臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)

1、臨床微生物學(xué)檢驗(yàn)第二章1.細(xì)菌大小以微米（m）為測(cè)量單位。2.細(xì)菌結(jié)構(gòu)： 附屬結(jié)構(gòu)：鞭毛、菌毛（光鏡下看不見(jiàn)，不能作為鑒定依據(jù)，沒(méi)鑒定價(jià)值）或纖毛； 表層結(jié)構(gòu)：糖萼（莢膜或粘液層）；內(nèi)部結(jié)構(gòu)：細(xì)胞質(zhì)、質(zhì)粒、芽孢。3.細(xì)菌功能： 動(dòng)力（鞭毛是細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)器官），觀察細(xì)菌動(dòng)力可用懸滴法或壓滴法在顯微鏡下直接觀察其運(yùn)動(dòng)，也可將細(xì)菌穿刺接種半固體培養(yǎng)基觀察動(dòng)力。 鞭毛具有鑒定價(jià)值，采用鞭毛特殊染色（如鍍銀染色）可觀察有無(wú)鞭毛及鞭毛數(shù)量、分布；一般染色不能看見(jiàn)鞭毛（如革蘭氏染色）。4.芽孢的功能：對(duì)熱力、干燥、輻射、化學(xué)消毒劑等具有強(qiáng)大抵抗力； 以是否殺死芽孢作為物品消毒滅菌判斷效果的指標(biāo)。 芽孢在菌體的

2、位置和直徑大小隨菌種不同，這種形態(tài)特點(diǎn)有助于細(xì)菌鑒別。5.細(xì)菌生長(zhǎng)曲線（要求整個(gè)過(guò)程，結(jié)合生長(zhǎng)曲線記憶4個(gè)時(shí)期比較容易，可能是簡(jiǎn)答題） 細(xì)菌二分裂方式進(jìn)行繁殖。 以傾注平板法計(jì)數(shù)孵育后的菌落數(shù)可換算出菌落形成單位（CFU）。 生長(zhǎng)曲線：連續(xù)檢測(cè)細(xì)菌不同培養(yǎng)時(shí)間的CFU，以CFU為縱坐標(biāo)，培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)作出一條反映細(xì)菌生長(zhǎng)數(shù)變化的規(guī)律曲線。 典型的生長(zhǎng)曲線分為遲緩期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、穩(wěn)定期、衰亡期。 遲緩期。也稱為準(zhǔn)備時(shí)期，是細(xì)菌適應(yīng)環(huán)境的過(guò)程。特點(diǎn)：細(xì)菌的核酸、蛋白質(zhì)、輔酶等物質(zhì)合成增加，細(xì)胞體積增大，細(xì)菌數(shù)量恒定或極少量增加。 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。特點(diǎn)：細(xì)菌以最大的速率生長(zhǎng)和分裂，細(xì)菌數(shù)量成對(duì)數(shù)增加。

3、細(xì)菌代謝活躍、穩(wěn)定，其大小、形態(tài)、染色性和生化反應(yīng)典型，對(duì)外界因素反應(yīng)敏感，是檢測(cè)細(xì)菌生物學(xué)性狀和進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)的適宜階段。不添加培養(yǎng)基下一般細(xì)菌對(duì)數(shù)期維持48h。 穩(wěn)定期。特點(diǎn)：由于培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗、有害代謝產(chǎn)物積累和PH等環(huán)境變化，細(xì)菌生長(zhǎng)速率降低，細(xì)菌死亡數(shù)增加使生長(zhǎng)繁殖菌數(shù)和死亡數(shù)處于動(dòng)態(tài)平衡，細(xì)菌數(shù)量達(dá)到最大，即處于穩(wěn)定期。此時(shí)期細(xì)菌合成代謝產(chǎn)物較多，通常維持10h。向培養(yǎng)基系統(tǒng)中補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，取走代謝產(chǎn)物，改善培養(yǎng)條件，可延長(zhǎng)穩(wěn)定期。由于代謝產(chǎn)物較多，是細(xì)菌生化反應(yīng)試驗(yàn)鑒定的最佳時(shí)期。 衰亡期。特點(diǎn)：細(xì)菌死亡速率逐步增加，活菌數(shù)減少，死亡數(shù)大于增加數(shù)，細(xì)菌形態(tài)不典型，甚至出

4、現(xiàn)自溶，該時(shí)期的細(xì)菌不能用于細(xì)菌的鑒定和研究工作。6.細(xì)菌的生化反應(yīng)：由于不同細(xì)菌所具有的酶系統(tǒng)各不相同，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解能力也不一致，因而其代謝產(chǎn)物不同。根據(jù)此特點(diǎn)，利用生化試驗(yàn)的方法來(lái)檢測(cè)細(xì)菌對(duì)各種基質(zhì)的代謝作用及其代謝產(chǎn)物，從而鑒別細(xì)菌的反應(yīng)。7. 滅菌：破壞和去除物體上所有微生物（包括病原微生物和非病原微生物）和細(xì)菌芽孢的方法。 消毒：是破壞物體上活的病原微生物的方法，但不包括細(xì)菌芽孢和非病原微生物。 防腐：直接使用防腐劑破壞或抑制活病原微生物的方法。 無(wú)菌：防止感染病原體進(jìn)入滅菌組織或物品的操作技術(shù)稱為無(wú)菌操作，無(wú)菌即不存在活微生物。第四章有感染性的完整病毒顆粒稱作病毒體（virio

5、n）1.病毒的大小以納米（nm）測(cè)量單位。2.病毒的結(jié)構(gòu):分為基本結(jié)構(gòu)和輔助結(jié)構(gòu)。 基本結(jié)構(gòu)：包括核心（含一種類型核酸即DNA或RNA）和衣殼（蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)），二者構(gòu)成核衣殼。 輔助結(jié)構(gòu)：包膜（功能：維護(hù)病毒體結(jié)構(gòu)的完整性；與宿主細(xì)胞膜親和及融合；決定病毒種、型抗原的特異性）和其他輔助結(jié)構(gòu)（纖維刺突或纖突）。第七章1.細(xì)菌標(biāo)本采集原則： 盡早采集。一旦懷疑細(xì)菌感染，應(yīng)及時(shí)采集標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，對(duì)細(xì)菌感染的診斷和治療具有極其重要意義。 選擇不同采集時(shí)機(jī)和標(biāo)本種類。根據(jù)臨床癥狀和流行病學(xué)資料可預(yù)測(cè)感染性疾病的病原體，根據(jù)病程和感染部位的不同，選擇合適時(shí)機(jī)采集不同種類標(biāo)本。 在抗生素應(yīng)用前采集。感染

6、可帶來(lái)生命危險(xiǎn)，臨床醫(yī)生會(huì)在細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)出結(jié)果之前使用抗生素治療，抗生素的使用將影響病原菌的檢出。因此應(yīng)盡可能在抗生素使用前留取標(biāo)本。 遵守?zé)o菌操作。在采取如腦脊液、血液或穿刺液等正常狀態(tài)下的無(wú)菌部位標(biāo)本，應(yīng)嚴(yán)格注意無(wú)菌操作，不得被其他部位細(xì)菌污染。在有正常菌群寄居的部位，如口咽部、鼻咽部和泌尿生殖道等部位應(yīng)采取措施避免正常菌群的和其他菌群的污染。盛放標(biāo)本的容器應(yīng)無(wú)菌。 正確保存和運(yùn)送。采集的標(biāo)本均含有病原體或潛在的病原體，必須做好標(biāo)本的正確保存和運(yùn)送，容器應(yīng)密封不易碎，標(biāo)本不得污染容器的口和外壁。采集的標(biāo)本應(yīng)及時(shí)運(yùn)送，遠(yuǎn)距離運(yùn)送時(shí)，一般應(yīng)冷藏（但對(duì)腦膜炎和淋病奈瑟菌，需保溫3537）。2.細(xì)菌

