2019年氨磺必利是一種有效的5

1、氨磺必利是一種有效的 5-HT 7拮抗劑 與其體內(nèi)抗抑郁作用有關(guān)Abbas AI, Hedlund PB, Huang XP, Tran TB, Meltzer HY , Roth BL摘要背景 在歐洲許多國家，臨床上氨磺必利已被批準(zhǔn)用于精神分裂癥的治療，而在意大利，治 療適應(yīng)癥還包括： 惡劣心境和輕度抑郁障礙。 諸多臨床研究結(jié)果提示， 氨磺必利能有效治療 重性抑郁障礙。 一直以來， 大家認(rèn)為氨磺必利抗抑郁、 抗精神病的核心機(jī)制是其能夠調(diào)節(jié)多 巴胺功能，可選擇性拮抗 D2/D 3受體。目的 本研究的目的旨在探索氨磺必利的抗抑郁效應(yīng)是否受與其它受體相互作用的脫靶效應(yīng) 所調(diào)節(jié)。材料與方法 我們完成

2、了如下實(shí)驗(yàn)： （ 1）氨磺必利對(duì)大量中樞神經(jīng)系統(tǒng)分子靶點(diǎn)的藥理學(xué)分析；（2）尋找5-HT7a受體的高效親和拮抗劑，繼而觀察氨磺必利對(duì)野生型和5-HT7受體敲除小鼠的抗抑郁療效。結(jié)果 本研究發(fā)現(xiàn)，氨磺必利是一種有效的5-HT7a受體競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑，并與其它的分子靶點(diǎn)沒有相互作用， 這點(diǎn)也許能夠解釋該藥在體內(nèi)抗抑郁作用的機(jī)制。 特別是與野生型同胞不同 之處在于： 在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)這兩種經(jīng)典的抑郁癥嚙齒類動(dòng)物模型中，氨磺必利對(duì)5-HT7受體敲除小鼠無治療效應(yīng)。結(jié)論 氨磺必利的抗抑郁作用可能與5-HT 7a受體拮抗有關(guān)，而并非氨磺必利對(duì)D2/D3受體拮抗所致。關(guān)鍵詞：氨磺必利；5-HT7；5-H

3、T7受體拮抗劑；抗抑郁藥物；非典型抗精神病藥物；DAN2163前言氨磺必利是一種苯甲酰胺衍生物。作為選擇性D2/D3受體拮抗劑，它起初被開發(fā)用于治D2/D3 拮抗特作用，療精神分裂癥（ Perrault et al. 1997）。大量的臨床試驗(yàn)證明，與其它抗精神病藥物相比，氨 磺必利治療精神分裂癥顯示出療效相當(dāng)或更為有效（ Racagni et al. 2004 ）。薈萃分析結(jié)果顯 示，氯氮平、氨磺必利、利培酮、奧氮平比第一代（典型）抗精神病藥物和其它非典型抗精 神病藥療效更顯著 （ Davis et al. 2003; Leucht et al. 2009 ）。在臨床實(shí)際使用過程中發(fā)現(xiàn)， 氨

4、磺 必利 EPS 發(fā)生率較低，這也是其最類似于一種非典型抗精神病藥物的地方（Leucht et al.2002）。但與利培酮及典型抗精神病藥物類似，氨磺必利由于有較強(qiáng)的致使血清催乳素水平明顯升高( Wetzel et al. 1998 )。氨磺必利表現(xiàn)出 D2 受體高親和力和 5-HT 2A 低親和力，這種藥理學(xué)特性使之類似于典型抗精神病藥物，然而在治療方面，它卻 更像一種非典型抗精神病藥物。 研究顯示， 氨磺必利能夠改善精神分裂癥患者的注意力、 執(zhí) 行功能、工作記憶、總體認(rèn)知指數(shù)以及陳述性記憶(Deeks and Keating 2008; Mortimer et al.2007)。但可能會(huì)

