分的含量， 具有極強的針對性， 可避免 盲目地篩選藥物有效成分的繁重工作， 使中藥藥效與中藥成 分的研究 更能協(xié)調(diào)一致。1988 年日本學者田代真一正式提出了“血清藥理學”這一新概念，至今已有

3、十余年時間。其研究主要經(jīng)歷了三個階段：1、可行性探索研究2、方法學研究3、應用研究階段。可行性探索研究以含藥血清進行體外的藥效學試驗， 早在上世紀五十年代國內(nèi)即有所探索，自田代真一提出“血清藥理學”的概念以后，重新引起了 學術界的廣泛關注。國內(nèi)學者對其進行了廣泛的可行性探索研究。. 抗菌、抗病毒的實驗研究楊奎等應用中藥血清藥理方法進行了中藥體外抗菌實驗，發(fā)現(xiàn)黃 芩、藿香正氣水、 藿香正氣液的血清分別具有明顯的抑菌作用，抑制 率高達 70以上。該研究發(fā)現(xiàn)一些含中藥血清相對于正常血清表現(xiàn) 為促進細菌繁殖作用，表明一些中藥可以降低機體抗御外邪的能力。同時，該研究還發(fā)現(xiàn)，不論是中藥復方，還是單味中藥，

4、均可 出現(xiàn)多 個抑菌高峰 ，表明中 藥抗菌有效成分復雜，其吸收高峰不相一致 ，可 以對細菌給予多次打擊，有利于抑制其繁殖。崔曉蘭等應用口飼桂枝湯的含藥血清進行研究，發(fā)現(xiàn)每日 1 次連 續(xù) 3 天，末次給藥后 2 小時的血清有明顯抑制副流感病毒致細胞病變 的作用，該研究還發(fā)現(xiàn)，桂枝湯煎劑本身并無直接抗副流感病毒作用， 而口飼桂枝湯后的中藥血清則有明顯作用。 因此，血清藥理研究可以 防止假陰性實驗結果 的出現(xiàn)。二. 對單核細胞產(chǎn)生內(nèi)生致熱原的研究楊奎等觀察了口飼黃芩、香薷、羌活勝濕湯、九味羌活丸的含藥 血清對家兔單核細胞 內(nèi)生致熱原 產(chǎn)生過程中單核細胞內(nèi) DNA 、蛋白 質(zhì)合成速度及Ca2+內(nèi)流的

5、影響。結果顯示，口飼黃芩的含藥血清能明 顯抑制單核細胞內(nèi)DNA合成，抑制Ca2+內(nèi)流，并推測出黃芩解熱機 理之一是通過抑制單核細胞內(nèi) DNA合成，抑制Ca2+內(nèi)流而阻斷內(nèi)生 致熱原的合成。含香薷血清、含羌活勝濕湯血清、含九味羌活丸血清 三者對單核細胞內(nèi)DNA合成均有明顯抑制作用；對單核細胞 Ca2+內(nèi) 流的影響， 香薷和九味羌活丸均呈 量效遞增性抑制作用 ；時效關系 表明，九味羌活丸對 Ca2+內(nèi)流的抑制作用在給藥后 90min達高峰，對DNA 合成的抑制作用在給藥后 30min 和 90min 作用較明顯。三. 抗腫瘤作用的實驗研究王力倩等采用中藥血清藥理研究方法進行離體試驗，觀察了含苦參、

6、仙鶴草的血清及其煎劑對腫瘤細胞體外生長的影響結果發(fā)現(xiàn)苦參、仙鶴草煎劑及含苦參血清均有明顯的抗腫瘤活性，而含仙鶴草血清則無效。初步證明苦參對腫瘤細胞體外生長確實有一定的細胞毒性 作用，而含仙鶴草血清及其煎劑出現(xiàn)了不同實驗結果的原因， 可能與 中藥粗制劑因素有關， 也可能受藥物在體內(nèi)代謝過程及血清等因素的 影響。該研究提示， 含藥血清藥理研究對中藥抗腫瘤作用的評價有一 定的意義。四. 對造血系統(tǒng)的實驗研究張英華等用血清藥理方法研究了當歸補血湯對造血祖細胞的影響，發(fā)現(xiàn)含當歸補血湯的血清對小鼠粒系一巨系造血祖細胞（CFUGM ）、紅系造血祖細胞（CFU E）的增殖有明顯的促進作用，隨著 含藥血清量的增