7、的生理生化特征檢測(cè)（其中為碳水化合物的代謝試驗(yàn)，為蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝試驗(yàn)，為碳源和氮源利用試驗(yàn)） 氧化發(fā)酵試驗(yàn)（OF試驗(yàn)）。又稱HughLeifson (HL)試驗(yàn)。必須在有氧環(huán)境中才能分解葡萄糖的是專性需氧菌；無(wú)論在有氧或無(wú)氧的環(huán)境中都能分解葡萄糖的是兼性厭氧菌。細(xì)菌以分子氧作為電子受體分解葡萄糖的稱為氧化型；細(xì)菌以無(wú)氧降解的方式分解葡萄糖的稱為發(fā)酵型；不能分解葡萄糖的細(xì)菌稱為產(chǎn)堿型。利用此試驗(yàn)可區(qū)分細(xì)菌的代謝類型。用于細(xì)菌種屬間的鑒別。腸桿菌科細(xì)菌為發(fā)酵型，非發(fā)酵菌通常為氧化型或產(chǎn)堿型。微球菌屬可氧化葡萄糖，葡萄球菌屬能發(fā)酵葡萄糖。 七葉苷水解試驗(yàn) 用于革蘭陰性桿菌（不變色）和腸球菌屬（

8、陽(yáng)性:黑色）的鑒定甲基紅（MR）試驗(yàn)。 原理：細(xì)菌在代謝過(guò)程中分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，某些細(xì)菌可進(jìn)一步將丙酮酸分解為乳酸、乙酸、甲酸等，使培養(yǎng)基的pH下降至4.5以下，加入甲基紅指示劑出現(xiàn)紅色（陽(yáng)性）。有些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸量少，或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其他物質(zhì)，培養(yǎng)基的酸堿度維持在pH6.2以上，加入甲基紅指示劑呈黃色（陰性）。 主要用于大腸埃希菌（陽(yáng)性）和產(chǎn)氣腸桿菌（陰性）的鑒別。沙門(mén)菌屬、志賀菌屬、枸櫞酸桿菌屬、變形桿菌屬等為陽(yáng)性，腸桿菌屬、克雷伯菌屬等為陰性。 VP試驗(yàn)。 原理：細(xì)菌在葡萄糖的代謝過(guò)程中生成丙酮酸，有些細(xì)菌可將丙酮酸進(jìn)一步脫酸產(chǎn)生乙酰甲基甲醇。乙酰甲基甲醇在堿性溶液中被空氣

9、中的氧氧化為二乙酰（丁二酮），進(jìn)而與培養(yǎng)基中的精氨酸所含的胍基發(fā)生反應(yīng)，生成紅色化合物（VP反應(yīng)陽(yáng)性）。 VP試驗(yàn)常與與甲基紅試驗(yàn)一起使用，兩試驗(yàn)的結(jié)果陽(yáng)性、陰性相反。即甲基紅試驗(yàn)為陽(yáng)性的細(xì)菌，在VP試驗(yàn)中則為陰性（如大腸埃希菌、沙門(mén)菌屬、志賀菌屬）；甲基紅試驗(yàn)為陰性的細(xì)菌，在VP試驗(yàn)中則為陽(yáng)性（沙雷菌屬、陰溝腸桿菌）。 吲哚試驗(yàn)。 原理：細(xì)菌分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚，與試劑中的對(duì)二甲氨基苯甲酸作用，形成紅色的玫瑰吲哚。 主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。 枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)。當(dāng)細(xì)菌利用銨鹽作為唯一氮源，利用枸櫞酸鹽作為唯一碳源時(shí)，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長(zhǎng)分解枸櫞酸鈉，使培養(yǎng)基變堿（陽(yáng)性）。有助

10、于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。 氧化酶試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果未產(chǎn)生顏色反應(yīng)（如腸桿菌科）為陰性，產(chǎn)生顏色反應(yīng)（如弧菌科、非發(fā)酵菌屬，奈瑟菌屬）為陽(yáng)性。 過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)（觸酶試驗(yàn)） 鏈球菌屬的觸酶，金氏桿菌屬細(xì)菌陰性卵磷脂酶試驗(yàn)。產(chǎn)生卵磷脂酶的細(xì)菌，會(huì)在菌落周圍形成乳白色混濁環(huán)并擴(kuò)大（陽(yáng)性）。用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的鑒定。 Optochin敏感試驗(yàn)。幾乎所有的肺炎鏈球菌都敏感，其他鏈球菌則耐藥。 桿菌肽敏感試驗(yàn)。A群鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎100%敏感，其他群鏈球菌對(duì)桿菌肽通常耐藥。 凝固酶試驗(yàn)。金黃色葡萄球菌產(chǎn)生凝固酶，使血漿凝固（陽(yáng)性）。表皮及腐生葡萄球菌的凝固酶則（陰性）。IMViC（I指吲哚試驗(yàn)，M指甲基紅試驗(yàn)，V

11、指V-P試驗(yàn)，C指枸櫞酸鹽試驗(yàn)）試驗(yàn)的兩種細(xì)菌的試驗(yàn)結(jié)果：大腸埃希菌 + + 產(chǎn)氣腸桿菌 + +3.病毒大小的測(cè)定方法：電子顯微鏡直接測(cè)量；超過(guò)濾法；超速離心法。4.分離培養(yǎng)病毒的方法主要有三種：動(dòng)物接種；雞胚接種；組織培養(yǎng)。 組織培養(yǎng)為主要的病毒分離培養(yǎng)技術(shù)，廣泛使用的組織培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞培養(yǎng)。 根據(jù)細(xì)胞的來(lái)源、染色體特性和傳代次數(shù)的不同，分為：原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)（是正常細(xì)胞）二倍體細(xì)胞培養(yǎng)（是正常細(xì)胞，廣泛用于病毒分離和疫苗制備）傳代細(xì)胞培養(yǎng)（類似腫瘤細(xì)胞，常用于病毒的分離和鑒定，不能用于疫苗制備）5.病毒的理化性狀的檢測(cè)： 有包膜病毒對(duì)乙醚、氯仿、膽鹽等脂溶劑均敏感，無(wú)包膜病毒對(duì)脂溶劑有抵

12、抗。即乙醚敏感試驗(yàn)中有包膜病毒為陽(yáng)性，無(wú)包膜病毒為陰性。 耐酸性試驗(yàn)中，不同pH值下不同病毒會(huì)被很快滅活。如腸道病毒可耐pH3，鼻病毒在pH3-5環(huán)境中很快被滅活。6.試比較病毒與細(xì)菌的異同處？ 區(qū)分細(xì)菌的芽孢和真菌的孢子（補(bǔ)充）7.真菌的培養(yǎng)方法：試管培養(yǎng)法（使用方便、不易污染）；大培養(yǎng)法（培養(yǎng)后菌落較大，用于觀察菌落，但該法容易污染）；小培養(yǎng)法（又稱微量培養(yǎng)法，是觀察真菌結(jié)構(gòu)及生長(zhǎng)發(fā)育的有效方法），其又分為：玻片法、瓊脂方塊培養(yǎng)法、小型蓋片直接培養(yǎng)法。第八章體外抗菌藥物的敏感試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法（又稱K-B法），被WHO推薦為定性藥敏試驗(yàn)的基本方法。 原理：將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測(cè)試

