上海醫(yī)藥工業(yè)研究院近年來微生物藥物的研發(fā)進展_圖文

1、新型-內(nèi)酰胺酶抑制多肽P-1A的研發(fā) 建立了酵母雙雜交系統(tǒng)并克隆表達了多種-內(nèi)酰胺酶 基因用于篩選其抑制劑 利用酵母雙雜交系統(tǒng)篩選獲得了一個-內(nèi)酰胺酶抑 制多肽P-1，體外試驗表明其對多種-內(nèi)酰胺酶具有 抑制作用。獲得中國發(fā)明專利。 進一步通過氨基酸替換獲得了抑制活性更強的多 肽，且體內(nèi)試驗表明P1-A對臨床耐藥的肺炎克雷伯 氏菌有抑制作用 體外-內(nèi)酰胺酶抑制多肽具有抑制-內(nèi)酰胺酶 降解-內(nèi)酰胺類抗生素的活性 體內(nèi)-內(nèi)酰胺酶抑制多肽能夠改善臨床耐藥菌 對-內(nèi)酰胺類抗生素的耐受度，經(jīng)過氨基酸替 換這一活性更強 Relative Suvival Rate (% 2.5 2.0 150 Amp Am

2、p+SHV Amp+SHV+P1 100 Control P1-A P1 OD235 1.5 1.0 0.5 0.0 0 100 200 300 400 50 0 -5 10 Time (s Dilution Factor 多黏菌素E2甲磺酸鈉 多黏菌素E中的不同組分在抗菌活性、急性 毒性和與血漿蛋白結(jié)合率上均有較明顯的差 異，其中多黏菌素E2不但抗菌活性強而且毒 性低。 按照化藥1.4類進行開發(fā) 2014年啟動全面的臨床前研究，2016年申 報臨床。 雷帕霉素產(chǎn)生菌-游動放線菌 Actinoplanes sp. N902-109基因序 列測定及分析 10 -6 10 研究意義 z 雷帕霉素(

3、rapamycin商品名:西羅莫司、 Sirolimus是一種臨床上應(yīng)用的重要的大環(huán)內(nèi)酯 類免疫抑制劑，臨床上首選用于器官移植的抗 排斥反應(yīng)和自身免疫性疾病的治療。它的免疫 抑制活性高，腎毒性低且無神經(jīng)毒性。雷帕霉 素還具有抗真菌，抗腫瘤，營養(yǎng)神經(jīng)和抗衰老 的功能。可作為莫司類合成的重要前體，為藥 物研究熱點； z 雷帕霉素于1999年10月通過FDA批準(zhǔn)在美國 首次上市。至2007年，國際市場上雷帕霉素制 劑銷售額已達15億美元左右 雷帕霉素最初由Ayerst研究室從太平洋Easter島的土壤樣品中分離 的吸水鏈霉菌（streptomyces hygroscopicus ATCC29253發(fā)

4、酵分離 得到。 游動放線菌sp.N902-109也是一種雷帕霉素產(chǎn)生菌。在同等發(fā)酵條 件下，游動放線菌合成雷帕霉素的能力為405mg/L，約為野生型吸 水鏈霉菌ATCC 29253的產(chǎn)量（40mg/L）的十倍左右。 研究意義：吸水鏈霉菌來源的雷帕霉素生物合成基因簇已經(jīng)闡明。我們的前 期工作發(fā)現(xiàn)游動放線菌的雷帕霉素生物合成基因簇與吸水鏈霉菌的有較大差 別，Actinoplanes sp. N902-109全基因組測序，為解析雷帕霉素合成簇及其 調(diào)控機理為雷帕霉素的深入研究打下基礎(chǔ)，同時能夠?qū)τ蝿臃啪€菌N902-109 內(nèi)含的其他種類次生代謝產(chǎn)物進行挖掘。 全基因組信息 菌株 Actinoplan

5、es sp. N902-109 結(jié)構(gòu) 基因組大小/bp GC 含量 CDS（編碼序列） 數(shù) 平均CDS長度/bp 編碼密度 rRNA 數(shù) tRNA 數(shù) 內(nèi)含質(zhì)粒 環(huán)狀 9228054 71.3% 8349 1001 90.6% 12 59 0 12 11 2 oriC 生物合成基因簇（AntiSMASH預(yù)測） Title Genecluster terpene PKS I-NRPS lant PKS I NRPS PKS I PKS I PKS I-NRPS NRPS PKS I-NRPS PKS I-NRPS NRPS PKS II PKS I other siderophore NRPS