7、加， CFUGM、 CFUE 的增殖數(shù)越高。提示當歸 補血湯能刺激骨髓造血祖細胞， 從而有可能增強粒系一巨系、 紅系細 胞的生長、 成熟而達生血補血的作用。 拆方研究表明當歸補血湯刺激 粒系、巨系造血祖細胞增殖的作用主要源于當歸， 而對紅系造血祖細 胞的作用以黃芪為主。 表明當歸、 黃芪對不同的造血祖細胞的作用各 有側(cè)重，又互相合作，共同調(diào)節(jié)機體的造血補血機能。而當歸補血湯 煎液對 CFUGM 的生長有抑制作用， 劑量越大， 抑制作用越強； 同 時，當歸補血湯水煎液不能刺激 CFUE 的增殖。這與當歸補氣補血 的作用不相符。 由此可見， 血清藥理體外實驗方法克服了中藥粗提物 進行體外實驗的弊端

8、，是一種更為科學有效的中藥復方體外實驗方 法。五. 對呼吸系統(tǒng)的實驗研究董自波等以金蕎麥片為供試藥物， 觀察了含藥血清對離體豚鼠回 腸的松弛作用。 結果發(fā)現(xiàn)， 口服臨床等劑量的金蕎麥片的含藥血清能明顯抑制組胺引起的離體豚鼠回腸的收縮，表明金蕎麥片具有H1 受 體阻斷劑的作用， 能改善氣管炎過敏的臨床癥狀， 時效關系 表明等效 劑量的金蕎麥片給予豚鼠 40 分鐘出現(xiàn)效應， 80 分鐘到達峰值， 160 分鐘效應開始衰減，效應至少可以維持 160 分鐘。量效關系 表明：3 倍與 9 倍臨床等效劑量效應呈比例的增加。 黃堅等發(fā)現(xiàn)小青龍湯藥物 血清具有顯著抗組織胺引起的離體豚鼠氣管平滑肌收縮作用， 且

9、呈良 好的量效關系，與直接煎劑進行離體藥理實驗具有相似的藥理效應。該實驗提示小青龍湯中的抗組織胺的有效成分可通過胃腸道吸收， 進 入血液而起作用， 其有效成分的達峰時間約為 2 小時，表明血清藥效 實驗的可靠性及可信度在某些方面優(yōu)于通常的藥理實驗 。六. 對心血管系統(tǒng)的實驗研究張群豪等采用血清藥理方法觀察到口飼血府逐瘀濃縮丸的含藥 血清對實驗性動脈粥樣硬化家兔主動脈平滑肌細胞 （SMC）增殖有明 顯抑制作用，并呈劑量依賴性。 血府逐瘀湯煎劑直接加入培養(yǎng)基中也 呈現(xiàn)出對 SME 繁殖的抑制作用，且煎劑濃縮液作用強于含藥血清。表明血府逐瘀濃縮丸在體內(nèi)外確均有抑制 SMC 增殖的作用，血府逐 瘀濃縮

10、丸確含抗 SMC 增殖的有效成分，并且此成分口服有效。 血府 逐瘀煎劑濃縮液的抑制作用比含藥血清強， 可能與某些有效成分未能 從消化道吸收或經(jīng)體內(nèi)代謝失活有關 。王偉等用血清藥理研究方法觀察到血府逐瘀膠囊、精制血府膠 囊、硫氮酮三組藥物的含藥血清可顯著降低缺氧缺糖心肌細胞乳酸脫 氫酶（LDH L）、肌酸激酶（CK）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）的釋放，且 精制血府膠囊組、 硫氮酮組更為顯著。 提示精制血府膠囊組對心肌細 胞的保護作用強于血府逐瘀膠囊。劉強等觀察了清心飲對大鼠心肌細胞感染柯薩奇 B3 病毒的影 響，發(fā)現(xiàn)清心飲的含藥血清可明顯減輕實驗性病毒心肌炎的細胞病 變，改善細胞搏動，降低細胞上清液中

