三七總皂苷的減壓內(nèi)部沸騰提取及樹脂吸附分離

1、三七總皂苷的減壓內(nèi)部沸騰提取及樹脂吸附分離    【摘要】     目的提高三七總皂苷的收率及純度。方法三七粉末經(jīng)少量70%乙醇解吸后，以水為溶劑在45及-0.084 MPa下進行減壓內(nèi)部沸騰提取，提取兩次，4 min/次，提取液經(jīng)濃縮后，直接采用大孔樹脂進行吸附分離。結(jié)果得到的浸膏中三七皂苷R1、人參皂苷Rb1及Rg1三者含量之和達到70.0，得率達到5.4，大大高于傳統(tǒng)方法。結(jié)論減壓內(nèi)部沸騰提取與大孔樹脂吸附分離相結(jié)合的工藝具有提取速度快、無需水沉或醇沉工序、收率高及質(zhì)量好等特點，具有良好的應用前景

2、    【關(guān)鍵詞】  三七； 三七皂苷； 提?。?減壓； 內(nèi)部沸騰Extraction and Isolation of Notoginseng Saponin within Panax notoginseng by Decompressive Internal Boiling ExtractionLI Chunling, WENG Yanying, ZHAO Zhongxing, WEI Tengyou* ,TONG Zhangfa（School of Medicine,Guangxi Traditional Chinese Medical

3、University, Nanning 530001, China;School of Chemistry and Chemical Engineering, Guangxi University, Nanning 530004, China）Abstract：ObjectiveTo increase the yield and the purity of total saponin of Panax notoginseng.MethodsThis study applied decompressive internal boiling method for the extraction .I

4、n this method, Panax notoginseng powders were desorbed by the 70 percent ethanol at first, and then were extracted twice in 45 and -0.084Mpa by the water solvent, each time 4min. After condensed the solution  was directly purified with macroporous resin.ResultsThe total contents of notoginsenos

5、ide R1 and Ginsenoside Rb1, Rg1 from extract could get to 70.0,the yield  was 5.4%, and these two results were much higher than those from traditional method .ConclusionThe method of decompressive internal boiling extraction combined with macroporous resins absorption separation has many featur

6、es such as fast extraction, high yield and good quality, without water precipitation or alcohol precipitation etc.Key words：Panax notoginseng；  Notoginseng saponin；  Extraction；  Decompression；  Internal boiling    三七主要產(chǎn)于云南、廣西等地1，其總皂苷具散淤止血、活血化淤、消腫止痛等功效。為了避免三七根中淀粉糊化

7、，目前主要采用醇提2和提取液水沉、大孔樹脂純化的工藝3，乙醇消耗量大，有效成分損失多。文獻4提出采用內(nèi)部沸騰法提取植物有效成分。為了降低提取溫度，文獻5提出了減壓內(nèi)部沸騰的方法。本文把減壓內(nèi)部沸騰提取與大孔樹脂吸附分離相結(jié)合，對三七總皂苷進行了提取與分離。結(jié)果表明，在45提取得到透明干凈的上柱液，經(jīng)柱純化后得到總皂苷含量為70.0,得率為5.4的產(chǎn)品，與傳統(tǒng)法相比，生產(chǎn)效率及產(chǎn)品質(zhì)量都有明顯的提高。1  器材1.1   材料三七（產(chǎn)地云南）。人參皂苷Rg1和Rb1及三七皂苷R1對照品（中國藥品生物制品檢定所，110703-200322）；95%乙醇、甲醇(分析純)

8、；乙腈(色譜純)；大孔吸附樹脂HPD-400（河北滄州寶恩化工有限公司）。1.2   設備PC2501紫外分光光度計、RE-52AA型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、FZ102微型植物粉碎機、精密恒溫浴槽、電熱真空干燥箱、液相色譜Waters2695（美國Waters公司）。2  方法2.1   提取減壓內(nèi)部沸騰法：取10.00 g三七粉碎物料于三角瓶中，加入一定量濃度乙醇溶液作為解吸劑使之潤濕均勻，25靜置解吸30 min時間（除了第2次提取用的是濕物料外，兩次提取的解吸操作均相同）；待解吸充分后，加入一定溫度熱水，同時迅速降低三角瓶中氣壓，使物料內(nèi)部有少量氣泡

9、溢出，實現(xiàn)內(nèi)部沸騰強化提取，提取兩次，合并濾液，分析。    傳統(tǒng)醇提：取10.00 g三七粉碎物料，放于250 ml圓底燒瓶中，加入100 ml 70%的乙醇溶液提取劑沸騰回流提取兩次，提取1.5 h/次，合并濾液，分析。2.2   減壓內(nèi)部沸騰法提取液的大孔樹脂純化吸附泄漏曲線：稱取預處理好的HPD-400樹脂15 g，濕法裝填于直徑10 mm，高300 mm的吸附柱。分別取300 ml濃縮到8 mg/ml，4 mg/ml和2 mg/ml的三七提取液以每1 ml/min的速度上柱，每10 ml收集1次流出液，分析流出液，繪制泄漏曲線。

10、60;   洗脫劑濃度選擇：將吸附三七提取液的樹脂先用蒸餾水洗去除雜質(zhì)，再分別用100 ml 50%，60%，70%，80%，90%的乙醇洗脫，將流出液進行分析，確定最佳洗脫劑濃度。2.3   傳統(tǒng)提取液的大孔樹脂純化提取液的預處理：把提取液濃縮到4 mg/ml，過濾去掉沉淀物，得到上柱液。    吸附純化：在直徑10 mm，高300 mm的吸附柱中，裝入預處理好的HPD-400樹脂15 g，然后以每1 ml/min的速度上柱140 ml，然后分別用蒸餾水洗滌和100 ml 80%乙醇洗脫，洗脫液經(jīng)濃縮后，干燥得到產(chǎn)品。2.