13、菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后不斷地向紙片周圍擴(kuò)散，形成遞減的濃度梯度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測(cè)定菌的生長(zhǎng)被抑制，從而形成無(wú)菌生長(zhǎng)的透明圈即抑菌圈。抑菌圈的大小反映測(cè)試菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感性，并且抑菌圈與該藥物對(duì)測(cè)試菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負(fù)相關(guān)。 抗菌藥物紙片。選擇直徑6.35mm，吸水量20l專用藥敏紙片，20保存?zhèn)溆茫看挝从猛甑乃幟艏埰?保存。內(nèi)酰胺類抗生素紙片4保存不宜超過(guò)1周，否則效價(jià)會(huì)降低。 培養(yǎng)基。CLSI水解酪蛋白（MH）瓊脂為藥敏試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，pH為7.27.4，瓊脂厚度4mm。 細(xì)菌接種。接種物的準(zhǔn)備可采用液體生長(zhǎng)法或直接菌落懸液法。用0

14、.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)管（1.5×108 CFUml）校正菌液濃度，于15min內(nèi)接種完畢。各紙片緊貼在瓊脂表面，給紙片中心相距24mm，紙片距平板內(nèi)緣15mm。 結(jié)果解釋和報(bào)告：接種正確時(shí)，細(xì)菌生長(zhǎng)的平面是連續(xù)的而抑菌圈呈均勻的環(huán)狀。測(cè)量抑菌圈直徑，參照CLSI標(biāo)準(zhǔn)判斷結(jié)果。分為三級(jí)：.敏感（表示測(cè)試菌可被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后所達(dá)到的血藥濃度所抑制或殺滅），.中介（指測(cè)試菌對(duì)常規(guī)劑量用藥后體液或組織中的藥物濃度的反應(yīng)性低于敏感株，但在測(cè)定藥物濃集部位的體液或高于正常給藥量臨床上使用有效。），耐藥（指測(cè)試菌不能被在體內(nèi)感染部位能達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制）。 （K-B法試驗(yàn)的）實(shí)驗(yàn)影響因素

15、（簡(jiǎn)答題） A.培養(yǎng)基質(zhì)量。培養(yǎng)基的成分、pH、深度、硬度和濕度等對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確由直接影響。 B.藥敏紙片。藥敏紙片的含藥量是影響抑菌圈大小的重要因素，其次還有藥敏紙片的保存方式，低溫干燥。C.接種菌量。接種菌量正確與否是影響結(jié)果的重要因素之一，加大菌量使抑菌圈減小，相反可使抑菌圈擴(kuò)大。要正確配制，使用和保存麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)管，D.試驗(yàn)操作質(zhì)量，接種后貼藥片的時(shí)間，孵育條件和溫度、時(shí)間，抑菌圈測(cè)量工具的精確度和質(zhì)控菌株本身的藥敏特性是否合格，有無(wú)變異等都是影響紙片法藥敏結(jié)果的因素。質(zhì)量控制。采用標(biāo)準(zhǔn)菌株是進(jìn)行藥敏試驗(yàn)質(zhì)量控制的主要措施。常用的臨床藥敏質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株有：金黃色葡萄球菌ATCC25923，

16、大腸桿菌ATCC25922，銅綠假單胞菌ATCC27853、糞腸球菌ATCC29212 或 33186等。標(biāo)準(zhǔn)菌株的抑菌圈應(yīng)在CLSI允許的預(yù)期范圍內(nèi)，超出控制范圍應(yīng)檢查原因并及時(shí)糾正。每次藥敏試驗(yàn)應(yīng)將標(biāo)準(zhǔn)菌株和待測(cè)菌在同一條件下做藥敏試驗(yàn)。稀釋法：是定量測(cè)定抗菌藥物抑制細(xì)菌生長(zhǎng)作用的體外方法，分為瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法（又分為常量肉湯稀釋法和微量肉湯稀釋法）。 最低抑菌濃度（MIC）：稀釋法所測(cè)得的某抗菌藥物能抑制待測(cè)菌肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低藥物濃度。 最低殺菌濃度（MBC）：指能殺滅99.9以上測(cè)試菌量的最低藥物濃度。 MBC測(cè)試的方法有培養(yǎng)基、藥物稀釋、細(xì)菌懸液接種等，與MIC相同，不同之處

17、：當(dāng)MIC無(wú)肉眼可見(jiàn)菌生長(zhǎng)管中的菌落數(shù)最初接種菌落數(shù)的0.1，該管的最低藥物濃度即為MBC。 體外聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn)的意義：治療混合性感染； 預(yù)防或延遲細(xì)菌抗生素耐藥性的發(fā)生； 聯(lián)合用藥可減少劑量以避免達(dá)到毒性劑量； 聯(lián)合用藥比單一用藥時(shí)常常效果更好?？咕幬锫?lián)合用藥可出現(xiàn)4種結(jié)果： 拮抗作用：兩種藥物聯(lián)合作用顯著低于單獨(dú)抗菌活性；即A+BA或B 無(wú)關(guān)作用：兩種藥物聯(lián)合作用的活性等于其單獨(dú)活性；即A+BA或B 累加作用：兩種藥物聯(lián)合作用的活性等于兩種單獨(dú)抗菌活性之和；即A+BAB 協(xié)同作用：兩種藥物聯(lián)合作用顯著大于其單獨(dú)作用的總和。即A+BAB聯(lián)合抑菌試驗(yàn) 棋盤(pán)稀釋法是目前臨床實(shí)驗(yàn)室常用的聯(lián)合抑

18、菌定量方法 部分抑菌濃度（FIC）指數(shù)的判斷標(biāo)準(zhǔn)：FIC指數(shù)0.5為協(xié)同作用；FIC指數(shù)在0.51為相加作用；FIC指數(shù)在12為無(wú)關(guān)作用；FIC 指數(shù)2為拮抗作用。第九章1.干粉培養(yǎng)基的質(zhì)控程序： 原料的挑選（挑選各成分較穩(wěn)定的試劑，各種化學(xué)試劑一般選用分析純）； 配制過(guò)程（嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)操作程序手冊(cè)要求進(jìn)行）；培養(yǎng)基的一般質(zhì)量控制（包括：外觀、無(wú)菌試驗(yàn)、培養(yǎng)基的量、培養(yǎng)基的pH、性能試驗(yàn)）。 培養(yǎng)基的一般質(zhì)量控制：（簡(jiǎn)答題） A外觀：液體培養(yǎng)基應(yīng)澄清、無(wú)混濁，固體培養(yǎng)基應(yīng)無(wú)菌落生長(zhǎng)，不干裂。 B.無(wú)菌試驗(yàn)：培養(yǎng)基制作完成后，應(yīng)檢測(cè)每批培養(yǎng)基的滅菌效果。無(wú)菌生長(zhǎng)為合格。 C.培養(yǎng)基的量：斜面培養(yǎng)

