不同劑型清開靈中黃芩苷含量測定方法的改進

1、不同劑型清開靈中黃芩苷含量測定方法的改進                              作者：趙蘭芬，符滇海，馮進儀【摘要】  目的 改進不同劑型清開靈中黃芩苷的含量測定方法。方法 采用高效液相色譜法，色譜柱為Agilent TCC18柱(150 mm×4.6 mm，5 m )

2、；流動相為水甲醇冰醋酸（體積比55451）；檢測波長為274 nm；流速為1 mL·min-1。結(jié)果 黃芩苷的質(zhì)量濃度在0.010570.2114 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積線性關系良好，r=0999 9；精密度、重復性、穩(wěn)定性及加樣回收率結(jié)果均能滿足分析要求。結(jié)論 本法可行、準確，可為不同劑型清開靈藥品的標準修訂提供依據(jù)。 【關鍵詞】  清開靈；黃芩苷；高效液相色譜法；含量測定Abstract:Objective To improve the determination method for the content of the baicalin in dif

3、ferent preparations of QingkailingMethods Baicalin was analyzed on an Agilent TCC18 colum (150 mm×4.6 mm，5 m)The mobile phase consisted of watermethanolacetic acid (55451) The flow rate was 1.0 ml·min-1 and the detection wavelength was at 274 nmResults Baicalin had a good linearity in the

4、range of 0.01057-0.2114 mg·mL-1 (r=0999 9) with satisfied precision, repeatability, stability and recoveryConclusion This method was practicable and accurate, and it provided the basis for revision of the standardsKey words:baicalin;HPLC;content determination清開靈組方源于中醫(yī)急性熱病傳統(tǒng)處方“溫病三寶”中的安宮牛黃丸，由膽酸、豬

5、去氧膽酸、黃芩苷、珍珠母、梔子、水牛角、板藍根、金銀花組成，迄今為止已形成系列產(chǎn)品1。其具有清熱解毒、鎮(zhèn)靜安神的作用，用于外感風熱時毒，火毒內(nèi)盛所致高熱不退，煩躁不安，咽喉腫痛，舌質(zhì)紅絳、苔黃、脈數(shù)者；上呼吸道感染，病毒性感冒，急性扁桃體炎，急性咽炎，急性氣管炎，高熱等癥屬上述證候者2。黃芩苷是清開靈中含量最高的主要有效成份，故對其進行定量分析，是控制該制劑質(zhì)量的關鍵3。本實驗清開靈注射液、口服液中黃芩苷含量測定項下的樣品處理方法4，改進清開靈顆粒、清開靈片和清開靈膠囊的樣品處理方法，為清開靈系列藥品中黃芩苷含量測定方法的統(tǒng)一和簡化提供可靠的依據(jù)。1  儀器與試藥 

6、0;  島津LC2010A/C型高效液相色譜儀LCsolution色譜工作站,METTLER TOLEDO十萬分之一天平，TU1901雙光束紫外可見分光光度計；甲醇為色譜純，實驗用水為超純水，冰醋酸、乙醇為分析純；黃芩苷對照品（藥品生物制品檢定所，批號110715200815，含量：95.2%,供含量測定用）；清開靈顆粒、清開靈片和清開靈膠囊均為市售。2  方法與結(jié)果21  色譜條件2，5，6色譜柱    Agilent TCC18柱(150 mm×4.6 mm，5 m)；流動相：水甲醇冰醋酸（體積比55451）；檢測波長：

7、274 nm；流速：1 mL·min-1；進樣量：10 L。理論板數(shù)按黃芩苷峰應不低于2 500。廣東藥學院學報  第25卷    第5期  趙蘭芬，等.不同劑型清開靈中黃芩苷含量測定方法的改進22  溶液的制備221  對照品貯備液的制備 精密稱取黃芩苷對照品適量，用體積分數(shù)70%乙醇制成每1 mL含0.5 mg的對照品貯備液。222  供試品溶液的制備 （1）國家標準方法：取裝量差異項下的清開靈顆粒粗粉，研細，精密稱取細粉適量（約相當于黃芩苷10 mg），置100 mL量瓶中，加體

8、積分數(shù)50%甲醇使溶解，稀釋至刻度，搖勻，濾過2；取裝量差異項下的清開靈膠囊內(nèi)容物，研勻，精密稱取約0.25 g (約相當于黃芩苷10 mg)，置100 mL量瓶中，加甲醇50 mL，超聲處理10 min，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過5；取清開靈片20片，除去包衣，精密稱定，研細，取約0.2 g（含黃芩苷不少于7.2 mg），精密稱定，置100 mL量瓶中，加體積分數(shù)50%甲醇適量，超聲處理15 min，放冷，加體積分數(shù)50%甲醇至刻度，搖勻，濾過6。（2）改進后方法：取裝量差異項下的不同劑型的清開靈藥品細粉，精密稱取適量（約相當于黃芩苷10 mg），置100 mL量瓶中，加體積分數(shù)70%