5、損害正常人群的識(shí)別記憶功能( Gibbs et al. 2008; Mortimer et al. 2007 )。有趣的是，在治療精神分裂癥和其它精神障礙的過程中，氨磺必利表現(xiàn)出抗抑郁效應(yīng) ( Kim et al. 2007; Montgomery 2002 )。在意大利，氨磺必利已獲準(zhǔn)用于治療惡劣心境，被認(rèn) 為是一種高效抗抑郁劑( Montgomery 2002 )。事實(shí)上， Lecrubier 等使用蒙哥馬利和阿斯伯 格抑郁癥評(píng)估量表， 對(duì)氨磺必利和丙咪嗪治療惡劣心境、 重性抑郁障礙進(jìn)行了療效比較， 結(jié) 果顯示兩者療效相當(dāng)( Lecrubier et al. 1997 )。另外一項(xiàng)研究比較

6、了氨磺必利和氟西汀治療 重性抑郁障礙、 惡劣心境的療效， 結(jié)果顯示兩組等效 (Smeraldi 1998 )，而且兩組的有效率、 不良事件數(shù)量以及脫落率也相當(dāng)。 實(shí)際上， 至少已有 6 項(xiàng)臨床研究表明， 氨磺必利治療惡劣 心境和 /或重性抑郁障礙的療效與陽性對(duì)照藥物類似(Racagni et al. 2004)。學(xué)者們普遍推測(cè)， 對(duì)多巴胺信號(hào)的調(diào)節(jié)是氨磺必利抗抑郁效應(yīng)的核心基礎(chǔ)， 這種推論主 要源于該藥能選擇性拮抗 D2/D 3受體。事實(shí)上， 多巴胺系統(tǒng)在抗抑郁效應(yīng)中似乎在扮演一定 的角色。許多不同種類的抗抑郁藥物，包括氟西汀、氟伏沙明和去甲丙咪嗪，均能夠增加大 鼠前額葉皮質(zhì)細(xì)胞外的多巴胺含量

7、( Tanda et al. 1994; Jordan et al. 1994; Bymaster et al. 2002)。另一方面，舒必利另一種苯甲酰胺衍生物，也能選擇性拮抗D2/D3 受體，當(dāng)將其注入強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的大鼠雙側(cè)伏核， 而非尾狀殼核時(shí)， 會(huì)顯著降低去甲丙咪嗪的抗抑郁效 應(yīng)( Cervo and Samanin 1987)。盡管舒必利在人體上表現(xiàn)出抗抑郁作用，但與阿米替林相 比卻弱很多( Drago et al. 2000)?？傊?，除了氨磺必利，其它苯甲酰胺類藥物與5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRIs)以及三環(huán)類抗抑郁藥相比，未被確認(rèn)具有抗抑郁效應(yīng)。盡管有較為確切的證據(jù)表明， 某些

8、抗抑郁藥物能夠調(diào)節(jié)多巴胺系統(tǒng)， 但除了上述一些現(xiàn) 象學(xué)數(shù)據(jù)， 并無直接證據(jù)顯示選擇性多巴胺受體拮抗劑 (如氟哌啶醇) 在單一治療時(shí)具有抗 抑郁效應(yīng)， 而且在該種情況下， 其它靶點(diǎn)并未受到影響。 另外，阿立哌唑被批準(zhǔn)用于抑郁癥 的聯(lián)合治療， 但它對(duì)抗抑郁劑起效過程中所涉及到的許多生物胺受體和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白均無靶標(biāo)作 用( Shapiro e al. 2003 )。部分研究顯示，抗抑郁藥物聯(lián)合奧氮平能夠有效治療難治性抑郁 或雙相抑郁障礙(Deeks and Keating 2008)。另外，喹硫平通過其主要代謝產(chǎn)物N-脫烴喹硫平(去甲喹硫平) 有效抑制去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，從而發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)，這個(gè)過程并

9、未 包含對(duì)多巴胺受體的任何直接作用。 因此， 我們?cè)噲D驗(yàn)證氨磺必利的抗抑郁效應(yīng)是否源于其對(duì)D2/D3受體的拮抗。通過篩選氨磺必利在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的大量靶點(diǎn)，旨在分析和識(shí)別其抗抑郁作用的機(jī)制。材料和方法放射性配體結(jié)合分析放射性配體購于 Perkin-Elmer及GE醫(yī)療保健中心。使用轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞膜進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合分析，其詳細(xì)制備過程如既往研究所描述(Shapiro et al. 2003; Roth et al. 2002)，且供在線查詢( )。表1羅列了關(guān)鍵信息，例如放射性配體成分和濃 度、溫育緩沖液和溫育時(shí)間，額外信息可在線查詢(http:/

