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1、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)格式范文實(shí)驗(yàn)方案一. 【實(shí)驗(yàn)題目】:土壤中細(xì)菌的分離純化實(shí)驗(yàn)二. 【實(shí)驗(yàn)思想】:細(xì)菌是具有很高實(shí)用價(jià)值的一類微生物,世界各國(guó)對(duì)其研究與資 源開發(fā)極為重視.目前,國(guó)內(nèi)有關(guān)細(xì)菌的區(qū)系調(diào)查及資源開發(fā)雖然 有一些報(bào)道,但對(duì)不同作物根際細(xì)菌的研究很少.甘肅天水麥積山 海拔1742m ,屬黃土高原潮濕區(qū),植物生長(zhǎng)土壤區(qū)有機(jī)質(zhì)含量豐富 本次實(shí)驗(yàn)將以該地區(qū)的落葉松、馬尾松、白巖松、野豌豆等作物生長(zhǎng) 地區(qū)的土壤為材料,分離鑒定其中的細(xì)菌,探討不同作物根際土壤 中細(xì)菌分布數(shù)量及種類的差異,并且分析每一種菌種在植物生長(zhǎng)過(guò) 程中所起的作用, 最后以此為依據(jù)來(lái)推斷麥積山大片地區(qū)內(nèi)土壤中微 生物的分布豐富情況和它
2、們對(duì)植物生長(zhǎng)作出的巨大貢獻(xiàn).三. 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹浚?.學(xué)會(huì)培養(yǎng)基最基本的制備方法。2.學(xué)會(huì)最基本的微生物滅菌、接種等基本操作過(guò)程。2.掌握最基本的分離、純化微生物的一系列操作操作。四. 【試驗(yàn)方法】:取天水麥積山不同植物根部的土壤作為土樣,通過(guò)對(duì)其土壤中微 生物的一系列培養(yǎng)、分離、 篩選最終分離出細(xì)菌得菌株,并稀釋平板 菌落計(jì)數(shù)法進(jìn)行數(shù)量測(cè)定四實(shí)驗(yàn)原理:1.菌種:由于各種細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需求不同,在不同地方采樣對(duì) 選取所要的細(xì)菌含量和其它雜菌含量的多少直接有關(guān), 所以選擇微生 物含量有可能豐富的土壤(天水麥積山植物根區(qū))中采樣。2.培養(yǎng)基的選取:為了使所要的細(xì)菌能很好的生長(zhǎng),其它微生物 生長(zhǎng)受到一
3、定的抑制, 要用選擇培養(yǎng)基。 還要把細(xì)菌與其他微生物相 區(qū)別,還要用鑒別培養(yǎng)基。為了達(dá)到既是選擇培養(yǎng)基又是鑒別培養(yǎng)基, 選取牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。3.培養(yǎng)及分離純化:通過(guò)涂布培養(yǎng)法、平板劃線法等方法達(dá)到分 離純化的目的。4.保藏:通過(guò)分離純化得到的菌種,接種與斜面培養(yǎng)基上,到一 定時(shí)間后進(jìn)行傳代培養(yǎng)保藏, 使其不死亡、 減少突變所引起的生物學(xué) 性狀的改變。5.通過(guò)形態(tài)與染色鑒定:由于各種微生物有其特定的菌落形態(tài)特 征和單細(xì)胞形態(tài)特征, 可通過(guò)這些形態(tài)進(jìn)行鑒定。 還由于細(xì)胞壁組成 不同可進(jìn)行鑒別染色法進(jìn)行鑒定, 也可用產(chǎn)生不產(chǎn)生芽孢進(jìn)行芽孢染 色。通過(guò)以上方法可對(duì)所分離純化的菌種進(jìn)行初步的鑒定。6