19、基的長(zhǎng)度為試管長(zhǎng)度的2/3，MH平板的厚度應(yīng)為4mm，其他平板厚度一般為3mm。 D.培養(yǎng)基pH：配制好的培養(yǎng)基pH應(yīng)與規(guī)定的pH相差±0.2以內(nèi)。 E.性能試驗(yàn)：每一批新配制的、新購(gòu)入的培養(yǎng)基，均應(yīng)用已知性質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行預(yù)測(cè)。合格者方可使用。 2.滅菌器用溫度記錄裝置，或者用生物指示劑嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC7953和ATCC12980的培養(yǎng)液或菌片（含菌量為5×106 CFU片），化學(xué)指示劑等監(jiān)視滅菌效果。環(huán)氧乙烷消毒器使用枯草芽孢桿菌ATCC9372為生物指示劑。3.生物安全水平及適用范圍 實(shí)驗(yàn)室的生物安全水平（BLS）是根據(jù)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的危險(xiǎn)度評(píng)估，而采取的不

20、同程度的生物安全防護(hù)措施，以保證實(shí)驗(yàn)室工作人員的安全和環(huán)境免受污染。 目前BLS分為4級(jí)：一級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL1）是微生物的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)用的都是最低等級(jí)的污染物或安全的微生物，完全符合標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室操作，如枯草芽孢桿菌；二級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL2）適用于對(duì)人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物，屬于第三類病原微生物的如：沙門(mén)菌屬、乙型肝炎病毒等的實(shí)驗(yàn)操作。 三級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL3）的操作對(duì)象一般是可以經(jīng)呼吸道傳播的危險(xiǎn)微生物，如：結(jié)核分枝桿菌，伯氏柯克斯菌。 四級(jí)生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室（BSL4）進(jìn)行試驗(yàn)研究的物質(zhì)是一些非常高危險(xiǎn)性并且可以致命的有毒物質(zhì)，可以通過(guò)空氣傳播并

21、且現(xiàn)今并沒(méi)有有效的疫苗或者治療方法來(lái)處理。如（出血熱病毒）第十章1.醫(yī)院感染（NI）：又稱醫(yī)院獲得性感染，指在醫(yī)院內(nèi)獲得病原體并發(fā)生的一切感染，即只要感染因子來(lái)源于醫(yī)院，就可以算作醫(yī)院感染。入院48h后發(fā)生的感染通常認(rèn)為是醫(yī)院感染。 醫(yī)院感染包括：在住院期間獲得感染并且發(fā)病； 在住院期間獲得感染而在出院后才發(fā)病的感染。 探視者和醫(yī)療結(jié)構(gòu)的工作人員在醫(yī)院內(nèi)獲得的感染。 入院48h后發(fā)生的感染通常認(rèn)為是醫(yī)院感染。 醫(yī)院感染不包括： 入院前已存在的感染； 住院前獲得的感染，入院時(shí)已處于潛伏期的感染，住院后才發(fā)??；2.醫(yī)院感染病原體特點(diǎn)： （簡(jiǎn)答題） 大多數(shù)為條件致病微生物； 多數(shù)病原菌對(duì)抗菌藥物具有

22、耐藥性或多重耐藥； 免疫功能低下患者可以感染多種病原體； 以細(xì)菌及病毒最多見(jiàn)，真菌感染明顯增多，新病原體不斷出現(xiàn)；第十一章1.進(jìn)行血液細(xì)菌培養(yǎng)（血培養(yǎng)）的指征： 當(dāng)患者發(fā)熱（38）或低體溫（36）時(shí)； 外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)超過(guò)10×109L（特別是存在核左移時(shí)），或絕對(duì)粒細(xì)胞減少（成熟中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)少于1×109L）；合并有明顯感染癥狀體征、伴有感染病灶存在時(shí)。懷疑有膿毒血癥的患者應(yīng)盡早進(jìn)行血液細(xì)菌培養(yǎng)。2.血液標(biāo)本的采集要求： 采血時(shí)機(jī)。理想的血液細(xì)菌培養(yǎng)應(yīng)該是在患者接受抗生素治療之前進(jìn)行，故采集血培養(yǎng)應(yīng)盡可能在患者寒戰(zhàn)或發(fā)熱前； 采血部位。應(yīng)行經(jīng)皮外周靜脈穿刺采血（一般采集

23、肘靜脈血），穿刺部位的皮膚消毒，嚴(yán)格無(wú)菌操作； 采血份數(shù)。對(duì)每名患者應(yīng)至少?gòu)牟煌课徊杉囵B(yǎng)23份，這樣可以提高檢測(cè)的陽(yáng)性率。對(duì)懷疑亞急性感染性心內(nèi)膜炎的患者，應(yīng)間隔1h，連續(xù)采集3份血進(jìn)行培養(yǎng)。同時(shí)使用需氧和厭氧培養(yǎng)瓶，分別注入； 采血量。通常采血量應(yīng)是培養(yǎng)基的15或110.，適當(dāng)?shù)牟裳磕芴岣哧?yáng)性率； 血培養(yǎng)瓶的使用。根據(jù)不同的血培養(yǎng)方法，采集到的血液標(biāo)本應(yīng)立即注入血培養(yǎng)瓶或含有SPS的無(wú)菌容器中，并盡快進(jìn)行培養(yǎng)，其中SPS對(duì)某些細(xì)菌（如腦膜炎奈瑟菌）有抑制作用，不能用于此類細(xì)菌的培養(yǎng)。進(jìn)行血培養(yǎng)時(shí)已接受抗生素治療的患者，應(yīng)使用樹(shù)脂等能中和或吸附多種抗菌藥物和其他能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)

24、瓶，有助于提高檢出率。無(wú)論是否已注入血液標(biāo)本，血液培養(yǎng)瓶均不能冷藏或冷凍保存。血液標(biāo)本不能直接涂片觀察，因?yàn)榧?xì)菌數(shù)量太少，要先做細(xì)菌增加培養(yǎng)。（補(bǔ)充）第十二章中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的細(xì)菌、真菌學(xué)檢查1.標(biāo)本采集。采用腰椎穿刺術(shù)無(wú)菌采集腦脊液標(biāo)本。做腦脊液培養(yǎng)時(shí)應(yīng)同時(shí)采集患者血液標(biāo)本進(jìn)行血培養(yǎng)。標(biāo)本采集后應(yīng)在常溫下立即送檢，培養(yǎng)腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌等苛養(yǎng)菌時(shí)，應(yīng)將標(biāo)本置于35保溫送檢。用于常規(guī)細(xì)菌檢測(cè)的腦脊液量應(yīng)為1ml或大于1ml；用于檢測(cè)抗酸菌的腦脊液量應(yīng)為5ml或大于5ml。第十三章皮膚和軟組織感染的細(xì)菌學(xué)檢查1.膿性分泌物是皮膚和軟組織感染感染最常見(jiàn)的標(biāo)本。采集標(biāo)本時(shí)，應(yīng)避免皮膚表面細(xì)菌