6、PKS I-NRPS PKS I-NRPS butyrolactone PKS I PKS III chondrochloren coelichelin lankamycin Compound Start 166184 231945 1069688 1588919 1690538 2487389 2626193 2700890 2993876 3207236 3361592 3614822 3689238 3776464 4208706 4689171 6361811 6462381 6545817 8126056 8523964 8822443 End 184883 314881 10936

7、24 1632145 1753072 2552933 2713496 2878729 3046263 3341878 3630453 3664308 3723222 3856380 4253413 4713781 6427387 6533146 6643476 8133416 8575285 8854329 BestHit Micromonospora aurantiaca ATCC 27029 Streptomyces hygroscopicus ATCC 53653 Mycobacterium thermoresistibile ATCC 19527 Oscillatoria sp. PC

8、C 6506 Mycobacterium smegmatis str. MC2 155 Kitasatospora setae KM-6054 Frankia alni ACN14a Nocardiopsis sp. FU40 Serratia odorifera 4Rx13 SODi Streptomyces violaceusniger Tu 4113 S.hygroscopicus Streptomyces viridochromogenes DSM 40736 Streptomyces strain Tu 4042 Actinomadura madurae strain ATCC 39

9、144 Mycobacterium marinum M Actinoplanes missouriensis 431 Saccharomonospora glauca K62 Amycolatopsis mediterranei U32 Streptomyces achromogenes subsp. strain NRRL 3061 Azospirillum brasilense Sp245 Micromonospora sp. ATCC 39149 Actinoplanes missouriensis 431 基因注釋 Glimmer 3.02、 RAST； tRNA tRNAscan-S

10、E-1.23； 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Actinoplanes sp. N902-109 9,228,054bp rRNA Reference BlastN； Gene clusters AntiSMASH； essential genes COG （DEFGL） 備注：共6圈，從內(nèi)向外依 次為gc-content、gc-skew、 RNA、gene clusters、 essential genes、genes。 chlorothricin tautomycin friulimicin macbecin r

11、apamycin daptomycin lysolipin maduropeptin mannopeptimycin rubradirin Rapamycin biosynthesis cluster dif 22 吸水鏈霉菌和游動放線菌雷帕霉素生物合成簇的比較分析 SARP：Streptomyces antibiotic regulatory protein 游動放線菌的基因簇內(nèi)比吸水鏈霉菌增加了一個SARP，是一個SARP家族轉(zhuǎn)錄激活因子。 據(jù)推測這個基因可能和吸水鏈霉菌天然產(chǎn)量高于游動放線菌有關(guān)。 中藥一類新藥-丹酚酸B 國家新藥創(chuàng)制大平臺 項目研究目標(biāo):采用先進的分離純化工藝提 高丹酚

12、酸B的純度,獲得中藥一類新藥批件。 主要技術(shù)及指標(biāo)：采用新的分離介質(zhì)并結(jié) 合梯度洗脫工藝，將丹酚酸B的純度提高至 99.5%，藥效學(xué)等研究表明其安全有效，目 前正按照有關(guān)要求申報中藥一類新藥臨床。 游動放線菌 吸水鏈霉菌 rapA 與吸水鏈霉菌的同源性 （identities/positives） 65%/74% rapB 71%/80% rapC 66%/75% 重大生產(chǎn)工藝的改進 z 抗感染藥物 頭孢菌素C 9-內(nèi)酰胺類抗生素（占抗感染藥物60%） -7-ACA生產(chǎn)工藝的改進 頭孢菌素類抗生素（占-內(nèi)酰胺類60% ） 7-氨基頭孢烷酸（7-ACA） 頭孢菌素C H2N O O OH 頭孢菌