4、.通過(guò)生理生化反應(yīng)進(jìn)行鑒定:各種微生物在代謝類型上表現(xiàn)了 很大的差異, 如表現(xiàn)在對(duì)對(duì)大分子糖類和蛋白質(zhì)的分解能力, 以及分 解代謝的最終產(chǎn)物的不同, 反映出他們有不同的酶系。 我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室 允許的條件下做了糖類發(fā)酵與氧化、 是否能產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶以及是否 含有細(xì)胞色素氧化酶等生理生化試驗(yàn),進(jìn)行再次鑒定。五【.實(shí)驗(yàn)材料】:1.器材:玻璃燒杯、天平、搪瓷燒杯、三角瓶、量筒、漏斗、試管、培養(yǎng)皿、吸管、培養(yǎng)基分裝器、電爐、接種環(huán)、移液槍、PH試紙(PH5.49)、牛角匙、牛皮紙、棉花、紗繩、高壓蒸汽滅菌鍋等。2.牛肉膏、蛋白胨、NaCl、1mol/LNaCl、1mol/LHCl。六實(shí)驗(yàn)步驟:1.配置牛肉
5、膏蛋白胨培養(yǎng)基:(1).配方及其配量:注:PH7.27.4,每份如此,根據(jù)需要可改變量進(jìn)行配置。(2).稱取藥品:按培養(yǎng)及配方與配量分別稱取藥品, 取少于總量 的水于燒杯中,將各個(gè)培養(yǎng)及成分(瓊脂除外)逐一加入水中待溶。(3)加熱溶解:將玻璃被放在石棉網(wǎng)上(搪瓷燒杯可直接用文 火加熱),用文火加熱并不斷攪拌,促使各藥品快速溶解,然后補(bǔ)充 水分之所需培養(yǎng)基的量。(4) 調(diào)節(jié)PH值:初配好的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液是微酸性的,故需用1mol/LNaOH調(diào)PH至7.2-7.4。 為避免調(diào)解時(shí)過(guò)堿, 應(yīng)緩慢加入NaOHt,即要邊滴加NaOH邊攪勻培養(yǎng)液,然后用PH試紙側(cè)其酸堿度值。檢測(cè)培養(yǎng)基的pH,若pH偏
6、酸,可滴加1mol/L NaOH邊加邊攪拌,并隨時(shí)用pH試紙 檢測(cè),直至達(dá)到所需pH范圍。若偏堿,則用1mol/LHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂之前。 應(yīng)注意pH值不要調(diào)過(guò)頭,以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度.(5).過(guò)濾:液體培養(yǎng)基可用濾紙過(guò)濾,固體培養(yǎng)基可用4層紗 布趁熱過(guò)濾,以利結(jié)果的觀察。但是供一般使用的培養(yǎng)基此步可省 略(6)分裝:披實(shí)驗(yàn)要求,可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶?jī)?nèi)。 分裝時(shí)可用三角漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上面造成污染。分裝量:固體培養(yǎng)基約為試管高度的15,滅菌后制成斜面。分 裝入三角瓶?jī)?nèi)以不超過(guò)其容積內(nèi)一半為宜。 半固體培養(yǎng)基以試管高度 的1/4為宜
7、滅菌后垂直待凝。(7).加棉塞 試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)制作 的棉塞,棉塞的形狀、大小和松緊度要合適,四周緊貼管壁,不留縫 隙,才能起到防止雜菌侵入和有利透氣的作用。要使棉塞總長(zhǎng)約35塞人試管口或瓶口內(nèi),以防棉塞脫 落。有些微生物需要更好的透氣,則可用8層紗布制成通氣塞。有 時(shí)也可用試管帽或塑料蓋代替棉塞。(8)包扎:加塞后,將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙或雙層報(bào)紙, 以防滅菌時(shí)冷凝水沾濕棉塞。若培養(yǎng)基分裝于試管中,則應(yīng)先把試 管扎成捆后, 再于棉塞外包層牛皮紙。 然后用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名 稱、組別、日期。(9)滅菌:將上述培養(yǎng)基于121C濕熱滅菌20min。如因特殊情況 沒能