11、的病毒滴度，減少感染心肌細B1 病胞乳酸脫氫酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶的釋放，顯著抑制柯薩奇毒核糖的復制。 清心飲的水煎劑液體體外實驗也有上述藥理作用，由 此提示清心飲中含抗病毒、保護心肌細胞的有效成分，口服有效針對以往附子強心作用的研究均采用體外實驗或靜脈直接給藥 的方法， 而無口服給藥的結論。 陳長勛等采用中藥血清藥理方法觀察 了附子對離體豚鼠左心房收縮力的影響。 結果發(fā)現(xiàn)， 與未服藥動物血 清比較，口服附子粗制劑后動物血清有明顯增強心肌收縮力和加快心 肌收縮速度的作用， 給藥后 2 小時血清作用達高峰。 證明附子血清與 附子制劑直接給藥兩者對心肌的正性肌力作用基本相似， 說明其強心 有效成分

12、確能經(jīng)胃腸吸收入血，且不會經(jīng)吸收立即被代謝失活。七. 對神經(jīng)系統(tǒng)的實驗研究劉國卿等采用具有典型神經(jīng)內(nèi)分泌細胞特征的P C12細胞株為實 驗模型，用血清藥理方法觀察了口飼“李氏 5 號方”的含藥血清對神 經(jīng)元的影響。結果發(fā)現(xiàn)含藥血清作用 24小時、48 小時、72 小時時均 能劑量依賴性地促進PC12細胞的增殖，對NaCN加缺糖致PC12細 胞缺血樣損傷模型表現(xiàn)出明顯的抑制和保護作用， 并呈現(xiàn)一定的量效 關系。江雪華等采用新生小鼠大腦皮層進行體外神經(jīng)細胞培養(yǎng)， 建立 離 體的神經(jīng)細胞谷氨酸損傷模型 ，運用血清方法，進一步觀察了含“李 氏 5 號方”的血清對原代培養(yǎng)皮層神經(jīng)細胞谷氨酸損傷的影響。

13、結果 表明“李氏 5 號方”水煎劑（含揮發(fā)油成分）雖能抑制原代培養(yǎng)皮層 神經(jīng)細胞損傷，但作用不如其含藥血清強，同時，含藥血清抑制神經(jīng) 損傷的藥理作用呈劑量依賴性， 提示“李氏 5 號方”可拮抗興奮性氨 基酸神經(jīng)毒性。八. 對肝細胞的實驗研究劉成海等觀察了扶正化瘀方對培養(yǎng)大鼠貯脂細胞功能的影響， 結 果表明，該復方血清能明顯抑制貯脂細胞增殖， 且抑制程度與藥物劑 量及其血清濃度有關， 而且對貯肝細胞內(nèi)外膠原生成也有一定的抑制 作用。季光等研究發(fā)現(xiàn)， 扶正化瘀方血清能顯著促進正常及損傷肝細胞 培養(yǎng)上清液中 ALT 、 AST 活性，抑制正常及損傷肝細胞的膠原生成 率。劉成海等采用扶正化瘀方的血清直

14、接添加于培養(yǎng)的肝纖維化病理形成的重要細胞 大鼠肝細胞及星狀細胞。 結果表明： 含藥血清能抑顯示該方的制星狀細胞增殖、 促進肝細胞增殖。 提示扶正化瘀方有利于損傷肝細 胞的修復、 有助于抑制舌狀細胞活化及其細胞基質(zhì)生成， 抗纖維化作用機理之一。王曉玲等采用血清藥理方法進一步研究了扶正化瘀方抗肝纖維 的配伍作用， 結果表明， 扶正化瘀方及其拆方含藥血清均可抑制星狀 細胞的活化、增殖，抑制其膠原、TGF P 1的基因表達與蛋白生成。其中化瘀組抑制增殖和活化的作用最為突出， 扶正組抑制膠原的作用 最顯著，蟲草菌絲的抑制TGF P 1作用最強。證實了“藥有個性之特長，方有合群妙用”。九. 對免疫功能調(diào)節(jié)