13、素C O O O OH H N N S O CH3 3 從頭孢菌素C到7-ACA 抗感染藥物 -內(nèi)酰胺類抗生素 頭孢美唑 頭孢菌素類抗生素 頭孢米諾 7-ACA 頭孢菌素C H2 N N O O O OH 7-ACA S O CH3 頭孢哌酮 7-ACA的生產(chǎn) 化學(xué)合成 二步酶法 一步酶法 發(fā)酵法 7-MAC 7-TMCA 7-ACA 頭孢孟多酯 CPC acylase 頭孢 唑林鈉 頭孢 曲松鈉 頭孢 噻肟鈉 頭孢 替唑鈉 頭孢 噻利 頭孢 呋辛鈉 頭孢菌素C?；?設(shè)計 合成 表達 轉(zhuǎn)化 發(fā)酵 突變 改組 一步酶轉(zhuǎn)化生產(chǎn)7-ACA 通過基因突變獲得了催化活性提高了33% 的新型頭孢菌素C酰

14、化酶，且底物耐受性和 對溫度、pH等的適應(yīng)性也更好 120 relative Activity （ %） 100 84 80 60 40 PYG329 PYG328 PYG327 PYG326 PYG235-50 PYG324 PYG232 56 73 65 67 96 100 1 2 3 4 小結(jié) 設(shè)計合成了一段CPC?；福哂畜w外轉(zhuǎn)化CPC 為7-ACA的能力 表達該?；傅捻旑^孢霉重組菌能直接發(fā)酵生產(chǎn) 7-ACA 體外定向進化獲得了轉(zhuǎn)化活性更高的?；感蛄?通過構(gòu)建不同的轉(zhuǎn)錄單元及不同的序列獲得了不 同發(fā)酵水平的7-ACA重組菌 采用兩個抗性標(biāo)記篩選基因組改組的頂頭孢霉重 組菌的融合子

15、，結(jié)合發(fā)酵工藝優(yōu)化，CPC轉(zhuǎn)化為 7-ACA轉(zhuǎn)化效率超過92% 通過比較蛋白質(zhì)組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)研 究完善頭孢菌素C（CPC）產(chǎn)生菌-頂頭孢霉的整體代謝途徑 4 頂頭孢霉比較蛋白質(zhì)組學(xué) Spots ID 126 576 207 575 尋找到的差異蛋白 Acc.no Identity MW(d pI Scor e 93 92 72 72 Change fold （41/17） 2.9 -2.0 2.0 -1.9 gi|26066520 4 gi|28958025 0 gi|71028898 gi|26921579 8 gi|12170564 8 pyruvate oxidase thiamineS

16、 protein lipoamide transferase anaerobic dimethyl sulfoxide reductase glutathione Stransferase GstA 67 9.5 46.6 22.4 4.9 4.48 8.45 5.23 172 29 6.77 95 -1.8 CPC高產(chǎn)菌和低產(chǎn)菌的2-DE差異圖 整體代謝途徑分析 通過分析基因表達和 蛋白表達的上調(diào)和下調(diào)研究與CPC代謝相關(guān)基因 碳水化合物與能量代謝（丙酮酸氧化酶、噻唑合成酶等）； CPC合成的前體氨基酸代謝（谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶）； 氧化應(yīng)激反應(yīng)等（線粒體過氧化酶PRX1）； 例如：Glutat

17、hione S-transferase 谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶GstA高產(chǎn)菌中的表達量比低產(chǎn)菌中低1.82倍，其在谷胱甘肽代謝途徑中 負(fù)責(zé)將谷胱甘肽分解為硫醚氨酸，消耗谷胱甘肽，而谷胱甘肽經(jīng)多步催化生成L-cys。 Pyruvate oxidase 丙酮酸氧化酶在高產(chǎn)菌株中的表達量是低產(chǎn)菌株中的2.9倍，其催化丙酮酸氧 化脫羧產(chǎn)生大量ATP，為菌體的基礎(chǔ)生長代謝提供大量能量。 埃坡霉素B 1993年發(fā)現(xiàn)于纖維堆壤菌Sorangium cellulosum 90代謝產(chǎn)物，有39種epothilthone化 合物。主要組份有Epothilone A、B、C、D。 Epothilone A：R=H Epot

18、hilone B：R=CH3 Epothilone D：R=CH3 Epothilone C：R=H Hfle et al,WO/1993/010121 Bollag D, et al. Cancer Research, 1995, 55(11:2325-2333. 5 纖維堆囊菌的菌種改良 O S HO O O OH O N O S 半合成 HO NH O OH O N 出發(fā) 菌株 NTG 誘變 丙酸鹽 代謝產(chǎn) 物 搖瓶 復(fù)篩 自然 分離 Epothilone B ixabepilone 2007年FDA批準(zhǔn)上市 用于治療晚期乳腺癌 15mg/支，1380 美元 45mg/支，3518 美元