25、污染。2.封閉性膿腫。局部消毒后，用注射器抽取膿液和膿腫壁標(biāo)本置于厭氧運(yùn)送培養(yǎng)基內(nèi)送檢。按厭氧要求送檢。3.放線菌感染標(biāo)本?；颊吒腥咎幜鞒龅哪撘褐杏小傲蚧菢宇w?！保芴崾居蟹啪€菌感染。第十四章1.病毒是急性上呼吸道感染最常見(jiàn)的病原體，細(xì)菌是下呼吸道感染最常見(jiàn)病原體，下呼吸道感染少見(jiàn)，但更易引起嚴(yán)重疾病及死亡。大部分上呼吸道感染是由病毒引起且是自限性的。2.痰液標(biāo)本的檢查方法（痰標(biāo)本是下呼吸道細(xì)菌學(xué)檢查的主要標(biāo)本） 一般細(xì)菌、真菌涂片檢查目的有： 確定標(biāo)本是否適合做細(xì)菌培養(yǎng)，采用標(biāo)本直接涂片鏡檢，依據(jù)低倍鏡下（×100）白細(xì)胞和上皮細(xì)胞數(shù)目的多少來(lái)判定（在每個(gè)低倍視野中鱗狀上皮細(xì)胞10

26、個(gè)，或白細(xì)胞25個(gè)，同時(shí)幾乎見(jiàn)不到鱗狀上皮細(xì)胞為符合要求的痰標(biāo)本，否則視為不合格痰標(biāo)本）。 白細(xì)胞（個(gè)低倍鏡視野×100） 鱗狀上皮細(xì)胞 （個(gè)/低倍鏡視野×100） 判斷是否合格 25 10合格（可用于細(xì)菌培養(yǎng)） 25 1025尚合格（可用于細(xì)菌培養(yǎng)） 10 25 不合格（重新留標(biāo)本） 初步判定是否有病原菌存在，選痰液中膿、血性部分涂片，干燥固定后，進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。第十五章1.電鏡檢查可用于病毒性腸道感染的檢測(cè)。2.與抗生素相關(guān)性腹瀉（ADD）有關(guān)的病原菌主要有：艱難梭菌、金黃色葡萄球菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌。3.金黃色葡萄球菌感染后呈現(xiàn)的是黃綠色水樣糞便。第十七章 泌尿系統(tǒng)感

27、染1.膀胱穿刺法是目前判斷膀胱內(nèi)有無(wú)細(xì)菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，也是尿液厭氧菌培養(yǎng)的最佳采集方法。常采用恥骨上膀胱穿刺抽取尿液法，該方法患者較痛苦,較少用，常在懷疑厭氧菌感染時(shí)、兒童或嬰兒采集中段尿困難者、中段尿培養(yǎng)結(jié)果與病情不符時(shí)采用。2清潔中段尿采集法 簡(jiǎn)單、易行，是最常用的尿培養(yǎng)標(biāo)本收集方法。3.尿液檢測(cè)細(xì)菌計(jì)數(shù)的影響因素：（簡(jiǎn)答題） 患者應(yīng)用抗菌藥物，可能抑制尿液中細(xì)菌生長(zhǎng)； 大量輸液或應(yīng)用利尿劑，尿量較大，尿液稀釋，尿中營(yíng)養(yǎng)成分降低，細(xì)菌繁殖速度減慢，其次還會(huì)導(dǎo)致尿液中的細(xì)菌被稀釋； 尿液的pH： pH 5.0或 8.5 ，均可能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)； 尿頻：細(xì)菌在尿液中的停留時(shí)間縮短，數(shù)量減少； 營(yíng)

28、養(yǎng)要求高的細(xì)菌生長(zhǎng)相對(duì)緩慢； 采集尿液時(shí)，外陰部的消毒劑混入尿中，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。4.尿液檢測(cè)結(jié)果解釋及報(bào)告尿液中一般細(xì)菌及假絲酵母菌培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)（檢測(cè)結(jié)果）G-b結(jié)果解釋及報(bào)告105 CFUml提示可能為泌尿系統(tǒng)感染104105 CFUml需要結(jié)合患者的臨床癥狀分析是否為泌尿系統(tǒng)感染104 CFUml可能為采集時(shí)污染一般一份尿液中多為檢出一種病原菌，少數(shù)可能會(huì)在同份尿標(biāo)本中分離到2種病原菌。第十八章1.淋病奈瑟菌、衣原體、生殖道支原體、杜克嗜血桿菌的分離培養(yǎng)是淋病、生殖道沙眼衣原體感染、生殖道支原體感染、軟下疳的實(shí)驗(yàn)室診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，陽(yáng)性者可確診。2.分離培養(yǎng)與鑒定是所有目前能夠培養(yǎng)的生殖道

29、感染病原體實(shí)驗(yàn)室診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。第二十二章1.葡萄球菌屬多數(shù)菌株具有嗜鹽性，耐鹽性強(qiáng)。2.鏈球菌屬 A群鏈球菌也稱化膿性鏈球菌，致病力強(qiáng)，引起急性呼吸道感染、丹毒、軟組織感染、猩紅熱等，還可導(dǎo)致急性腎小球炎、風(fēng)濕熱等變態(tài)反應(yīng)性疾病。 B群鏈球菌又稱無(wú)乳鏈球菌，主要引起新生兒敗血癥和腦膜炎。 肺炎鏈球菌又稱肺炎球菌，主要引起大葉性肺炎、支氣管炎、中耳炎、菌血癥等。 草綠色鏈球菌又稱甲型溶血性鏈球菌，是人體口腔、消化道、女性生殖道的正常菌群，常不致病，偶可引起亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎。最常見(jiàn)病原菌。3.腸球菌屬 腸球菌的主要特征：革蘭陽(yáng)性球菌、菌落灰白色，觸酶陰性。 鑒定方法：PYR試驗(yàn)（快速篩選鑒

30、定試驗(yàn)）； 膽汁七葉苷試驗(yàn)（本試驗(yàn)不能區(qū)別腸球菌與非腸球菌，需做耐鹽受試驗(yàn)進(jìn)一步鑒定。只能用于非D群腸鏈球菌鑒定）； 耐鹽受試驗(yàn)（本試驗(yàn)結(jié)合膽汁七葉苷試驗(yàn)可對(duì)腸球菌作出鑒定）。腦膜炎奈瑟菌引起化膿性腦脊髓膜炎第二十三章腸桿菌科1.腸桿菌科細(xì)菌的共同特征：（形態(tài)染色相似，培養(yǎng)特性相同，生化反應(yīng)活躍，抗原構(gòu)造復(fù)雜，抵抗力弱） 革蘭陰性桿菌，無(wú)芽孢，有菌毛，多數(shù)有周身鞭毛； 需氧或兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基、MAC上生長(zhǎng)良好，血平板生長(zhǎng)為灰白、濕潤(rùn)、光滑的菌落； 在腸道選擇培養(yǎng)基（MAC、EMB、SS等）上，因乳糖分解或不分解，生長(zhǎng)為不同特征的菌落； 生化反應(yīng)活躍，發(fā)酵葡萄糖，氧化酶陰性（