15、的研究曾南等 23 觀察了含蟲草的血清對 IL2 活性的影響，發(fā)現(xiàn) 1.25g/kg 劑量組能增強 IL 2 活性，但 7.5g/kg、3.5g/kg 劑量組作用 不明顯，相反 3.5g/kg 劑量組卻出現(xiàn)抑制作用，這可能與血清的稀釋 度及其內(nèi)容物有關。陰赪宏等應用血清藥理方法觀察了當歸補血湯對小鼠白細胞的 活化作用。時效關系研究表明，當歸補血湯13.2g飲片/ kg體重灌胃 小鼠后 660min 等不同時相的含藥血清對小鼠白細胞均具有活化作 用，量效關系表明，當歸補血湯33.0g飲片/kg體重分別灌胃小鼠 后的含藥血清對小鼠白細胞均具有活化作用。十. 對泌尿系統(tǒng)的實驗研究趙宗江等用血清藥理方

16、法， 觀察了含溫陽降濁湯藥物成分的大鼠MsC 增血清對體外培養(yǎng)的腎小球系膜細胞（ MsC ）增殖有明顯的抑制作用， 且與血清中的藥物含量成正比例關系，提示溫陽降濁湯抑制 殖可能是該藥防治腎小球硬化、 延緩慢性腎功能衰竭進展的重要機理 之一。由此可見， 中藥血清藥理研究方法開辟了中藥研究的新思路， 拓 寬了研究領域，提高了中藥（尤其是中藥復方）體外實驗的可信度。在一定程度上揭示了中藥和復方在胃腸內(nèi)處置過程中活性成分的轉(zhuǎn) 化和改變。中藥含藥血清藥理的方法學研究盡管在上世紀九十年代中期以前，對含藥血清的藥理作用及其價 值作了探討， 但對其實驗方法的各個環(huán)節(jié)尚缺乏系統(tǒng)地研究； 九十年 中期以來， 國內(nèi)

17、對中藥含藥血清藥理進行了較系統(tǒng)的方法學研究， 包 括：1、建立中藥含藥血清體外藥理實驗方法意義的論證。2、含藥血清制備技術的規(guī)范化研究。3、血清藥理方法體外反應體系確定的規(guī)范化技術研究。為采用中藥血清藥理方法開展研究提出初步技術規(guī)范。. 建立中藥含藥血清體外藥理實驗方法意義的論證 一）含藥血清和原藥液體外試驗的比較研究用原藥液和用含藥血清在體外實驗中取得的比較研究發(fā)現(xiàn)， 有的 結果一致， 有的結果不一致 。如桂枝湯原藥液及含桂枝湯血清均有明 顯抑制HSV-1病毒增殖作用；血府逐瘀濃縮丸原藥液及其兔含藥血清對家兔主動脈SMC勺DNA合成均有明顯抑制作用。用原藥液和用含藥 血清在體外實驗中亦可見不

18、相一致結果， 如當歸補血湯對小鼠肝過氧 化脂質(zhì)勺生成具有明顯勺抑制作用， 而當歸補血湯水煎液對小鼠肝過 氧化脂質(zhì)生成則呈現(xiàn)明顯勺促進作用； 當歸補血湯原藥液體外對小鼠NK 細胞無激活作用，含藥血清及整體實驗均有激活作用；桂枝湯原 藥液在體外無直接抑制副流感病毒致細胞病變勺作用， 而給藥后 2 小 時采集勺含桂枝湯家兔血清則有明顯抑制作用。用原藥液和用含藥血清所得結果勺不一致， 究竟何種結果更接近 整體動物實驗和臨床實際， 這需要積累更多勺對比性實驗結果予以澄 清。但從上述實驗結果分析， 用含藥血清所得勺結果似更符合中醫(yī)傳 統(tǒng)勺認識和臨床或整體動物實驗勺結果。二）含藥血清和整體給藥藥效相關性研究