8、及時(shí)滅菌,則應(yīng)放人冰箱內(nèi)暫時(shí)保存.(10).擺斜面 滅菌后,待培養(yǎng)基冷卻至5060C,然后制斜 面,則需趁熱將試管口端擱在一根長(zhǎng)木條上,并調(diào)整斜度,使斜面長(zhǎng)度 不超過(guò)試管總長(zhǎng)的一半.(11).無(wú)菌檢查:將滅菌的培養(yǎng)基放入37C溫箱中培養(yǎng)24-48h,無(wú)菌生長(zhǎng)時(shí)可以使用,或放置在冰箱或清潔的櫥內(nèi),備用.2.配置無(wú)菌生理鹽水:稱0.85g NaCI至盛有100ml蒸餾水的三角瓶中,塞上棉塞,塞外 包上一層牛皮紙,至加壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)在121C下滅菌20min即為無(wú)菌生理鹽 水。3取樣并制備土壤稀釋液:(1).土壤前處理;取出采集的土樣,去除其中較大的雜質(zhì),將 其攆碎、攆細(xì)待用。(2)制土液:稱出10
9、克于帶有無(wú)菌玻璃珠的250ml錐形瓶中, 用已滅菌的量筒量取90ml無(wú)菌水溶解,振搖約20分鐘,使土樣與水 充分混勻。點(diǎn)燃酒精燈在火焰附近,用無(wú)菌移液槍從中吸取1ml土壤 懸液加入盛有9ml無(wú)菌水的大試管中充分混勻,然后用無(wú)菌移液槍 從此試管中吸取1ml加入另一盛有9ml無(wú)菌水的試管中,混合均勻, 以此類推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同稀釋度 的土壤溶液。4 .涂布接種:將上述9個(gè)平板分別貼上標(biāo)簽10-4、10-5、10-6各三個(gè),然后 用無(wú)菌移液槍分別由10-4、10-5、10-6三管土壤稀釋液中各吸取0.1ml對(duì)號(hào)放入已寫好稀釋度的平板中 ,用無(wú)菌玻璃涂
10、棒在培養(yǎng)基 表面輕輕的涂布均勻,室溫下靜置5到10分鐘,使菌液吸附進(jìn)培養(yǎng) 基。【注意:所有的接種工作必須在無(wú)菌室里面進(jìn)行,在接種之前必 須先進(jìn)行滅菌】5培養(yǎng)。30攝氏度恒溫室中培養(yǎng)3天6 .觀察并進(jìn)一步分離純化。觀察菌落特征,并記錄。再倒兩個(gè)平板。點(diǎn)燃的酒精燈附近,從 稀釋度合適的培養(yǎng)平板上挑取帶有溶磷圈的菌落, 在新制的平板上劃 線分離,30攝氏度恒溫室中培養(yǎng)3天7斜面培養(yǎng) 放置斜面。挑取單個(gè)菌落接種到3個(gè)斜面上培養(yǎng)。 置于2830C恒溫箱中培養(yǎng)7 2h.與此同時(shí),用單菌落進(jìn)行以下鑒 定試驗(yàn)革蘭氏染色1.1涂片 常規(guī)涂片法1.2初染 滴加結(jié)晶紫(以剛好將菌膜覆蓋為宜)于涂片上,染色12min
11、,傾去染色液,細(xì)水沖洗至洗出液為無(wú)色。1.3媒染 用碘液媒染約l min,水洗。1.4脫色用濾紙吸去玻片上的殘水, 將玻片傾斜, 在白色背景下, 用滴管 流加95%的乙醇脫色,直至流出的乙醇無(wú)紫色時(shí),立即水洗,終止脫 色,干燥。1.5復(fù)染在涂片上滴加番紅液復(fù)染約23min,水洗,然后用吸水紙吸干。1.6鏡檢干燥后,用油鏡觀察。判斷兩種菌體染色反應(yīng)性。菌體被染成藍(lán) 紫色的是革蘭氏陽(yáng)性菌(G乍,被染成紅色的為革蘭氏陰性菌(G-)1.7清潔顯微鏡先用擦鏡紙擦去鏡頭上的油,然后再用擦鏡紙沾取少許二甲苯擦 去鏡頭上的殘留油跡,最后用擦鏡紙擦去殘留的二甲苯。芽孢染色(1)將培養(yǎng)的菌,作涂片、干燥、固定。(
12、2)滴加35滴孔雀綠染液于已固定的涂片上。(3)用木夾夾住載玻片在火焰上加熱,使染液冒蒸汽但勿沸騰, 切忌使染液蒸干, 必要時(shí)可添加少許染液。 加熱時(shí)間從染液冒蒸汽時(shí) 開始計(jì)算約45分鐘。這一步也可不加熱,改用飽和的孔雀綠水溶 液(約76)染10分鐘。(4)傾去染液,待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再褪色為止。(5)用番紅水溶液復(fù)染1分鐘,水洗。(6)待干燥后,置油鏡觀察,七.計(jì)數(shù):常用的有平板菌落計(jì)數(shù)法,是根據(jù)每個(gè)活的細(xì)菌能長(zhǎng)出一個(gè)菌落 的原理設(shè)計(jì)的。取一定容量的菌懸液,作一系列的倍比稀釋,然后將 定量的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng), 根據(jù)培養(yǎng)出的菌落數(shù), 可算出培養(yǎng)物中 的活菌數(shù)。此法靈敏度高, 是一種檢