10、/UNC-CH%20Protocol%20Book.pdf )。Schild分析穩(wěn)定表達(dá)5-HT7a受體的細(xì)胞置于白色 OptiPlate-96孔板(Perkin-Elmer)中培養(yǎng)過夜，使用含1%透析胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基，每孔10,000個(gè)細(xì)胞。然后代之以測(cè)定培養(yǎng)基(DMEM培養(yǎng)基含2mM異丁基甲基黃嘌呤以及10 mg/100 ml抗壞血酸)在37 C預(yù)溫育30分鐘；上述測(cè)定培養(yǎng)基中每孔5此的氨磺必利按10倍稀釋成7種終濃度(0、1、3、10、30、100和300nM ); 5分鐘后，每孔 5止的5-HT按10倍稀釋成8種終濃度(0、3、10、 30、1

11、00、300、1000和3000nM )。該分析用于在沒有氨磺必利以及不斷增加氨磺必利的環(huán) 境中，繪制5-HT劑量-反應(yīng)曲線。反應(yīng)過程在37C條件下進(jìn)行 30分鐘。使用GE公司的HitHunter cAMP XS試劑盒測(cè)定cAMP含量，方法同使用說明書。簡言之，在30分鐘反應(yīng)的終末加入 cAMP抗體，之后再立即加入 Galacton-Star、Emerald-Il、裂解液和cAMP XS+ED 試劑以1:5:19:25的比例配制成的混合液。室溫溫育1小時(shí)后加入cAMP XS+EA試劑，然后置于室溫溫育1小時(shí)。使用標(biāo)準(zhǔn)3粒子計(jì)數(shù)器讀取發(fā)光信號(hào)，并采用微軟Excel以及科學(xué)圖形計(jì)算軟件 Graph

12、pad Prism進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。在 Graphpad Prism中，球形擬合與 Hill方程結(jié) 合的改良 Gaddum/Schild模型(Motulsky and Christopoulos 2004 )。殘差平方和的 F檢驗(yàn)用于 判斷Schild和Hill斜率是否顯著不同于整體。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為1012周的雄性5-HT 7-/-小鼠及其5-HT7+/+雄性同胞對(duì)照。5-HT 7-/-小鼠品系 的來源在既往研究已有描述( Hedlund et al. 2003 )。本研究所用之小鼠在 C57BL6J的背景 下至少回交16代。所有行為學(xué)實(shí)驗(yàn)始于 09:00AM。小鼠處于24小時(shí)晝夜循環(huán)中(白天

13、06:00AM 開始， 18:00PM 結(jié)束），自由進(jìn)食進(jìn)水。所有的實(shí)驗(yàn)均遵循美國國立衛(wèi)生研究院 頒布的 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物照護(hù)與使用指南 ，并獲得斯克利普斯研究機(jī)構(gòu)動(dòng)物照護(hù)與使用委員會(huì)的 批準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)中盡量減少實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物數(shù)量，并減輕其痛苦。懸尾實(shí)驗(yàn)懸尾實(shí)驗(yàn)的步驟參考既往研究（ Hedlund et al. 2005）。用黏帶將小鼠的尾部固定在離臺(tái)面 50cm 的金屬桿上。為便于與既往研究進(jìn)行比較，實(shí)驗(yàn)持續(xù)6 分鐘，在后 4 分鐘計(jì)算小鼠不動(dòng)時(shí)間。不動(dòng)定義為沒有任何肢體或軀干運(yùn)動(dòng)，但應(yīng)排除呼吸運(yùn)動(dòng)。強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)的步驟同既往研究所描述（ Hedlund et al. 2005 ）。將小鼠輕輕放在