9、乙醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液做為供試品溶液。      取上述溶液，按“21”項下的色譜條件進行測定，結(jié)果見圖1-3，可見用本文改進方法制備供試品溶液，其圖譜特征與國家標準方法處理的供試品溶液基本一致。223  陰性樣品溶液的制備 按處方比例取黃芩苷外的其他藥材，按“222”項下的方法（2）制備陰性對照溶液。1         23  專屬性試驗    分別取黃芩苷對照品溶

10、液（0.105 7 mg·mL-1）、供試品溶液和陰性對照品溶液各10 L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果陰性樣品溶液無干擾，理論板數(shù)為4 717.85，見圖4。24  線性關系考察    分別精密量取黃芩苷對照品貯備液1、3、5、10、15、20 mL，加體積分數(shù)70%乙醇稀釋成黃芩苷濃度為0.01057、0.03171、0.05285、0.1057、0.1586、0.2114 mg·mL-1的溶液，按“21”項下的色譜條件進行測定。以質(zhì)量濃度（，mg·mL-1）為橫坐標，各自峰面積(A)為縱坐標繪制標準曲線,得回歸方程

11、為A=3.602×10 7-6.953×103，r =0.999 9（n=6）。黃芩苷的質(zhì)量濃度在0.010570.2114 mg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關系。25  精密度試驗    取質(zhì)量濃度為0.1057 mg·mL-1的黃芩苷對照品溶液，按“21”項下的色譜條件進行測定，重復進樣5次，測得其峰面積的RSD值為0.11%，表明儀器精密度良好。26  穩(wěn)定性試驗    取清開靈顆粒（批號080114008）按“222”項下的方法（2）制備供試品溶液，分別在制備

12、后0、2、4、6、8、10 h進樣，測定峰面積，分別取清開靈膠囊（批號071202095）與清開靈片（批號080306009）同法制備和測定，黃芩苷峰面積的RSD值分別為0.18%、0.42%、0.39%，表明3種劑型的供試品溶液在10 h內(nèi)測定結(jié)果穩(wěn)定。27  重復性試驗    取清開靈系列樣品，分別按“222”項下的方法（2）平行制備6份供試品溶液，按“21”項下的色譜條件進行測定并計算，結(jié)果見表1，表明本方法重復性良好。表1  重復性試驗結(jié)果（略）28  回收率試驗    （1）清開靈顆粒：取已知含

13、量的供試品約0.15 g 6份，精密稱定，置20 mL容量瓶中，分別精密加入0.1022 mg·mL-1的對照品溶液10 mL；（2）清開靈膠囊：取已知含量的供試品約0.025 g 6份，精密稱定，置20 mL容量瓶中，分別精密加入0.1116 mg·mL-1的對照品溶液10 mL；（3）清開靈片：取已知含量的供試品約0.011 g 6份，精密稱定，置20 mL容量瓶中，分別精密加入0.1116 mg·mL-1的對照品溶液10 mL；再分別加體積分數(shù)70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，取續(xù)濾液按“2.1”項下的色譜條件進行測定并計算，結(jié)果見表2。表

14、2  加樣回收率試驗結(jié)果（略）29  樣品測定    取清開靈系列樣品，按“222”項下的方法（2）制備供試品溶液，按“21”項下的色譜條件進行測定，以外標法計算黃芩苷的含量。結(jié)果表明2種不同溶解方法制備所得樣品的含量測定結(jié)果基本一致。見表3。表3  清開靈系列樣品含量測定結(jié)果（略）3  討 論    國家標準收載的黃芩苷含量測定方法，需要使用對呼吸道粘膜和視力有所損傷的甲醇，不利于實驗室管理和環(huán)境保護。改進后的方法用體積分數(shù)70%乙醇代替50%甲醇制備對照品和供試品溶液，減少了中等毒性試劑甲醇的使用。同時，本法為清開靈系列藥品黃芩苷含量測定方法的統(tǒng)一和簡化提供了可靠的依據(jù)?！尽?#160; 1 張妙媛，姚金成，趙緒元，等.清開靈不同制劑的高效液相指紋特征比較J.時珍國醫(yī)國藥，2007，18（2）：442-443.2 國家藥典委員會. WS3163（X153）99（Z）國家藥品標準新藥轉(zhuǎn)正標準第十六至二十六冊S.北京：人民衛(wèi)生出版社,2006：719-721.3 張捷莉，興東杰，彭博，等.反相高效液相色譜法測定清開靈中黃芩苷