玉米赤霉烯酮高靈敏度檢測試劑

1、玉米赤霉烯酮高靈敏度檢測試劑Zearalenon酶標免疫分析定量測定玉米赤霉烯酮試劑盒德國R-Biopharm制造（中文翻譯件僅供參考，以試劑盒內附的英文原件為準）。RIDASCREEN Zearalenon （產品編號：R1401）簡介競爭酶標免疫法定量測定谷物，飼料，啤酒、血清及尿樣中的玉米赤霉烯酮。試劑盒中包括了所有檢測用的試劑。該試劑盒有96個試驗孔包括標準試驗，如果進行定量分析，必須有微孔板酶標儀。樣品制備所需的時間：（以10個樣品為例）谷物/飼料.大約20分鐘啤酒.大約10分鐘血清/尿樣.大約3.5小時檢測時間.大約2.5小時（不管樣品數量多少）1. 用途RIDASCREEN Ze

2、aralenon定量測定谷物， 飼料，啤酒，血清及尿樣中的玉米赤霉烯酮。2. 概要霉菌毒素玉米赤霉烯酮是由鐮刀菌屬的真菌形成。玉米赤霉烯酮主要呈雌激素效應。因為雌激素的特性，玉米赤霉烯酮會導致血中雌激素增高，臨床表現為動物繁殖能力下降癥狀。具有關報道，動物中以豬最為敏感，同時牛、馬、羊也受影響。這種霉菌毒素來源于植物或動物食品，會潛在威脅人體健康。為了檢測食物及飼料中的玉米赤霉烯酮，常用物理/化學的方法，諸如HPLC，DC和GC，但這些方法在樣品準備上耗時長，需要昂貴的實驗室設備，而用RIDASCREEN Zearalenon檢測方法，則能快速、準確地檢測谷物、飼料、啤酒、血清和尿素中的玉米赤

3、霉烯酮。 3. 測定原理測定的基礎是抗原抗體反應。微孔板包被有玉米赤霉烯酮的特異性抗體。加入標準或樣品溶液及玉米赤霉烯酮酶標記物，游離玉米赤霉烯酮與玉米赤霉烯酮酶標記物競爭玉米赤霉烯酮抗體，沒有連接的酶標記物在洗滌步驟中被除去。將基質（過氧化尿素）和發(fā)色劑（四甲基聯苯胺）加入到孔中并且孵育。結合的酶標記物將無色的發(fā)色劑轉化為藍色的產物。加入反應停止液后使顏色由藍色變?yōu)辄S色。在450nm處（參比波長大于600nm）測量，吸光度與樣品中的濃度成反比。4. 提供的試劑每一個盒中的試劑足夠進行96個測量（包括標準分析孔），盒中的材料如下1 X 96孔微孔板（12條 X 8孔，可以拆分為單孔）包被有玉米

4、赤霉烯酮抗體6 X玉米赤霉烯酮標準濃縮液，1.3 ml/瓶標準濃縮液濃度為：0ppt，50ppt，150ppt， 450ppt，1350ppt，4050ppt 1 X 酶標記的玉米赤霉烯酮濃縮液（0.7ml）.紅色帽1 X 基質（7ml）綠色帽1 X 發(fā)色劑（7ml）.藍色帽1 X 反應停止液1N硫酸（14ml）.黃色帽1 X 緩沖液1（50ml） 用于樣品稀釋.白色帽（用于樣品和酶標記物的稀釋）5. 需要的材料但盒中不提供5.1設備-旋轉蒸發(fā)儀或其它蒸發(fā)設備-微孔板酶標儀（450nm）定量分析用-離心機-振蕩器-粉碎機-Whatman NO.1濾紙或相當的濾紙-漏斗、100ml燒瓶、移液管-

5、50ul，100ul，400ul微量加樣器5.2 試劑-甲醇以下是血清和尿樣的制備所附加的試劑-葡萄糖苷酸酶/arylsulfatase 推薦Helix pomatia （Merck， Art No：4114）-RIDA C18柱（Art No: R2002）-50 mM 醋酸鈉緩沖液 pH 4.8-20 mM Tris 緩沖液pH 8.5/甲醇（80/20）6. 操作者應該注意之事項-玉米赤霉烯酮標準溶液必須小心放置-接觸酸性溶液時應戴手套，避免接觸皮膚-使用過的玻璃容器最好用pH 7的次氯酸溶液（10%V/V）浸泡過夜-停止液為1N硫酸，使用時避免接觸皮膚-不要用過期的RIDASCREEN