14、一個(gè)直徑16cm，高度25cm的圓形塑料水缸里，水缸中注入 25 C潔凈水至水深10cm。實(shí)驗(yàn)持續(xù) 6 分鐘， 最后 4 分鐘計(jì)算小鼠不動(dòng)時(shí)間。 不動(dòng)定義為在水中沒有任何水平或垂直運(yùn)動(dòng)， 除外小 鼠為將頭部保持在水面以上而產(chǎn)生的小幅度運(yùn)動(dòng)。每只動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前均會(huì)換水。藥物治療懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)前 30 分鐘進(jìn)行腹腔內(nèi)注射。氨磺必利購自于 Sigma-Aldrich 公司。 將藥物溶解于以0.9%NaCI溶液配制成的50mM酒石酸中，注射的總體積為 0.2ml。溶媒作 為空白對(duì)照。數(shù)據(jù)分析所有數(shù)據(jù)以均數(shù) 標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM ）來表示?；蛐秃?或藥物治療之間的差異采用雙因素方差 分析，基因型和藥

15、物治療各作為一個(gè)因素。方差分析之后采用Bonferroni 法校正。使用GraphPad Prism 軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析； P0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果氨磺必利對(duì)人5-HT 7a受體具有高親和力為明確氨磺必利抗抑郁作用的藥理機(jī)制， 我們采用 受體組分析方法篩選了大量潛在靶點(diǎn)（Armbruster and Roth 2005; Table 1 ），并證實(shí)氨磺必利是一種有效的選擇性作用于D2/D3受體的藥物。氨磺必利對(duì)這兩種受體的抑制常數(shù)Ki分別為（3 1）門皿和（3.5 0.5）nM。然而該藥物對(duì)于另外兩種我們以前尚未確認(rèn)的靶點(diǎn)也有較高的親和力，分別是5-HT2b和5-HT 7a受體

16、。氨磺必利對(duì)5-HT 2b受體的抑制常數(shù) 心為(13 1)nM,與氚麥角酸二乙胺(HLSD) 競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合5-HT7a受體的抑制常數(shù) &為(11.5土 0.7)nM,而3HLSD與5-HT 7a受體的平衡解離 常數(shù)為 6.6nM (Shen et al. 1993; Roth et al. 1994; Fig.1 )。另外，氨磺必利對(duì) h5-HT ia受體以 及對(duì)其它與抗抑郁藥物藥理機(jī)制有關(guān)的分子靶點(diǎn)親和力低( Roth et al. 2004)。氨磺必利是一種有效的人5-HT 7a受體拮抗劑最初的篩選證實(shí)了氨磺必利對(duì)人5-HT 7a受體具有高親和性。已知嚙齒類動(dòng)物和人類具有多種5-HT7受體的剪

17、接變異體，但是5-HT對(duì)它們的親和力和效能卻沒有差別。在大鼠體內(nèi)，迄今為止最常見的亞型是5-HT7a( Heidmann et al.1998 )。鑒于藥物對(duì)不同的 5-HT7剪接變異體具有一致的藥理學(xué)特性, 于是我們使用氨磺必利將其全部篩選后, 著重研究了被高 度表達(dá)的5-HT7a變異體。通過另一個(gè)競(jìng)爭(zhēng)性分析，我們對(duì)自己的研究發(fā)現(xiàn)將加以詳細(xì)說明。 此次氨磺必利與3H5-CT競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合5-HT7a受體；后者對(duì)5-HT 7a受體具有亞納摩爾級(jí)親和力(Thomas et al. 1998; To et al. 1995; Fig. 2 )。 3H5-CT 優(yōu)先標(biāo)記高親和力、 激動(dòng)劑結(jié)合位點(diǎn), 而3H

18、LSD作為較弱的部分激動(dòng)劑，則主要標(biāo)記低親和力、拮抗劑結(jié)合位點(diǎn)。我們推測(cè)，如 果氨磺必利是5-HT7a受體的拮抗劑，它將優(yōu)先削弱3H5-CT標(biāo)記位點(diǎn)的親和力。事實(shí)上，氨磺必利對(duì)3H5-CT標(biāo)記的5-HT 7a受體親和力非常低(Ki=135.5 15.8 nM )，這說明了它 是拮抗劑。前一部分研究表明氨磺必利不會(huì)誘導(dǎo) cAMP 堆積也證實(shí)了這一論點(diǎn)(數(shù)據(jù)未列 出)。然后，在沒有以及不斷增加氨磺必利濃度的環(huán)境下，繪制5-H T激動(dòng)5-HT7a受體的劑量 -反應(yīng)曲線,之后采用最小二乘法非線性回歸來球形擬合改良Gaddum-Schild 方程的量效曲線( Motulsky and Christopo