19、含藥血清勺體外藥理實驗結果與該中藥給予動物所得得整體藥 效反應是否具有相關性， 是評價含藥血清體外實驗技術現(xiàn)實應用性勺 關鍵 。研究結果提示：（1）在相應藥效指標上，用含藥血清所得勺體 外實驗結果與該藥口飼后所得勺結果具有相似性。 （2）用含藥血清體 外實驗與整體口飼給藥， 對特定藥理指標進行量效和時效勺對比， 發(fā) 現(xiàn)二者在藥效動力學上有良好勺相關性。 （3）用含藥血清給予模型動 物可以呈現(xiàn)該藥口飼模型動物勺相同藥效。三）含藥血清藥效和臨床療效相關性研究用血府逐瘀丸含藥血清進行體外實驗和用血府逐瘀丸進行臨床 治療前后相關指標觀察， 二者在抑制血小板粘附聚集性及增加紅細胞變形性方面的作用基本一致

20、， 也即用含藥血清進行體外實驗所反映的 結果基本和臨床療效相吻合。二. 含藥血清制備技術的規(guī)范化研究一）采血時間的確定藥物灌胃給動物后， 血藥濃度呈現(xiàn)由低到高、 由高到低的時量過程，何時采血， 是含藥血清制備技術中至關重要的rH步，直接影響藥效的呈現(xiàn)。采血時間過早過晚，不僅不能很好的反映藥效，而且也與 方便實驗操作有關。 因此，通過實驗摸索出一個較為準確而易行的采 血時間是含藥血清制備技術中的重要一環(huán)。 經(jīng)典方法建議， 方劑給藥 后可設定 4-5 個時間點采血， 觀察藥效的時效過程， 選擇藥效峰值時 作為以后實驗的采血時間。另一方面，許多研究顯示，雖然不同方劑 藥效具有各自不同的時效過程， 但

21、藥效峰值一般在給藥后之間； 各實 驗中，給藥后 1-2 小時采集的含藥血清均反應出藥效。也可以連續(xù) 5 個半衰期給藥達到穩(wěn)態(tài)血藥濃度后采血。二）口飼給藥劑量的確定實驗顯示，以相當于臨床等效劑量的 倍口飼給動物小時所采集的 含藥血清，在體外進行相應實驗，能呈現(xiàn)藥理作用。或者遵照新藥藥 效學試驗動物給藥劑量計算方法確定給藥劑量。含藥血清的劑量表述也是一個值得探討的問題，這里涉及血清供 體動物的口飼給藥量以及體外試驗時的含藥血清稀釋后終濃度量。 為 了更確切的表示劑量， 在敘述結果時， 應說明供體動物的口飼給藥劑 量以及體外試驗時含藥血清的終濃度或稀釋倍數(shù)，并以 g 生藥 /kg 體重/U表示劑量（

22、如以含桂枝湯的大鼠血清對HSV-1病毒的作用實驗 為例：動物口飼給藥量為10g生藥/kg體重，實驗時所用含藥血清的 終濃度為1:12稀釋，則含藥血清的劑量為10/12=0.83g生藥/kg體 重/U,這里U表示是血清在體外系統(tǒng)中終濃度時的稀釋倍數(shù)。三）給藥次數(shù)、給藥天數(shù)對藥效的影響重復給藥是臨床常用的治療方法， 給藥次數(shù)、給藥天數(shù)與含藥血 清的藥效有關。 確定一個有效而又簡單易行的給藥方案， 有利于血清 藥理學的推廣和應用。研究顯示， 同一劑量一次給藥優(yōu)于分次給藥 ， 同一劑量多次給藥優(yōu)于單次給藥， 多日給藥優(yōu)于一日給藥 。分析比較 多項實驗結果， 參照中醫(yī)臨床用藥習慣， 現(xiàn)代藥理學中關于血藥

23、濃度 和現(xiàn)有藥動學中半衰期數(shù)值的實際， 為了方便多次給藥后含藥血清的 采集，可每日給藥二次， 連續(xù)二天，第三天上午給藥后 1-2 小時采血， 以便獲得藥效作用強的含藥血清。四）采血部位對含藥血清藥效的影響選擇適當?shù)牟裳课皇菫榱俗畲笙薅?、最方便地獲得含藥血清， 從一些對比實驗看，分別從動脈、靜脈采血對藥效似無明顯影響。如 果藥效物質(zhì)利用、 代謝速度快的從動靜脈中采集的血清， 在藥效上可 能會有所差異， 由此，能否給我們對藥物作用維持時間的認識有所啟 示。另外，從門靜脈和肝靜脈分別采集含藥血清，比較他們的活性， 能否也可給我們就肝臟對該藥物代謝的影響有所啟？這些是含藥血 清應用研究上應進一步進行