19、 專利2018年到期 纖維堆囊菌SIPI So ce 603的菌種改良 SIPI So ce 603 Titer: 0.65mg/L 成團生長 SIPI So ce N39 32mg/L 分散生長 Epothilone B放大生產(chǎn) 谷胱甘肽(GSH 30ml O O H N HO NH2 N H O OH SH O 5000ml 50L 500L 種子培養(yǎng) 5000L 發(fā)酵 30000L 一種重要的細(xì)胞抗氧化劑。 用于放化療腫瘤、肝臟疾病患者治療。 實現(xiàn)30m3規(guī)模放大生產(chǎn) 林可霉素-新生產(chǎn)工藝 gsh1 gsh2 P gsh1 gsh2 Zeocin 50L P gsh1 gsh2 Zeoc

20、in 50000L 合作單位:河南天方藥業(yè) 目標(biāo):建立林可霉素發(fā)酵新工藝,提高林可霉 素發(fā)酵水平,降低單耗和生產(chǎn)成本. 主要技術(shù):采用復(fù)合氮源,解決菌絲自溶；采 用流加工藝解除葡萄糖效應(yīng)并穩(wěn)定代謝環(huán) 境,使發(fā)酵效價單日漲幅從原工藝1000ug/ml 提高至1500ug/ml以上，發(fā)酵水平達到 12500ug/ml以上(200h，單耗降低50%以 上。 重組酵母 從50L直接放大到50m3,實現(xiàn) 產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。首家獲得生產(chǎn) 批件。 6 納他霉素-生產(chǎn)新工藝 合作單位：浙江震元制藥 項目研究目標(biāo)：提高發(fā)酵水平，建立納他 霉素生產(chǎn)新工藝。 主要技術(shù)及指標(biāo)：采用流加技術(shù)及優(yōu)化培 養(yǎng)基配方，將納他霉素發(fā)酵

21、單位從原工藝 的3000ug/ml左右提高至目前的12000ug/ml 左右，通過結(jié)晶工藝解決了提取工藝的技 術(shù)關(guān)鍵，獲得了納他霉素生產(chǎn)新工藝。 建立了抗生素產(chǎn)生菌的分子育種 技術(shù)平臺 通過將抗生素生物合成途徑中關(guān)鍵酶基因的敲除或過 量表達獲得一些重要抗生素的高產(chǎn)工程菌或引入新基 因獲得產(chǎn)生新化合物的重組菌 頭孢菌素C 阿霉素、柔紅霉素、表柔紅霉素 雷帕霉素 雷莫拉寧、等等 環(huán)境保護研究的 新成果 污泥減量高效復(fù)合菌的篩選 及應(yīng)用 活性污泥法 活性污泥是由細(xì)菌、微 型動物為主的微生物與懸浮 物質(zhì)、膠體物質(zhì)混雜在一起 所形成的茶褐色的絮凝體。 其中的微生物主要由細(xì) 菌組成,細(xì)菌主要有菌膠團細(xì) 菌

22、和絲狀菌,數(shù)量可占污泥中 微生物總量的90 %95 %左 右,細(xì)菌在有機廢水的處理中 起著最重要的作用 “曼斯微”微生物復(fù)合菌劑研 制 黨的“十八大”提出了“生態(tài)文明建設(shè)”的 目標(biāo)-天藍、山綠、水清的美麗中國。 城市污水處理產(chǎn)生的“剩余污泥”的處理 已經(jīng)成為現(xiàn)代社會迫切需要解決的問題。 目前，每年產(chǎn)生的“剩余污泥”數(shù)量已高 達二千多萬噸，占用了大量土地，形成了 “二次污染”。 7 綜合比較已有的剩余污泥減量化工藝與傳統(tǒng) 污泥處置方法，提出采用利用微生物菌劑的方法 進行污泥減量的新方法，利用微生物進行污泥減 量，無需提供額外的能量，充分利用了微生物的 特點，能夠與現(xiàn)有污水處理工藝很好的結(jié)合，克

23、服其他剩余污泥減量工藝技術(shù)的缺點。 9曼斯微微生物復(fù)合菌劑研制與應(yīng)用-配伍 表3-1-7 五種復(fù)合微生物制劑的菌株組成 Table 3-1-7 Strain composition of five complex microbial agents 名稱 產(chǎn)酶菌（株） 產(chǎn)抗菌肽（株） 產(chǎn)絮凝劑（株） D 3 3 0 DJP 2 4 0 DXN 3 2 1 DJPFU 4 2 0 DJFU 5 1 0 9曼斯微微生物復(fù)合菌劑研制與應(yīng)用-穩(wěn)定性 表3-1-14 名稱 0小時活菌數(shù) 12小時活菌數(shù) 24小時活菌數(shù) 48小時活菌數(shù) 不同烘干條件對菌存活的考察（單位：CFU/g） 45 8.3108 5.