6、 玉米赤霉烯酮試劑盒。稀釋或有雜質的溶液會使結果有誤-不要用不同批號試劑盒的試劑7. 儲存條件-保存試劑盒于2-80C。不要冷凍-無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下-標準物質對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下-將不用的微孔板放進原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封8. 試劑變質的跡象發(fā)色劑有任何顏色，表明發(fā)色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度值小于0.6個單位（A450nm0.6）時，表示試劑可能變質。9. 樣品處理樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存9.1 谷物和飼料-取有代表性的樣品粉碎、混合-稱取5g 粉碎后樣品與25ml，70%的甲醇溶液（甲醇/蒸餾水溶液70/30）

7、混合。-強烈振蕩3分鐘-離心或萃?。菏覝兀?0-25）下離心10min，3500g；或是用Whatman NO.1濾紙過濾。-將上清液或是濾液用樣品稀釋緩沖液1：7稀釋（1+6） （例如：100ul上清液或是濾液+600ul樣品稀釋緩沖液）-取50ul用試劑盒進行分析為了更具代表性，我們推薦用大體積樣本，如10g樣本50ml甲醇/水溶液（70/30）。盡可能準備大量的樣本和實驗器材。濾紙過濾全部樣品溶液。注意：如果所測結果較高，樣品溶液應該用緩沖液 （buffer 1）進一步稀釋。甲醇萃取液在2- 8C儲存，大約可以放置2周，在-20儲存大約2個月，儲藏時應密封，避光。9.2 啤酒-將啤酒樣品

8、用攪動或是過濾的方法去除多余的CO2，直至看不到泡沫為止。-用樣品稀釋緩沖液1:5（1+4）稀釋樣品 （例如：100ul樣品+400ul樣品稀釋緩沖液）-取50ul用試劑盒進行分析注意：對于混濁的樣品應當過濾后再做檢測。9.3 血清和尿樣尿樣-取3ml 50 mM 醋酸鈉緩沖液加入到0.5ml 尿樣中-取8ul 葡萄糖苷酸酶/arylsulfatase加入-在37C孵育3小時-C18柱提純C18柱提純 每兩秒鐘一滴-用3ml甲醇溶液（100%）洗柱-用2ml包含有20%甲醇的20mM Tris 緩沖液平衡洗脫的柱子-使用3.5ml 尿樣或0.5ml 血清-用2ml包含有20%甲醇的20mM T

9、ris 緩沖液洗滌柱子-取3ml 甲醇（40%）洗柱，用空氣或氮氣干燥柱子大約1分鐘-取1ml 甲醇（80%）洗柱，每分鐘15滴-在不大于60的溫度中完全蒸干柱子-用50ul甲醇復溶干燥物，加入450ul 緩沖液，充分混合-取50ul用試劑盒進行分析注意：另外還有肉樣和牛奶樣品的處理方法，如有需要請聯系當地的分校商。 10. 酶標免疫分析程序10.1 測定之前注意事項1. 用之前，應使所用試劑回到室溫。2. 用完后，所有試劑應立即在2-8保存。3. 實驗進行中，不能讓微孔板干燥。4. 此方法允許誤差存在，很大程度上取決于洗板。仔細按順序清洗是ELSIA檢測的關鍵。5. 孵育時避免直接光照，推薦

10、用物體覆蓋微孔板。10.2玉米赤霉烯酮酶標記物 玉米赤霉烯酮酶標記物（紅蓋瓶）為濃縮液，稀釋的酶標記物穩(wěn)定性差，在吸取之前，應輕輕振蕩。稀釋酶標記物，用緩沖液1按1:11稀釋。（如200ul酶標記物+2.0 ml緩沖液1，足夠做4條微孔板）10.3 包被有抗體的微孔板條 鋁鉑帶沿虛線剪開，把需要實驗的微孔排在框架上，剩下的微孔放在鋁鉑帶中在2-8繼續(xù)保存。10.4測定程序1. 將足夠標準和樣品所用數量的孔條插入微孔架，標準及 樣品做平行，并記錄標準及樣品的位置。2. 加入50ul的標準或處理好的樣品到各自的微孔中，每個 標準和樣品必須使用新的吸頭。3. 加入50ul稀釋了的酶標記物到微孔底部（

11、紅色蓋），徹底 混合，并且在室溫孵育2小時，覆蓋上薄膜（防止蒸發(fā)）。如果實驗所用孔數量多，請用多通道移液器。（注意移液器管尖千萬不要接觸到放進孔中的液體，避免交叉污染。）4. 倒出孔中的液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打以保證完全除去孔中的液體。5. 用多通道移液器將250ul蒸餾水加入孔中。輕輕振蕩板并在桌面上做圓周運動以混勻，再次倒出孔中的液體，完全除去孔中的液體，再重復操作洗滌步驟兩次以上。（移液器管尖千萬不要接觸到放進孔中的液體，避免污染洗滌水造成洗板不徹底。洗板后要立即進行下一步操作，避免板孔干躁造成重復性差）。6. 加入50ul基質及50ul發(fā)色試劑到微孔中，充分混合并在室溫暗處孵育