24、的工作。五）動物種屬的差異性通過對大鼠、小鼠、兔、犬、豚鼠及正常人血清及含藥血清對不 同反應體系作用的結果顯示， 不同種屬動物血清在不同實驗體系尋求 合適的血清添加量 （指含藥血清在反應體系中的終濃度） 對正確判斷 實驗結果是不可忽視的因素之一， 應在預實驗中予于探討。 一般來說， 提供含藥血清的動物種屬與提供反應體系的動物種屬越接近， 血清的 添加量越大。六）供血的實驗動物數(shù)采集含藥血清所需動物數(shù)應遵循動物實驗的一般原則，如大鼠、 小鼠或豚鼠每組動物數(shù)應不少于 10 只，家兔應不少于 8只，以避免 動物個體差異所致不均勻性。 可以一個動物一份血清， 做個體含藥血 清藥效測定，亦可將同組個體血

25、清混合后作為一個樣本使用。七）含藥血清的保存含藥血清經(jīng)低溫保存后是否對藥效產(chǎn)生影響與所觀察的藥效指標和藥物本身有效成分的穩(wěn)定性有關。如抗病毒實驗，血清可在4C保 存5天或-20 C保存二月，藥效不受影響；在一些生化反應體系中, 含藥血清-20 C保存二月后，有的對藥效無明顯影響，有的對藥效能 產(chǎn)生明顯影響，因此以采用新鮮血清為好。含藥血清藥理方法體外反應體系確定的規(guī)范化技術一）嚴格執(zhí)行正常血清對照含藥血清中除藥物的成分、 藥物的代謝產(chǎn)物和藥物引起的反應產(chǎn) 物外，還有血清中固有的生物活性成分和其他的干擾因素， 能對體外 系統(tǒng)起作用。為排除干擾， 應在實驗時設 正常血清對照組 。正常血清可在給藥前

26、采集或另設一組動物采集， 含藥血清的作用強度， 應與正 常血清比較而確定。二）反應體系中含藥血清添加量（即反應體系中含藥血清的終濃度）含藥血清在體外實驗系統(tǒng)中，一般常和反應液或培養(yǎng)液共同培育。由于種系不同，正常血清對反應對象（細胞、酶等）會產(chǎn)生程度不同的影響，就需要有合適的血清添加量。一般而言，在一定范圍內(nèi)含藥血清的添加量與藥效物質(zhì)的含量成正比。與藥效強度成正比。 但達到足夠添加量后， 繼續(xù)增加含藥血清用量，或引起藥效強度的降低或引起反應系統(tǒng)損傷。 從現(xiàn)有研究結果可見，反應體系中含藥血清終濃度一般在 20%或以下較宜。增加口飼給藥劑量后，含藥血清的添加 量應相應減少。三）血清凍干技術的應用為了

27、增加血清的添加量以更好的反映藥效， 可將含藥血清制成凍 干粉，使用時以維持液溶化。 含藥血清制成凍干粉后可顯著增加反應 體系中血清添加量。四）含藥血清的滅活正常血清中含有大量生物活性物質(zhì)， 它們在含藥血清的反應體系 是否產(chǎn)生干擾，血清經(jīng)56 C 30min滅活后是否可排除這些干擾，而 且在排除干擾的同時對藥效有否影響，值得關注。研究結果提示，血 清滅活后對藥效的影響與選擇的反應體系及正常血清是否含有相關 的活性物質(zhì)有關。 在目前一些生化反應體系中， 血清對藥效似未產(chǎn)生顯著影響。 在細胞培養(yǎng)的抗病毒實驗中， 由于正常血清中含有補體等 生物活性物質(zhì)， 可以較強干擾細胞和病毒的生長和繁殖， 滅活后使