19、ulos 2004 )。由圖可見,隨著氨磺必利濃度的不斷增加,量 效曲線平行右移，表明氨磺必利是一種可逆的競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑(Fig.3 )。殘差平方和的 F檢驗(yàn)顯示Schild斜率與1沒有顯著差異，表明氨磺必利是5-HT7a受體的競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑。由球形擬合 Gaddum-Schild 方程所得的競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑拮抗參數(shù)(7.94 0.08)估算平衡解離常數(shù)Kd為(11.4 0.8) nM，這與我們之前對(duì)3HLSD標(biāo)記的受體位點(diǎn)抑制常數(shù)親和力估算相一 致。因而，氨磺必利對(duì) 5-HT 7a受體而言，是一種高親和力的競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑。5-HT 7受體調(diào)節(jié)氨磺必利在體內(nèi)的抗抑郁效應(yīng)既然5-HT 7a受體是氨磺必利在

20、體內(nèi)的新靶點(diǎn)，那么5-HT7受體有可能是其發(fā)揮抗抑郁作用的基礎(chǔ)。如果是這樣，那么氨磺必利對(duì)于 5-HT7-/- 小鼠則缺乏抗抑郁效應(yīng)。既往有報(bào)道(Hedlund et al. 2005 ; Guscott et al.2005)，在懸尾實(shí)驗(yàn)(TST)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)(FST)中， 如僅注射溶媒，5-HT 7-/-小鼠比5-HT 7+/+小鼠的不動(dòng)時(shí)間更短。盡管兩種抑郁癥模型中氨磺 必利的有效劑量不同，但是氨磺必利在5-HT 7+/+小鼠中的量效曲線均呈“U”型(Fig.4)。TST中1mg/kg藥物和FST中0.1mg/kg藥物均能縮短5-HT 7+/+小鼠的不動(dòng)時(shí)間，這與預(yù)期的 抗抑郁效應(yīng)相一

21、致。另一方面，對(duì)于5-HT7-/- 小鼠，氨磺必利劑量在 TST 中低于 10 mg/kg，在 FST 中低于 1mg/kg 的情況下，對(duì)不動(dòng)時(shí)間并無影響，即未表現(xiàn)出抗抑郁效應(yīng)。當(dāng)氨磺必 利劑量在TST中增至10 mg/kg, FST中增至1mg/kg時(shí)，5-HT 7-/-小鼠不動(dòng)時(shí)間顯著延長至 5-HT 7+/+小鼠的水平，這可能是由高劑量氨磺必利產(chǎn)生的錐體外系反應(yīng)所致。與之相似的是，高劑量氨磺必利(TST中3mg/kg和10 mg/kg，F(xiàn)ST中3mg/kg和1mg/kg)致使原本在5-HT 7+/+ 小鼠中表現(xiàn)出的明確抗抑郁作用消失。 氨磺必利這種低劑量抗抑郁作用的特點(diǎn)與臨床研究所 報(bào)道

22、的結(jié)果一致( Racagni et al. 2004)。討論本研究顯示，氨磺必利是一種有效的5-HT7a受體拮抗劑，這也是其具有抗抑郁效應(yīng)的重 要位點(diǎn)。 氨磺必利獨(dú)特的治療反應(yīng)很難由其已知的藥理學(xué)特性來解釋。研究表明, 氨磺必利對(duì)突觸前多巴胺自受體具有一定選擇性,特別是在低劑量時(shí)選擇性作用于邊緣系統(tǒng)或紋狀 體，這一點(diǎn)可能與其治療特點(diǎn)有關(guān)(Schoemaker et al.1997)。然而，值得注意的是，氟哌啶醇對(duì)突觸前多巴胺自受體具有相似的作用, 而事實(shí)上, 另一種苯甲酰胺衍生物舒必利 也表現(xiàn)出同樣的邊緣系統(tǒng)選擇性(Schoemaker et al. 1997)。與氨磺必利相比,盡管舒必利也選