24、5108 4.3108 2.8108 50 8.3108 4.3108 2.9108 1.9108 55 8.3108 2.2108 0.7108 0.08108 60 8.3108 1.2108 0.09108 0.001108 9曼斯微微生物復(fù)合菌劑-應(yīng)用試驗 確定加藥點為三期進水厭氧段和好氧段,并于12月 15日正式開始滴加 表3-1-15 復(fù)合菌劑MXW-DS的穩(wěn)定性考查（單位：CFU/g） 名稱 0個月活菌數(shù) 1個月活菌數(shù) 3個月活菌數(shù) 4 25 37 40 6.5108 6.5108 6.5108 6.5108 6.3108 5.6108 3.9108 2.8108 5.8108

25、4.5108 1.8108 0.6108 9曼斯微微生物復(fù)合菌劑-應(yīng)用試驗 三 號 從 12 月 15 日 開 始 加 MXWDS 小 結(jié) 減泥效果 每天排泥量（噸） 萬噸水排泥量M 100 80 60 40 20 0 10月 11月 12月 萬噸水排泥量 13.9 3 80.2 76.7 加菌后減泥效 果顯著 1.從1743株土壤微生物中篩選出一批陽性菌株，優(yōu)選出更 加理想菌株；經(jīng)配伍設(shè)計出五組菌劑D、DJP、DXN、 DJPFU和DJFU等，均表現(xiàn)出降COD、氨基氮和總氮性能， 能夠?qū)OD從240mg/L降低到最低46mg/L。 2.綜合評價選擇DJPFU作為MXW-DS的菌劑組成配方；

26、組成 為70%芽孢桿菌，20%產(chǎn)堿桿菌和10%絲狀真菌，按照發(fā) 酵液體積比。 3.復(fù)合微生物MXW-DS菌劑具有自主知識產(chǎn)權(quán), 在無錫蘆村 污水處理廠具有顯著降低生化池活性污泥功能。 4.復(fù)合微生物MXW-DS菌劑作用機理為：酶與抗菌肽發(fā)揮一 定作用 8 抗菌肽SIPI-CTTQ-2008-16 新的微生物藥物的 發(fā)現(xiàn) 抗菌肽是新抗生素開發(fā)的一個重要研究方向。 國內(nèi)外抗菌肽開發(fā)主要存在的問題是活性與傳統(tǒng)抗 生素相比不夠強，特別是對革蘭氏陰性菌活性不 強，并且很多抗菌肽有溶血毒性。 SIPI-CTTQ-2008-16是經(jīng)固相合成制備的14肽，含 有一對二硫鍵，其對耐多黏菌素E銅綠假單胞菌的 MI

27、C為0.25g/ml，對鮑曼不動桿菌和大腸桿菌的 活性也與多黏菌素E相當(dāng)，同時它不具有溶血毒性。 項目正在進行成藥性評價研究。 先導(dǎo)化合物SIPI608的結(jié)構(gòu)及活性 H H2N H3 C HN H C O O C H3 C H HO O H H H C O C H H N H C H N OH H H C NH H N N O S O H N N O H N O H3 C HN O H H H H3 C H N OH CH3 H O HN HN O H H O H SIPI608的主要抑菌譜為革蘭 氏陽性菌，其中對金黃色葡萄 球菌的MIC為0.098g/ml，僅 為陽性對照鹽酸萬古霉素MIC

