第二章 病毒培養(yǎng)

1、本動物本動物實驗動物實驗動物雞胚雞胚體外培養(yǎng)的組織細胞體外培養(yǎng)的組織細胞第一節(jié)第一節(jié) 實驗動物實驗動物 家兔、小白鼠、大白鼠、豚鼠、倉鼠家兔、小白鼠、大白鼠、豚鼠、倉鼠1、分離病毒，并借助感染范圍試驗鑒定病毒、分離病毒，并借助感染范圍試驗鑒定病毒2、測定各毒株之間的抗原關系、測定各毒株之間的抗原關系3、制備免疫血清和單克隆抗體、制備免疫血清和單克隆抗體4、作病毒感染的實驗研究，包括病毒毒力測、作病毒感染的實驗研究，包括病毒毒力測定，建立病毒病動物模型定，建立病毒病動物模型5、培養(yǎng)病毒，制造抗原和疫苗、培養(yǎng)病毒，制造抗原和疫苗雞胚的結構與接種途徑雞胚的結構與接種途徑傳代細胞：傳代細胞：由于遺傳突

2、變或者在理化學物質和由于遺傳突變或者在理化學物質和 40X 100XA 正常正常IBRS-2B 消化的消化的IBRS-2BAAA 正常正常PK-15 B 消化的消化的PK-15C 感染感染PRV的的PK-15CB接種接種PRV后不同時間的后不同時間的PK-15BA抗生素抗生素抗菌譜抗菌譜參考濃度參考濃度（g/ml）細菌細菌真菌真菌 支原體支原體青霉素青霉素-GG+100IU/ml鏈霉素鏈霉素G-100慶大霉素慶大霉素G+/G-+200四環(huán)素四環(huán)素G+/G-+10卡那霉素卡那霉素G+/G-+50兩性霉素兩性霉素B+2制霉菌素制霉菌素+25血細胞計數(shù)板血細胞計數(shù)板表示可計數(shù)表示可計數(shù) 表示不計數(shù)表

3、示不計數(shù) A、未受微生物污染、未受微生物污染 B、受細菌污染、受細菌污染C、受酵母污染、受酵母污染 D、受霉菌污染、受霉菌污染2、組織培養(yǎng)細胞中病毒增殖的判定、組織培養(yǎng)細胞中病毒增殖的判定1）細胞病變（）細胞病變（cytopathogenic effect,CPE） 腺病毒：細胞腫大、顆粒增多、病變細腺病毒：細胞腫大、顆粒增多、病變細胞呈葡萄串狀。胞呈葡萄串狀。 偽狂犬病毒：細胞圓縮、脫落、裂解，偽狂犬病毒：細胞圓縮、脫落、裂解，形成合胞體。形成合胞體。2）細胞代謝的測定）細胞代謝的測定 生活細胞在代謝過程中產生各種酸類，使營生活細胞在代謝過程中產生各種酸類，使營養(yǎng)液的養(yǎng)液的pH下降，而病毒感

4、染的細胞由于代謝障礙，下降，而病毒感染的細胞由于代謝障礙，產酸能力降低，且因細胞破壞，釋出堿性成分，產酸能力降低，且因細胞破壞，釋出堿性成分，營養(yǎng)液的營養(yǎng)液的pH下降不明顯甚至上升。下降不明顯甚至上升。 腺病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒腺病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒3）抗原的測定）抗原的測定4）中和試驗）中和試驗5）病毒間的干擾現(xiàn)象）病毒間的干擾現(xiàn)象 乙型腦炎病毒乙型腦炎病毒 脊髓灰質炎病毒脊髓灰質炎病毒 流感病毒流感病毒 西方馬腦炎病毒西方馬腦炎病毒 豬傳染性胃腸炎病毒豬傳染性胃腸炎病毒 牛病毒性腹瀉牛病毒性腹瀉-粘膜病病毒粘膜病病毒6）電子顯微鏡觀察）電子顯微鏡觀察7）實驗動物或雞胚接種）實

5、驗動物或雞胚接種七、病毒的保存七、病毒的保存1、短期保存病毒、短期保存病毒 可直接或懸浮于可直接或懸浮于50%甘油鹽水中，再甘油鹽水中，再置置-30冰箱中保存。冰箱中保存。2、長期保存病毒、長期保存病毒 1）快速低溫凍存）快速低溫凍存 于于病毒懸液病毒懸液內加入滅活的動物血清或其內加入滅活的動物血清或其他蛋白質保護劑，最好再加一些他蛋白質保護劑，最好再加一些DMSO（5%-10%），并迅速置），并迅速置-70或或-196。 含含病毒的組織材料病毒的組織材料：A、直接低溫冰凍、直接低溫冰凍保存。保存。B、先侵入、先侵入50%甘油生理鹽水中，再甘油生理鹽水中，再低溫保存低溫保存 2、冷凍干燥、冷凍干燥 在真空條件下使冰凍的病毒懸液脫水在真空條件下使冰凍的病毒懸液脫水 凍干毒種時，用脫脂牛乳、滅活的正常動物血凍干毒種時，用脫脂牛乳、滅活的正常動物血清、飽和蔗糖溶液、氫氧化鋁等保護劑將病毒液作清、飽和蔗糖溶液、氫氧化鋁等保護劑將病毒液作2-5倍的稀釋，分裝安瓿或青霉素瓶，每支倍的稀釋，分裝安瓿或青霉素瓶，每支0.22