23、擇性作用于D2/D3受體，但它及相關(guān)的苯甲酰胺類藥物，如雷氯必利、瑞莫必利和甲氧 氯普胺并不與5-HT7受體結(jié)合(Roth et al. 1994)。雖然舒必利與氨磺必利的藥理學(xué)特點(diǎn)非常 相似,但前者在人體內(nèi)的抗抑郁作用非常微小( Drago et al.2000) ,不僅如此,當(dāng)它與抗抑 郁劑聯(lián)合使用于抑郁癥大鼠模型時(shí),甚至?xí)勾笫蠡貜?fù)至抑郁狀態(tài)(Cervo and Samanin1987) 。盡管幾乎沒有證據(jù)表明多巴胺能信號(hào)調(diào)節(jié)是氨磺必利發(fā)揮抗抑郁作用的充要條件, 但抗抑郁劑能夠調(diào)節(jié)前額葉皮質(zhì)的多巴胺水平 (Tanda et al. 1994) ,這進(jìn)一步證明多巴胺在 其療效調(diào)節(jié)方面具有一

24、定的作用。實(shí)際上，氨磺必利因其對(duì) D2/D3受體的選擇性和臨床上表現(xiàn)出的抗抑郁效應(yīng)，被認(rèn)為是 唯一只依賴多巴胺能模式而發(fā)揮作用的抗抑郁藥。 然而,一方面這種調(diào)節(jié)多巴胺能的藥物對(duì) 抑郁癥有效, 另一方面, 其它相關(guān)的苯甲酰胺類藥物卻缺乏抗抑郁效果, 故推測(cè)氨磺必利的 抗抑郁作用可能得通過其它的一些靶點(diǎn)來解釋。 為尋找迄今為止尚未被確認(rèn)的氨磺必利的作用靶點(diǎn)， 我們對(duì)多種克隆受體進(jìn)行了平行篩選。 篩選結(jié)果與既往研究相一致 (Schoemaker etal.1997)，表明氨磺必利相對(duì)選擇性地作用于D2D3受體。除此之外，我們還發(fā)現(xiàn)了另外兩種以前未被報(bào)道的靶點(diǎn)：5-HT2B和5-HT 7a受體。5-H

25、T 2B受體激動(dòng)與心臟瓣膜病變有關(guān)(Rothman et al. 2000; Roth 2007; Berger et al. 2009 )，但諸如氨磺必利等 5-HT 2b受體拮抗劑(Huang et al.,待發(fā)表)則表現(xiàn)安全。目前尚無證據(jù)表明5-HT 2B受體參與調(diào)節(jié)氨磺必利的治療作用。另一方面，一直以來，大量研究認(rèn)為晝夜節(jié)律調(diào)節(jié)、心境、睡眠結(jié)構(gòu)、體溫調(diào)節(jié)、 抑郁行為 ( Hedlund and Sutcliffe 2004;Bergeret al.2009 )的病因?qū)W機(jī)制， 以及抗精神病藥物的 作用(Roth et al.1994)均與 5-HT 7受體有關(guān)(Shen et al. 1

26、993; Lovenberg et al. 1993;Bard et al. 1993)，進(jìn)一步提示該受體可能是氨磺必利抗抑郁效應(yīng)的候選靶點(diǎn)。事實(shí)上，本研究也發(fā)現(xiàn)氨磺必利是一種有效的5-HT7a受體競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑，由此推測(cè)5-HT 7a受體拮抗可能與氨磺必利的抗抑郁效果相關(guān)。為檢驗(yàn)這一假設(shè)，我們采用體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的方法，預(yù)期氨磺必利對(duì)于 5-HT7受體基因敲除小鼠無效。結(jié)果如預(yù)期所示，在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng) 迫游泳實(shí)驗(yàn)中， 低劑量氨磺必利對(duì) 5-HT7-/- 小鼠無抗抑郁效應(yīng)，而對(duì)其同胞 5-HT 7+/+小鼠卻有效。這不太可能是由于 5-HT7-/-小鼠較短的基線不動(dòng)時(shí)間所造成的地板效應(yīng)，因?yàn)镾SRI類抗抑