12、30分鐘。（注意此操作步驟要快，盡量保持前后孔孵育時間的一致，如果實驗所用孔數量多，請用多通道移液器加液。移液器管尖千萬不要接觸到放進孔中的液體）。7. 加入100ul反應停止液到微孔中（注意此操作步驟要快）如果實驗所用孔數量多，請用多通道移液器加液。混合好在450nm處測量吸光度值，以空氣為空白，（參比波長大于600nm）必須在加入停止液后60分鐘內讀取光度值。11. 結果定量分析：所獲得的標準和樣品吸光度值除以第一個標 準（0標準）的吸光度值再乘以100。因此0標準等于100%并且以百分比給出吸光度值。 標準的吸光度值（或樣品）-x 100= %吸光度值0標準的吸光度值計算的標準值繪成為一

13、個對應玉米赤霉烯酮濃度（ng/kg）的半對數坐標系統曲線圖， 相對應每一個樣品的濃度（ng/kg）可以從標準曲線上讀出。請注意為了獲得樣品中玉米赤霉烯酮濃縮液數據，濃縮液應進一步稀釋，讀出的值乘以稀釋系數得實際值，稀釋系數如下：谷物/飼料.35啤酒.5血清/尿樣.112. 特異性玉米赤霉烯酮檢測的交叉反應Zearalenone.100 %-Zearalenol.41.6 %Zeranol（Zearalanol）.27.7 %-Zearalenol.13.8 %注意：因為Zeranol交叉反應，所以它不能用于EU檢驗，玉米赤霉烯酮檢測尿液中的殘留下限為150ng/l（150ppt）。13. 靈敏

14、度玉米赤霉烯酮檢測試劑盒的平均檢測下限為50ppt。根據樣品的不同，檢測限如下：谷物/飼料.1750ppt啤酒.250ppt血清/尿樣.50ppt14. 回收率谷物/飼料.80%15%附錄r-Biopharm拜發(fā)公司， r-Biopharm Rhone LTD拜發(fā)羅恩公司 各種霉菌毒素檢測試劑盒及免疫親和柱AFLACARD B1黃曲霉毒素B1 快速檢測卡 檢測限可調整為2，5，10，15，20ppbAFLACARD TOTAL總黃曲霉毒素(B1，B2，G1，G2)快速檢測卡 檢測限可調整為4，5，10，15，20，30ppbKobra Cell黃曲霉毒素B1，G1， 分析儀4秒鐘得到結果AFL

15、APLATE B1黃曲霉毒素B1 ELISA 試劑盒 單克隆抗體(1.5-50ppb)AFLASCAN黃曲霉毒素(B1，B2，G1，G2)， 單克隆抗體免疫親和柱，半定量目測AFLAPREP單克隆抗體免疫親和柱，用于檢測黃曲霉毒素的樣品純化，窄范圍0-200ppb，檢測限小于0.5ppbEASI-EXTRACT AFLATOXIN單克隆抗體免疫親和柱，用于檢測總黃曲霉毒素的樣品純化總黃曲霉毒素單克隆抗體免疫親和柱，用于檢測黃曲霉毒素的樣品純化總黃曲霉毒素（，）單克隆抗體ELISA方法黃曲霉毒素(B1，B2，G1，G2) 快速檢測（15分鐘）ELISA方法黃曲霉毒素(B1，B2，G1，G2) 特

16、快速檢測 (5分鐘) 半定量分析， ELISA方法AFLAPREP M單克隆抗體免疫親和柱，用于檢測乳品中黃曲霉毒素M1的樣品純化，檢測限小于5ppt乳制品中的黃曲霉毒素 M1 (高靈敏度)， ELISA方法乳制品中的黃曲霉毒素M1快速檢測(15分鐘)， ELISA 方法T - 2 毒素 (高靈敏度)， 單克隆抗體ELISA方法T2 毒素快速檢測 (15分鐘)， 單克隆抗體ELISA方法FUMONIPREP伏馬菌毒素單克隆抗體免疫親和柱，用于檢測伏馬菌毒素的樣品純化，范圍100ppb-15000ppbFUMONIPLATE伏馬菌毒素， ELISA方法， 單克隆抗體(0. 3-10ppm)伏馬菌毒素(高靈敏度)， ELISA方法伏馬菌毒素快速檢測(15分鐘)， ELISA方法赭曲霉毒素A (高靈敏度)， ELISA方法赭曲霉毒素A 快速檢測(15分鐘)，單克隆抗體ELISA方法赭曲霉毒素A單克隆抗體免疫親和柱，用于檢測赭曲霉毒素 A 的樣品純化OCHRAPREP單克隆抗體免疫親和柱，用于檢測赭曲霉毒素 A 的樣品純化， 檢測范圍1-1000ppb， 檢測