31、鄰單胞菌屬除外），觸酶陽(yáng)性（痢疾志賀菌除外），硝酸鹽還原陽(yáng)性。2.大腸埃希菌的主要特征：革蘭陰性菌，在腸道選擇培養(yǎng)基上形成發(fā)酵乳糖的菌落。氧化酶陰性，硝酸鹽還原陽(yáng)性，葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）斜面與底層均產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，H2S陰性，尿酶陰性，動(dòng)力陽(yáng)性，IMViC + + 3.沙門(mén)菌屬 肥達(dá)反應(yīng)用于輔助診斷傷寒和副傷寒。4.志賀菌屬 志賀菌產(chǎn)生的強(qiáng)烈內(nèi)毒素作用于腸黏膜，使其通透性增高，促進(jìn)腸黏膜對(duì)內(nèi)毒素的吸收，導(dǎo)致一系列中毒癥狀，引起細(xì)菌性痢疾，典型細(xì)菌性痢疾的臨床表現(xiàn)為：腹痛、發(fā)熱、水樣便，后轉(zhuǎn)為膿血黏液便，伴有里急后重。 志賀菌典型生化反應(yīng)為：不發(fā)酵乳糖，發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不

32、產(chǎn)生H2S，即KIA。不產(chǎn)生尿酶，動(dòng)力陰性，IMViC為 5.變形桿菌屬（革蘭陰性桿菌，無(wú)芽孢，無(wú)莢膜，兼性厭氧） 鑒定：根據(jù)典型的遷徙現(xiàn)象，迅速分解尿素，苯丙氨酸脫氨酶陽(yáng)性，KIA為KA，IMViC為 ，可鑒定為變形桿菌，變形桿菌尿酶試驗(yàn)陽(yáng)性（紅色）。6.小腸結(jié)腸炎耶爾森菌為兼性厭氧，440均能生長(zhǎng)，最適溫度為2028，4冷增菌。第二十四章假單胞菌屬3.人類非發(fā)酵菌感染中，假單胞菌占70%80%，主要為銅綠假單胞菌。4.假單胞菌屬的主要特征： 革蘭陰性，動(dòng)力陽(yáng)性； 專性需氧，營(yíng)養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基、麥康凱培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，某些菌株具有明顯的菌落形態(tài)或色素； 氧化酶陽(yáng)性，葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)（

33、OF試驗(yàn)）通常為氧化型； 可將硝酸鹽轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽或氮?dú)猓?淺黃假單胞菌和稻皮假單胞菌氧化酶陰性，常不能在麥康凱培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。銅綠假單胞菌2.銅綠假單胞菌的鑒定：根據(jù)培養(yǎng)物的菌落特征、產(chǎn)生水溶性藍(lán)綠色、紅色或褐色色素、特殊的氣味（生姜味）、氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性、氧化發(fā)酵試驗(yàn)為氧化分解葡萄糖等可作出初步鑒定。3.銅綠假單胞菌的主要生化反應(yīng)：氧化酶試驗(yàn)氧化葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)氧化乳糖試驗(yàn)精氨酸雙水解試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)42生長(zhǎng)試驗(yàn)還原硝酸鹽為亞硝酸鹽并產(chǎn)生N2.2.不動(dòng)桿菌屬 不動(dòng)桿菌的鑒定：用商品化的鑒定系統(tǒng)鑒定不動(dòng)桿菌。KIA底層及斜面均不變色、無(wú)動(dòng)力；氧化酶陰性，硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性，可初步確定為

34、不動(dòng)桿菌屬的細(xì)菌。氧化酶陰性，硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性，無(wú)動(dòng)力的革蘭陰性桿菌極為罕見(jiàn)。3.窄食單胞菌屬 嗜麥芽窄食單胞菌的主要生化反應(yīng)特征有：氧化酶陰性，吲哚試驗(yàn)陰性，精氨酸雙水解試驗(yàn)陰性。O/F試驗(yàn)為氧化性，動(dòng)力陽(yáng)性，硝酸鹽還原試驗(yàn)陽(yáng)性 試驗(yàn)表現(xiàn)出氧化酶陰性的特征可用來(lái)推測(cè)性的鑒定嗜麥芽窄食單胞菌。第二十五章弧菌屬1.霍亂弧菌（米泔水樣便，魚(yú)群樣排列，穿梭樣運(yùn)動(dòng)）為兼性厭氧菌，最適宜生長(zhǎng)溫度37，具有耐堿性，初次分離常選用pH8.5的堿性蛋白胨水進(jìn)行選擇性增菌。在TCBS（硫代硫酸鹽枸櫞酸鹽膽汁蔗糖）選擇培養(yǎng)基上，發(fā)酵蔗糖產(chǎn)酸，菌落呈黃色。常用含亞碲酸鉀的選擇培養(yǎng)基，其可將碲離子還原成元素碲，形成

35、灰褐色菌落中心。2.霍亂弧菌01群的菌株古典生物型和El Tor生物型的不同生物學(xué)特征見(jiàn)下表特征古典生物型El Tor生物型羊紅細(xì)胞溶血D雞紅細(xì)胞凝集VP試驗(yàn)多黏菌素B敏感試驗(yàn)組噬菌體裂解組噬菌體裂解3.副溶血弧菌（血水樣便）為兼性厭氧菌，具有嗜鹽性，在TCBS平板上形成綠色或藍(lán)綠色菌落。 神奈川現(xiàn)象：從腹瀉患者標(biāo)本中分離到的95%以上的菌株在含人O型紅細(xì)胞或兔紅細(xì)胞的我萋培養(yǎng)基上可產(chǎn)生溶血現(xiàn)象，稱為神奈川現(xiàn)象。神奈川現(xiàn)象是鑒定副溶血弧菌致病菌株的一項(xiàng)重要指標(biāo)。第二十六章1.彎曲菌屬 空腸彎曲菌最適的生長(zhǎng)溫度為4243； 胎兒彎曲菌在42不生在，25生長(zhǎng)。菌種馬尿酸鹽水解試驗(yàn)空腸彎曲菌空腸亞種

36、空腸彎曲菌多氏亞種V（表示可變）大腸彎曲菌胎兒彎曲菌胎兒亞種胎兒彎曲菌性病亞種2螺桿菌屬 幽門(mén)螺桿菌的致病因素包括毒力因子、感染后引發(fā)機(jī)體的免疫反應(yīng)、宿主胃環(huán)境等因素。 幽門(mén)螺桿菌是胃炎、消化性潰瘍的主要致病因素，與胃癌的發(fā)生密切相關(guān)，人類是幽門(mén)螺桿菌感染的主要傳染源。第二十七章 苛養(yǎng)菌（指對(duì)營(yíng)養(yǎng)及生長(zhǎng)環(huán)境要求較為苛刻，普通條件下不生長(zhǎng)或難以生長(zhǎng)的一類細(xì)菌）嗜血桿菌屬（最常見(jiàn)的為流感嗜血桿菌）1.嗜血桿菌屬的氧化還原酶系統(tǒng)不完善，需要特殊的營(yíng)養(yǎng)X或（和）V因子才能生長(zhǎng)。X因子為血紅蛋白衍生物，V因子為輔酶或輔酶。培養(yǎng)嗜血桿菌的培養(yǎng)基呈巧克力色稱為巧克力培養(yǎng)基。嗜血桿菌對(duì)X、V因子需求不盡相同，