27、郁藥西酞普蘭能減少懸尾實(shí)驗(yàn)中5-HT7+/+和5-HT7-/-小鼠的不動(dòng)時(shí)間(Hedlund et al.2005)。懸尾實(shí)驗(yàn)中，5-HT 7+/+小鼠經(jīng)氨磺必利治療后，其不動(dòng)時(shí)間約縮短25%，這與既往所報(bào)道的5-HT7受體拮抗劑SB269970的效應(yīng)相一致，然而卻不及西酞普蘭之效果一一高達(dá)50%以上的不動(dòng)時(shí)間縮短率( Hedlund et al. 2005)。最后，高劑量氨磺必利能延長不動(dòng)時(shí)間，這與懸尾 實(shí)驗(yàn)中D2/D3受體拮抗劑依替必利所產(chǎn)生的不動(dòng)時(shí)間延長效應(yīng)相一致(Ferrari and Giuliani1997)，進(jìn)一步證明D2/D3受體的拮抗作用并不能解釋氨磺必利的抗抑郁效應(yīng)。因此，

28、在懸 尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)兩種最佳的抑郁癥動(dòng)物模型中，5-HT 7受體成為氨磺必利在體內(nèi)發(fā)揮抗抑郁作用的關(guān)鍵調(diào)節(jié)位點(diǎn)。一些以 5-HT 7受體為靶點(diǎn)的藥物效應(yīng)研究與我們的假設(shè)高度一致。既往研究及本研究均 顯示，在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中，5-HT7-/-小鼠的不動(dòng)時(shí)間顯著短于 5-HT 7+/+小鼠(Hedlund et al.2005; Guscott et al.2005 )，提示減少5-HT 7受體信號(hào)傳導(dǎo)具有抗抑郁效應(yīng)。SB269970 (一種選擇性5-HT7受體拮抗劑)能縮短懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中5-HT7+/+小鼠的不動(dòng)時(shí)間，而對(duì) 5-HT 7-/- 小鼠無作用( Hedlund

29、 et al. 2005) 。至少有另一項(xiàng)研究中證實(shí)了 SB269970在懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的抗抑郁效應(yīng)(Wesolowska et al. 2006 )。最后，另一種5-HT7受體拮抗劑(SB258719)也被證實(shí)能顯著縮短強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間(Guscottet al. 2005)。值得注意的是，長期氟西汀治療能下調(diào)下丘腦部位5-HT 7受體表達(dá)( Sleight et al. 1995;Mullins et al. 1999 )，伴隨著 5-HT 7受體信號(hào)的改變而逐漸顯現(xiàn)的抗抑郁效應(yīng)進(jìn)一步證實(shí)， 降低 5-HT 7受體信號(hào)傳導(dǎo)有益于治療抑郁癥。抗抑郁治療影響到的另一個(gè)重要生理

30、學(xué)參數(shù)是 睡眠。一直以來， 睡眠結(jié)構(gòu)改變被認(rèn)為與抑郁癥有關(guān)。 抑郁患者表現(xiàn)出第一次進(jìn)入快動(dòng)眼睡 眠(REM )的潛伏期縮短，但總 REM睡眠時(shí)間延長(Brunello et al. 2000 )。大多數(shù)抗抑郁 藥能使睡眠結(jié)構(gòu)正?；黾覴EM睡眠潛伏期并減少總 REM睡眠時(shí)間(Staner et al.1999) 。諸多研究提示， 抗抑郁藥物使睡眠結(jié)構(gòu)正常化的能力與抑郁癥患者的臨床療效呈正 相關(guān)，但也有少部分研究無法重復(fù)該結(jié)果( Ott et al. 2002)。 5-HT 7受體拮抗劑 SB-656104-A 所引起的REM睡眠改變與大多數(shù)SSRI類和三環(huán)類抗抑郁藥物相一致，即延長 REM睡眠