13、測(cè)污染活菌數(shù)的方法,也是目前 國(guó)際上許多國(guó)家所采用的方法。 使用該法應(yīng)注意: 一般選取菌落數(shù) 在30300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),過(guò)多或過(guò)少均不準(zhǔn)確;為了防止 菌落蔓延,影響計(jì)數(shù),可在培養(yǎng)基中加入O0012,3,5一氯化三 苯基四氮唑(TTC); 本法限用于形成菌落的微生物另活菌計(jì)數(shù)法,其原理是每個(gè)活細(xì)菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生 長(zhǎng)條件下可以通過(guò)生長(zhǎng)形成菌落。將待測(cè)樣品經(jīng)一系列10倍稀釋, 然后選擇三個(gè)稀釋度的菌液,藥物分析設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)綜述維生素C及其制劑的含量測(cè)定藥學(xué)(藥物化學(xué)方向)xx級(jí)(1)班周潔紅(0403507136)指導(dǎo)教師:周漩xx年4月藥物分析設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案維生素C及其制劑的含量
14、測(cè)定藥學(xué)(藥物化學(xué)方向)xx級(jí)(1)班第一組:陳 婷(0403507132) 周潔紅(0403507136)指導(dǎo)教師:周漩xx年4月綜述注意:1以實(shí)驗(yàn)組為單位完成2前言對(duì)維生素C的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)做簡(jiǎn)要介紹,正文綜述維生素C的各類含量測(cè)定方法(注意層次結(jié)構(gòu))。3 _符合規(guī)范格式,文獻(xiàn) 數(shù)量要豐富,盡量用近期文獻(xiàn)。設(shè)計(jì)方案注意:1以實(shí)驗(yàn)組為單位完成。2選取原料藥、片劑、注射劑中的一種為分析對(duì)象。3分析方法 應(yīng)選用藥典之外的方法。4方案中應(yīng)對(duì)原理進(jìn)行簡(jiǎn)要說(shuō)明,重點(diǎn)應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備和實(shí) 驗(yàn)方法(步驟)進(jìn)行具體說(shuō)明。實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備包括有:試劑及其制備方法,所需儀器(玻璃儀 器需要寫明規(guī)格、數(shù)量)等實(shí)驗(yàn)步驟要詳細(xì),要列出計(jì)算公式。實(shí)驗(yàn)步驟不要生搬硬套文獻(xiàn)。5其他具體要求參見實(shí)驗(yàn)書規(guī)定。實(shí)驗(yàn)前一周交給帶教老師,實(shí)驗(yàn)當(dāng)天注意帶實(shí)驗(yàn)紙(非實(shí)驗(yàn)報(bào)告 本)記錄原始數(shù)據(jù)。所有材料分類按大組進(jìn)行裝訂(每個(gè)大組三份材料,實(shí)驗(yàn)綜述, 設(shè)計(jì),實(shí)驗(yàn)報(bào)告)。設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)“環(huán)糊精對(duì)高碳醇的分子識(shí)別與表征”方案(宋體四 號(hào)加粗)指導(dǎo)老師:章愛華(宋體小四)班級(jí): 姓名: 學(xué)號(hào):日期:一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄋ误w小四加粗)二、實(shí)驗(yàn)原理(宋體小四加粗)三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑(宋體小四加粗)1實(shí)驗(yàn)儀器(宋體小四)2實(shí)驗(yàn)試劑(宋體小四)四、實(shí)驗(yàn)裝置(宋體小四加粗)(鉛筆
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