37、可作為細(xì)菌種間鑒定特性之一。2.衛(wèi)星現(xiàn)象：將流感嗜血桿菌與金黃色葡萄球菌共同培養(yǎng)時(shí)，因金黃色葡萄球菌能合成較多的V因子，靠近金黃色葡萄球菌周圍的流感嗜血桿菌菌落較大，距離越遠(yuǎn)的菌落越小，這種現(xiàn)象稱為衛(wèi)星現(xiàn)象。2.流感嗜血桿菌中的莢膜b型株致病性最強(qiáng)。3鮑特菌屬（包括百日咳鮑特菌、副百日咳鮑特菌、支氣管敗血癥鮑特菌臨床最常見(jiàn)，均為專性需氧菌，該菌屬代表菌種是百日咳鮑特菌，簡(jiǎn)稱百日咳桿菌）3.百日咳鮑特菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求最為復(fù)雜，血培養(yǎng)基和巧克力培養(yǎng)基上均不能生長(zhǎng)，常用培養(yǎng)基為鮑金培養(yǎng)基（BG）和CHB培養(yǎng)基。2.百日咳鮑特菌生長(zhǎng)緩慢（23天），在BG及CHB（木炭、去纖維馬血的木炭馬血瓊脂）平板上形成

38、的菌落相似，形成光滑、灰白色不透明的珍珠狀小菌落，有狹窄的溶血環(huán)。軍團(tuán)菌屬（歸屬軍團(tuán)菌科，代表菌是嗜肺軍團(tuán)菌）1.軍團(tuán)菌營(yíng)養(yǎng)要求苛刻，常用的培養(yǎng)基是BCYEa培養(yǎng)基，其主要成分為活性炭酵母浸出液，加上鐵、L半胱氨酸和酮戊二酸。4.嗜肺軍團(tuán)菌在空調(diào)冷凝水中的檢出率最高。二十八章 需氧革蘭陽(yáng)性桿菌芽孢桿菌屬（一般不致病，炭疽芽孢桿菌和蠟樣芽孢桿菌有致病性）1.炭疽芽孢桿菌（簡(jiǎn)稱炭疽桿菌）是芽孢桿菌屬中致病力最強(qiáng)的一種，普通平板上形成灰白色、扁平、干燥、粗糙型菌落，邊緣不整齊呈現(xiàn)卷發(fā)狀。2.串珠試驗(yàn) 將待檢菌接種于含0.050.5U/ml青霉素的培養(yǎng)基中35培養(yǎng)6h后，炭疽桿菌形態(tài)發(fā)生變化，菌體成為

39、大而均勻的圓球狀成串排列，為炭疽芽孢桿菌特有的現(xiàn)象。觸酶陽(yáng)性3.蠟樣芽孢桿菌易經(jīng)口感染，引起食物中毒，并導(dǎo)致敗血癥，是最常見(jiàn)的芽孢桿菌。其主要的致病物質(zhì)是腸毒素，引起的食物中毒有兩種類型：嘔吐型（由耐熱腸毒素引起）；腹瀉型（由不耐熱腸毒素引起）。棒狀桿菌屬（主要是白喉棒狀桿菌引起致?。?.白喉棒狀桿菌（簡(jiǎn)稱白喉?xiàng)U菌）的生物學(xué)特性：（革蘭陽(yáng)性 用亞甲藍(lán)、Albert法、Neisser法等染色可顯示菌體內(nèi)有濃染的異染顆粒，排列成念珠狀或位于菌體兩端，也稱極體，為本菌的形態(tài)鑒別特征。 在呂氏血清斜面上生長(zhǎng)較快，形成灰白色、有光澤的菌苔，鏡下形態(tài)典型，異染顆粒明顯。 亞碲酸鉀能抑制雜菌生長(zhǎng)，故亞碲酸鉀

40、血平板通常用于白喉棒狀桿菌的初次分離培養(yǎng)，亞碲酸鹽離子能透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入白喉棒狀桿菌細(xì)胞質(zhì)中，還原為金屬碲而沉淀，使菌落呈黑色。 白喉棒狀桿菌根據(jù)在亞碲酸鉀血平板上生長(zhǎng)的菌落特點(diǎn)分為三型：重型、輕型、中間型。該型別分類與疾病輕重?zé)o明顯關(guān)系，也無(wú)特殊意義。（可能判斷改錯(cuò)） 需氧或兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)要求高，在含有血液、血清、雞蛋的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。2.白喉棒狀桿菌的微生物學(xué)檢驗(yàn) 標(biāo)本采集。從疑似假膜的邊緣采集分泌物。 直接顯微鏡檢查：將標(biāo)本直接涂片，分別做革蘭染色和異染顆粒染色，鏡檢革蘭陽(yáng)性棒狀桿菌，形態(tài)典型且有明顯異染顆粒，可作初步報(bào)告，為臨床早期診斷提供依據(jù)。 分離培養(yǎng)：可用亞碲酸鉀血平板、血平板，純培

41、養(yǎng)基用呂氏血清斜面。 鑒定：白喉棒狀桿菌觸酶陽(yáng)性，吲哚和脲酶試驗(yàn)陰性。 白喉棒狀桿菌包括無(wú)毒株和有毒株，需要通過(guò)毒力試驗(yàn)鑒定白喉棒狀桿菌的致病菌株，應(yīng)用白喉抗毒素檢測(cè)白喉?xiàng)U菌毒素，確定產(chǎn)毒株，方法有ELISA法和ELek平板毒力試驗(yàn)。3.白喉棒狀桿菌導(dǎo)致的白喉為急性呼吸道傳染病，以兒童多見(jiàn)，有假膜，菌體不入血，菌體產(chǎn)生的外毒素不（白喉毒素）入血。第三十章 分枝桿菌屬1.分枝桿菌（又稱抗酸桿菌），具有抗酸染色為陽(yáng)性。2.結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（以結(jié)核分枝桿菌感染最常見(jiàn)），營(yíng)養(yǎng)要求高，常用羅-琴（L-J）培養(yǎng)基，變異性易變?yōu)長(zhǎng)型3.結(jié)核分枝桿菌微生物學(xué)檢驗(yàn)： 直接顯微鏡檢查。標(biāo)本直接涂片，作抗酸染色或

42、金胺O熒光染色。 分離培養(yǎng)是最可靠的。痰液及其他含有雜菌的標(biāo)本，在培養(yǎng)前應(yīng)以適當(dāng)方法加以處理，以達(dá)到殺死或減少雜菌和和液化痰標(biāo)本的目的。4.結(jié)核分枝桿菌免疫學(xué)檢測(cè)： 結(jié)核菌素試驗(yàn)：是應(yīng)用結(jié)核菌素進(jìn)行皮膚試驗(yàn)來(lái)測(cè)定機(jī)體對(duì)結(jié)核分枝桿菌是否產(chǎn)生遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)的一種試驗(yàn)。 結(jié)核菌素是結(jié)核分枝桿菌的菌體成分，目前都是用PPD（純蛋白衍生物）。4，結(jié)核分枝桿菌抵抗力強(qiáng)（三耐三敏），耐干燥，耐酸堿，耐某些染料，對(duì)溫?zé)崦舾校瑢?duì)7075的乙醇敏感，對(duì)紫外線及日光敏感 結(jié)核菌素試驗(yàn)時(shí)，感染、免疫、變態(tài)反應(yīng)共存，前臂皮內(nèi)注射，4872h結(jié)核菌素試驗(yàn)的主要用途：（簡(jiǎn)單題） A.選擇BCG（卡介苗）接種對(duì)象及測(cè)定接種效