31、啟動(dòng) 的潛伏期以及縮短總 REM睡眠時(shí)間(Thomas et al. 2003)。此外，5-HT7-/-小鼠表現(xiàn)出較少 的REM睡眠(Hedlund et al. 2005 )。有研究表明，5-HTy受體被拮抗可能會(huì)影響神經(jīng)元形態(tài)( Kvachnina et al. 2005 )，刺激海馬神經(jīng)發(fā)生( Nandam et al. 2007;Kodama et al. 2004 )或與 其它抗抑郁藥產(chǎn)生協(xié)同作用( Xu et al. 2006 )，這與抗抑郁藥物的作用機(jī)制相一致，因?yàn)椴?分研究認(rèn)為抗抑郁藥物的療效與海馬神經(jīng)發(fā)生相關(guān)( Santarelli et al. 2003; Malberg

32、et al.2000) ，當(dāng)然也有一些研究并不支持這一觀點(diǎn)(Holick et al. 2008 )。因此，如同我們所常 用的SSRI類和三環(huán)類抗抑郁藥，5-HT 7受體拮抗劑也引起了很多相同的生理學(xué)改變。普遍認(rèn)為氨磺必利是通過拮抗D2/D3受體來發(fā)揮其臨床上的抗抑郁效應(yīng)，這主要來自于兩條推論。首先，在藥物前期篩選過程中，氨磺必利表現(xiàn)出對(duì)D2/D3受體具有選擇性，提示這個(gè)藥物的任何治療作用一定會(huì)受到這種機(jī)制的調(diào)節(jié)； 其次， 大量研究顯示， 抗抑郁藥物會(huì) 影響多巴胺和多巴胺受體， 于是推測(cè)多巴胺能系統(tǒng)的變化可能是抗抑郁藥物作用機(jī)制的重要 環(huán)節(jié)(Dailly et al.2004 )。但很多證據(jù)卻

33、使氨磺必利通過拮抗D2/d3受體來調(diào)節(jié)其抗抑郁效應(yīng)的論點(diǎn)受到質(zhì)疑。首先，也許也是最主要的，沒有其它D2/D3受體拮抗劑，包括其它苯甲酰胺衍生物， 在動(dòng)物模型和人體中表現(xiàn)出非常有效的抗抑郁作用。 其次， 盡管很多有力的證 據(jù)表明抗抑郁藥治療中會(huì)伴有多巴胺能的變化， 但并不意味著這種現(xiàn)象是抗抑郁藥物起效的 關(guān)鍵性因素。本研究證實(shí)了氨磺必利能夠阻斷5-HT7a受體，這可能可以解釋該藥物的抗抑郁作用。研究顯示慢性抗抑郁藥治療能夠引起5-HT 7受體功能變化(Sleight et al. 1995; Mulli ns et al.1999) 。此外，懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)中，與其同胞相比，5-HT7-/

34、- 小鼠不動(dòng)時(shí)間較短(Hedlund et al. 2005; Guscott et al. 2005 )。5-HT 7a受體拮抗劑對(duì)抑郁癥動(dòng)物模型有效(Hedlund et al. 2005 )，并且對(duì)睡眠結(jié)構(gòu)具有同大多數(shù)抗抑郁藥物一樣的效應(yīng) (Hedlund et al.2005; Wesolowska et al. 2006 ）。5-HT 7受體拮抗劑與目前被批準(zhǔn)的抗抑郁藥物對(duì)海馬神經(jīng)發(fā) 生具有相似的影響（Kvachnina et al. 2005 ）。最后，許多抗抑郁藥對(duì) 5-HT?受體具有高親和 力，提示作用于該受體可能會(huì)進(jìn)一步完善抗抑郁治療的藥理學(xué)機(jī)制，從而增強(qiáng)抗抑郁效果（Shen et al. 1993 ）。因此，許多證據(jù)表明5-HT 7a受體可能是氨磺必利在體內(nèi)發(fā)揮抗抑郁作用的重要位點(diǎn)。我們的數(shù)據(jù)顯示，氨磺必利對(duì)5-HT 7-/-小鼠無抗抑郁作用，所以關(guān)于該藥抗抑郁作用機(jī)制的其它觀點(diǎn)都存在高度疑問。另外，氨磺必利通過拮抗5-HT7受體而成