28、這 些作用下降約 50%；含藥血清中既有上述的生物活性物質(zhì)又有藥物的 有效成分， 滅活后排除了正常血清中的生物活性物質(zhì)， 雖然使藥物作 用強度下降，但可體現(xiàn)藥物本身作用，因此， 在體外進行抗病毒實驗 時應采用滅活血清。五）預處理方法對血清活性的影響有些體外實驗和分析研究中需要去除血清中的蛋白， 但血液中的 藥物成分一部分是與血漿蛋白結合而存在， 去蛋白的不同預處理后對 藥效產(chǎn)生何種影響值得關注。 以抗 Ach 收縮支氣管平滑肌為例， 可見 正常血清經(jīng)乙醇、丙酮、甲殼素處理去蛋白后，顯著降低其作用，而 56C 30分鐘使蛋白變性則無明顯影響。也有研究發(fā)現(xiàn)，含小青龍湯 血清經(jīng)丙酮處理后對支氣管平滑

29、肌抗 His 和 Ach 的抑制無明顯影響。血清去蛋白后，對特定的生理生化、效能指標產(chǎn)生不同的影響，其重 要因素是這些生物活性物質(zhì)和藥效物質(zhì)同血清蛋白的結合能力。 我們 似乎有可能用含藥血清去蛋白前后藥效的變化， 來估算有效成分不單、不清楚的中藥復方藥效成分的蛋白結合率。含藥血清藥理的應用研究一. 含藥血清藥物動力學研究已有的實驗工作表明， 中藥復方含有多種有效成分， 用通常的檢 測某一種成分的血藥濃度經(jīng)時變化，不能代表全方的藥代動力學參 數(shù)，多個成分之間還會發(fā)生相互影響。 用含藥血清研究他們對藥效的經(jīng)時變化， 有可能對我們了解中藥復方作用的動力學過程， 指導臨床 給藥方案， 了解中藥復方的作

30、用特點有所裨益。 通過當歸補血湯和大 川芎丸含藥血清對不同藥效的動力學研究過程可發(fā)現(xiàn)， 同一復方不同 藥效間的效應消除半衰期數(shù)值比較接近， 效應達峰時間彼此間有相當 差異。已知消除半衰期是動力學參數(shù)中重要的數(shù)值， 對制定給藥方案 有很大影響，是否有可能通過對該方某一藥效的效應半衰期的估測， 大體可作為確定給藥方案的參考； 達峰時間的差異， 如與血清藥物化 學相結合， 能否作為研究確定不同藥效活性成分的參考， 也是以后值 得研究的內(nèi)容。此外，目前在中藥復方藥物動力學研究中，還常采用 以整體動物藥理效應為測試指標的藥理效應法和以整體動物毒理效 應為測試指標的藥物累積法。 但以中藥血清藥理方法研究中

31、藥復方藥 物動力學有以下特點： 1. 由于采用體外實驗方法， 可以進行大量的藥 理效應試驗觀察，較整體動物易于控制。 2. 同一批試驗，分離出的含 藥血清可以進行多項藥理效應試驗指標觀察， 求出多個藥理效應的藥 動學參數(shù)。 3.如同步檢測含藥血清中的某一成分的血藥濃度， 可以分 析它與哪一項藥理效應指標有關聯(lián)。 需要注意的是，在時間一效應實 驗中所用劑量過小或過大， 可能會干擾藥動學參數(shù)的測定， 加之藥理 效應法較血藥濃度法測定誤差大，建議采用35種有效劑量(其中一 種相當于臨床等效劑量 ) 平行地進行時效測定與比較。二. 中藥血清藥化學研究中藥血清藥化學”和“中藥血清藥理學”是 80 年代末由日本學者田代真一同時提出的， 但發(fā)展速度較后者緩慢。 除可見沿用傳統(tǒng)經(jīng)典的血藥濃度測定外， 尚無獨具特征的研究新方法和思路。 有人提 出以構建血清指紋圖方法來開展研究, 但相關具體研究報道較少。由于含藥血清中的化學成分與含藥血清的藥理效應密切相關, 因而中 藥血清藥化學與中藥血清藥理協(xié)同研究， 可能有助于研究的開展和深 入。采用建立血清指紋圖方