43、果； B.作為嬰幼兒結(jié)核病診斷的參考； C.在未接種BCG的人群中做結(jié)核分枝桿菌感染的流行病學(xué)調(diào)查； D.測(cè)定腫瘤患者的細(xì)胞免疫功能。1.麻風(fēng)分枝桿菌的人工培養(yǎng)迄今為止尚未成功，目前不能人工分離培養(yǎng)，只能做顯微鏡檢查。第三十一章 厭氧菌（芽孢厭氧菌和無(wú)芽孢厭氧菌）1.在臨床厭氧菌感染中，絕大數(shù)是由無(wú)芽孢厭氧菌（以脆弱類桿菌（BF）最常見(jiàn)）引起的內(nèi)源性感染（約占90%），且多為與需氧菌或兼性厭氧菌共同引起的混合感染，僅少數(shù)為單純厭氧菌感染。2.厭氧菌感染的臨床指征： 感染局部有氣體產(chǎn)生，這是厭氧菌感染的重要特征之一； 發(fā)生在黏膜附近的感染； 深部外傷； 有特殊的分泌物； 某些抗生素治療無(wú)效的感染

44、 細(xì)菌學(xué)特征。 3.厭氧菌感染的細(xì)菌學(xué)指征： 分泌物直接涂片革蘭染色，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌染色不均、形態(tài)奇特呈明顯多形態(tài)； 鏡檢查見(jiàn)細(xì)菌，而需氧培養(yǎng)陰性； 在液體及半固體培養(yǎng)基深部有細(xì)菌生長(zhǎng)。4.厭氧菌感染的標(biāo)本采集 厭氧菌標(biāo)本采集時(shí)須注意：標(biāo)本不應(yīng)被正常菌群污染，盡量避免接觸空氣。是厭氧菌培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。 應(yīng)從無(wú)正常菌群寄居的部位用無(wú)菌操作方法采集標(biāo)本。凡含有正常菌群的標(biāo)本，如齒齦拭子、鼻咽拭子、咯痰、自然排出的尿液、接近皮膚或黏膜的分泌物、陰道分泌物、糞便以及洗胃液等，均不宜作厭氧菌培養(yǎng)。（多選） 用于厭氧菌培養(yǎng)的最佳標(biāo)本是活檢組織或用針抽吸的分泌物和膿液。5.厭氧菌標(biāo)本的運(yùn)送方法： 針筒運(yùn)送法；無(wú)氧

45、小瓶運(yùn)送法（目前常用的方法）；標(biāo)本充盈運(yùn)送法；組織塊運(yùn)送法；厭氧袋運(yùn)送法；棉拭運(yùn)送法。梭狀芽孢桿菌屬（是芽孢厭氧菌唯一的菌屬）破傷風(fēng)梭菌1.破傷風(fēng)梭菌是臨床常見(jiàn)的革蘭陽(yáng)性厭氧芽孢桿菌，為破傷風(fēng)的病原菌。2.破傷風(fēng)梭菌在芽孢形成后易轉(zhuǎn)變成革蘭陰性。3.破傷風(fēng)梭菌呈鼓槌狀，為本菌典型特征。4.破傷風(fēng)梭菌專性厭氧，在普通平板上不易生長(zhǎng)，在潮濕的血平板上常呈擴(kuò)散生長(zhǎng)，形成爬行生長(zhǎng)物，不易獲得單個(gè)表面菌落。經(jīng)培養(yǎng)后形成扁平、灰白色、邊緣不齊、周邊疏松呈羽毛狀的菌落，有狹窄的溶血。(外毒素-痙攣毒素)產(chǎn)氣莢膜梭菌1.產(chǎn)氣莢膜梭菌是臨床標(biāo)本中最常見(jiàn)的厭氧芽孢梭菌，為革蘭陽(yáng)性粗大桿菌，兩端鈍圓，無(wú)鞭毛，在機(jī)體

46、內(nèi)可形成明顯的莢膜。在組織和人工培養(yǎng)基中很少形成芽胞，為本菌的特點(diǎn)之一。2.產(chǎn)氣莢膜梭菌的菌落中多數(shù)菌株有雙層溶血環(huán)，內(nèi)環(huán)完全溶血，由毒素引起，外環(huán)不完全溶血，由毒素引起。3.Nagler反應(yīng)：在卵黃平板上，由產(chǎn)氣莢膜梭菌產(chǎn)生的卵磷脂酶（毒素）分解卵黃中的卵磷脂導(dǎo)致菌落周圍出現(xiàn)乳白色渾濁圈，能被特異抗血清所中和，稱為Nagler反應(yīng)。（陽(yáng)性，卵磷脂試驗(yàn)）4.“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象：產(chǎn)氣莢膜梭菌在牛乳培養(yǎng)基中，能分解乳糖產(chǎn)酸使酪蛋白凝固，同時(shí)產(chǎn)生大量氣體將凝固的酪蛋白沖散形成蜂窩狀，并將液面上的凡士林向上推擠，甚至沖開(kāi)棉塞，氣勢(shì)兇猛，稱為“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象，為產(chǎn)氣莢膜梭菌特征之一。肉毒梭菌在厭氧條件下可

47、產(chǎn)生毒性極強(qiáng)的外毒素肉毒毒素，為已知最劇烈的毒素1.艱難梭菌（因?qū)ρ鯓O為敏感，很難分離培養(yǎng)而得名）最常用平板是環(huán)絲氨酸頭孢甲氧霉素果糖卵黃瓊脂（CCFA）平板培養(yǎng)基，形成較大的表面粗糙、邊緣不齊的黃色菌落，在紫外線照射下，可見(jiàn)黃綠色熒光。2.艱難梭菌是抗生素相關(guān)性腹瀉和偽膜性腸炎最主要的病原菌之一。3.艱難梭菌的微生物學(xué)檢驗(yàn) 直接顯微鏡檢查。標(biāo)本直接涂片做革蘭染色鏡檢，若發(fā)現(xiàn)標(biāo)本中有大量呈優(yōu)勢(shì)生長(zhǎng)的革蘭陽(yáng)性粗長(zhǎng)桿菌，同時(shí)結(jié)合患者有長(zhǎng)期使用抗生素的病史，可初步報(bào)告。 分離培養(yǎng)。糞便標(biāo)本接種CCFA選擇培養(yǎng)基，挑選典型呈粗糙的黃色菌落，轉(zhuǎn)種庖肉培養(yǎng)基進(jìn)行純培養(yǎng)，供做鑒定試驗(yàn)和毒素測(cè)定。第三十二章 螺旋體和支原體螺旋體1.鉤端螺旋體是螺旋體中唯一可進(jìn)行人工培養(yǎng)的，常用柯氏培養(yǎng)基。不易被堿性染料著色，革蘭染色為陰性，常用Fontana鍍銀染色法鏡檢。鉤端螺旋體的微生物學(xué)檢驗(yàn)分離培養(yǎng)（korthof培養(yǎng)基）。鉤端螺旋體在培養(yǎng)液中呈云霧狀混濁，在半固體培養(yǎng)基上可形成扁平、透明、圓形的菌落。鑒定。傳代培養(yǎng)后用鉤端螺旋體的群和型特異性血清做菌群、菌型鑒定或毒理試驗(yàn)，氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性、觸酶試驗(yàn)陽(yáng)性、動(dòng)物試驗(yàn)陽(yáng)性。血清學(xué)診斷。目前最常用的是顯微鏡凝集試驗(yàn)，即用標(biāo)準(zhǔn)株或當(dāng)?shù)爻Ｒ?jiàn)菌株做抗原，分別于患者不同稀釋度的血清混合，37作用2h，然后滴片做暗