28、的一半；對枯草芽孢桿菌的抑 制作用也較強 SIPI608的LD100為200mg/kg， LD50為175mg/kg。 H N 微生物來源的抗流感病毒藥物 篩選 新化合物SIPI608的結(jié)構(gòu) 抗流感病毒藥物研發(fā) 隨著耐藥病例的不斷增加，人類隨時會面臨著流感疫情暴發(fā)的考驗，新型抗流感 病毒藥物的研發(fā)勢在必行。其中，設(shè)計合成或從化合物庫中篩選新型神經(jīng)氨酸酶 抑制劑是當(dāng)前研究的熱點和難點。 目前國內(nèi)外的研究主要集中在對已有抑制劑奧司他韋和扎那米韋的修飾，篩選具 有抗流感病毒活性的中草藥成分以及利用生物信息學(xué)設(shè)計新的化合物等方面。 按照結(jié)構(gòu)的不同，在研的神經(jīng)氨酸酶抑制劑可分為唾液酸類似物、苯甲酸衍生物

29、、 環(huán)己烯衍生物、環(huán)戊烷衍生物、吡咯烷衍生物和天然提取物六大類。 唾液酸類 環(huán)己烯類 天然提取物 篩選模型的建立 甲型流感病毒H1N1亞型的神經(jīng)氨酸酶(NA基因經(jīng)截短和密碼子優(yōu)化 后，定向插入畢赤酵母表達載體中，線性化的重組載體轉(zhuǎn)化畢赤酵母, 篩選獲得重組菌株，該菌株經(jīng)誘導(dǎo)后可表達具有生物活性的神經(jīng)氨酸酶。 通過優(yōu)化流感病毒神經(jīng)氨酸酶的酶量、底物濃度、反應(yīng)時間、反應(yīng)體系 pH值、鈣離子濃度和反應(yīng)溫度等條件，建立一個基于神經(jīng)氨酸酶靶向 高通量篩選抗甲型流感病毒H1N1亞型的活性成分的模型。 苯甲酸類 環(huán)戊烷類 吡咯烷類 藥學(xué)學(xué)報. 2010,45(3:289-299 9 篩選流程 1. 分離菌種

30、并制備發(fā)酵提取物樣品 分離菌種，進而轉(zhuǎn)接液體培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，然后分別用乙酸乙酯和丙酮對 發(fā)酵液及菌體進行抽提，離心收集抽提液，將乙酸乙酯或丙酮揮發(fā)干凈， 獲得發(fā)酵提取物樣品。 篩選流程 3. 活性化合物的分離提取、結(jié)構(gòu)鑒定和修飾 大量制備獲得的具有顯著抑制活性的發(fā)酵提取物樣品，進行活性化合物的 分離提取，進而對分離的化合物進行結(jié)構(gòu)預(yù)測、分析及驗證。 2. 篩選抑制神經(jīng)氨酸酶的活性成分 以本研究構(gòu)建的神經(jīng)氨酸酶抑制劑篩選模型為活性篩選體系，利用多功能 酶標(biāo)儀等分析設(shè)備，對發(fā)酵提取物樣品進行高通量篩選。 1 微生物發(fā)酵提取 物樣品 3 篩選 活性提取物 2 高通量篩選模型 篩選模型的應(yīng)用 。 利用

31、本項目中構(gòu)建的篩選模型對發(fā)酵提取物樣品進行篩選，共獲得22 株具有神經(jīng)氨酸酶抑制活性的菌株，其中包括16株細(xì)菌和6株真菌。 活性菌株SIPI-B2736、SIPI-B2081、SIPI-B2985、SIPI-B3037、SIPIF4504分別鑒定為蒼白桿菌屬、蠟狀芽孢桿菌屬、產(chǎn)堿菌屬、蠟狀芽 孢桿菌屬、丘陵假絲酵母菌屬。 對活性菌株SIPI-B2736、SIPI-B2081、SIPI-B2985、SIPI-B3037、 SIPI-F4504的次級代謝產(chǎn)物按照活性追蹤的方式進行了分離純化，獲 得3-甲硫基丙烯酸、3-甲硫基丙酸、苯甲酸甲酯等多個化合物，其中 3-甲硫基丙酸表現(xiàn)出了一定的神經(jīng)氨酸酶抑制活性，其衍生物具有較 強的抗腫瘤活性。 醛糖還原酶抑制劑篩選 以大腸桿菌表達的醛糖還原酶為靶標(biāo)，通過檢測樣 品對醛糖還原酶的抑制效率篩選活性化合物。利用多功 能酶標(biāo)儀共篩選樣品約1000次，初篩實驗中有50個樣品 對靶酶具有