11、4   高效液相色譜分析62.5   得率的定義得率（Yield）提取得到Rg1，Rb1，R1質(zhì)量之和/原料質(zhì)量×1003   結(jié)果3.1   減壓內(nèi)部沸騰解吸過程影響因素解吸過程的目的是讓解吸劑充分滲透植物細胞組織，使有效成分離開原來的位置溶解于解吸劑中。圖12分別是在減壓提取條件（100 ml蒸餾水、溫度及相應的壓力為50及-0.075 MPa、兩次提取都為4 min）相同下，不同乙醇濃度（乙醇用量固定為8 ml）和乙醇用量(乙醇濃度固定為70%)對提取得率的影響。從圖12知，這些因素對得率的影響都存

12、在最佳值，乙醇濃度太高或太低，其滲透植物細胞的效果都不理想；乙醇用量太少滲透不均勻，太多消耗過多提取溶劑的熱量，影響內(nèi)部解吸劑沸騰效果。最佳解吸條件為8 ml 70%乙醇溶液。圖1  乙醇濃度對提取得率的影響（略） 圖 2  乙醇用量對提取得率的影響（略）3.2   減壓內(nèi)部沸騰過程因素的影響圖35分別是在最佳解吸條件下，不同提取溫度（提取時間4 min/次、水用量100 ml）、不同水用量（提取溫度45相應壓力為-0.084 MPa，提取時間4 min）、不同提取時間（提取溫度45相應壓力為-0.084 MPa，水用量100 ml）的提取結(jié)果

13、。在圖3中三七皂苷得率隨溫度升高而升高，主要原因是溫度高內(nèi)部沸騰充分，但溫度超過45后得率增加不多，考慮溫度高會導致淀粉糊化，影響后續(xù)分離，選用45為最佳提取溫度。圖4中三七皂苷得率隨水用量增加而增加，當溶劑用量達100 ml時三七皂苷得率已接近最大值；圖5表明，盡管提取溫度較低，但每次提取只4 min，三七皂苷得率便達到最大值，充分顯示內(nèi)部沸騰提取速度的優(yōu)勢。圖3  水的溫度對提取得率的影響（略） 圖4  水的用量對提取得率的影響（略）圖5  提取時間對提取得率的影響（略）3.3   大孔樹脂純化圖6是  

14、60; 3個濃度上柱濃縮液的吸附泄漏曲線。雖然最濃上柱液吸附效果欠佳，但實驗發(fā)現(xiàn)吸附、脫附及再生過程柱沒有堵塞，這說明減壓內(nèi)部沸騰與大孔樹脂分離的直接配合是可行的。而4 mg/ml的上柱液濃度是合適的，每次為140 ml。圖7是乙醇洗脫液濃度對提取得率的影響，乙醇濃度為80時提取得率最高。圖6  不同濃度上柱液的泄漏曲線（略）圖7  洗脫劑濃度對樹脂解吸效果的影響（略）3.4   減壓提取法與傳統(tǒng)回流法的比較表1為本方法與傳統(tǒng)方法的主要結(jié)果比較。從表1中可以看出：加熱提取快了22倍（不考慮室溫處理時間）；乙醇用量減少了2.4倍，主要是傳統(tǒng)法用乙

15、醇提取，而本方法用水提；總皂苷得率及含量分別提高了1.4和7.7，傳統(tǒng)法收率低主要是上柱前經(jīng)過過濾造成的損失及Rb1的收率下降過多，含量低主要是上柱液雜質(zhì)多引起的；雖然R1及Rg1含量比傳統(tǒng)法稍低，但由于得率高，總的提出量還是比傳統(tǒng)法高，但Rb1含量比傳統(tǒng)法高了9.2，原因是Rb1熱穩(wěn)定性較差，長時間加熱提取損失較大。表1  減壓法與傳統(tǒng)醇提法的比較（略）4  討論    減壓內(nèi)部沸騰提取與大孔樹脂吸附分離的結(jié)合，可以省去水沉或醇沉工序，生產(chǎn)效率及產(chǎn)品質(zhì)量明顯好于傳統(tǒng)方法。    減壓內(nèi)部沸騰法提取最佳操作參數(shù)為解吸劑乙醇濃度為70%，用量為樣品量的1.6倍，在-0.084 MPa及45下提取，提取兩次，4 min/次，水用量為物料量的20倍。    由于存在熱敏性成分Rb1，減壓低溫提取對三七是比較適宜的。    【參考文獻】  1 劉 翀，韓金玉，常賀英，等三七莖葉提取物中人參皂苷Rb3的分離及指紋圖譜J天津大學學報,2006,39(10):1151.2 唐紅芳,毛麗珍,徐世芳.正交試驗法研究三七提取工藝J.中草藥,2001,32(1):26.3 歐來良,史作清,施榮富，等.強極性大孔吸附樹脂對三七皂苷的分離純