臨床醫(yī)學檢驗主管技師考試輔導151

1、最新修正版立克次體及檢驗考點共同特征生物學特性致病性微生物學檢驗一、立克次體一類嚴格寄生在細胞內(nèi)的原核細胞型微生物。一斑疹傷寒群立克次體屬(Rickettsia)斑點熱群柯克斯體屬立克次體東方體屬埃立克體屬L巴通體S立克次體的共同特征： 大多是人畜共患病原體，引起人類發(fā)熱和出血性疾病； 以節(jié)肢動物為傳播媒介或儲存宿主； 大小介于一般細胞與病毒之間，革蘭染色陰性，呈多形性主要為球桿狀; 除極少數(shù)外均專性活細胞內(nèi)寄生； 對多種抗生素敏感； 菌體內(nèi)同時含有 DNA和RNA 以二分裂方式進行繁殖。二、生物學性狀1. 形態(tài)與結構：形似小桿菌，具有程度不同的多形性。無鞭毛或莢膜。G-，不易著色，常用 Gi

2、emsa、Macchiavello 禾口 Gime nez法染色，Giemsa染呈紫紅色，常顯兩端濃染， Maechiavello 染呈紅色，Gime nez法染呈紅色，背景為綠色。Macchiavello 和Gime nez法染色可以鑒別恙蟲病立克次體與其他立克次體。在Macchia- vello 染色中,恙蟲病立克次體呈藍色，其他立克次體呈紅色。Gime nez染色，恙蟲病立克次體呈暗紅色，背景為綠色。與G菌非常相似，脂類含量比細菌多，細胞壁彈性較大。各種立克次體在細胞內(nèi)存在部位有所不同，以此可作初步鑒別。立克次體定位普氏立克次體胞質(zhì)中恙蟲病立克次體胞質(zhì)近核處Q熱立克次體胞質(zhì)的空泡中斑點熱

3、立克次體胞質(zhì)外，核內(nèi)埃立克體宿主細胞膜包被的空泡內(nèi)2. 抗原組成構造： 群特異性抗原 種特異性抗原外斐反應：斑疹傷寒等立克次體與變形桿菌某些X株的菌體抗原（0X9、0X2、OXK抗原）具有共同的耐熱性多糖類屬抗原，用后者代替相應的立克次體抗原進行非特異性凝集反應，作為人類或動物血清中有關抗體的檢查。 用于立克次體病的輔助診斷。3. 培養(yǎng)特性:立克次體（除巴通體外）只能在活的真核細胞內(nèi)生長。常用方法有雞胚卵黃囊培養(yǎng)、細胞培養(yǎng)。接種豚鼠等動物可用于立克次體的初代分離。漢賽巴通體接種新鮮巧克力平板，在35C、5%C0環(huán)境中培養(yǎng)2周左右才長出菌落。三、致病性立克次體病以發(fā)熱、頭痛、皮疹及中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥

4、狀為其特征。發(fā)熱多為 稽留熱，伴劇烈頭痛、肌肉痛；可伴惡心、嘔吐；皮疹可為充血性皮疹或出血性皮疹；嚴 重時可累及中樞神經(jīng)系統(tǒng)，出現(xiàn)神志不清、昏迷等癥狀。立克次體傳播媒介所致疾病立克次體斑疹傷普氏立克次體體虱流行性斑疹傷寒寒群莫氏立克次 體鼠蚤或鼠虱地方性斑疹傷寒恙蟲病立克次體恙螨幼蟲恙蟲病貝納柯克斯體體）蜱或通過接觸、呼吸道、消化道Q熱。以出現(xiàn)肺炎和肝炎為其臨（又稱Q熱立克次彳等途徑床特征漢賽巴通體貓抓傷、咬傷桿菌性血管瘤-桿菌性紫癜和貓 抓病四、微生物學檢驗注：立克次體的傳染性較強，實驗室工作者應首先接種疫苗，必要時進行藥物預防，以防止實驗室感 染的發(fā)生。（一）標本的采集和處理1. 病人血液

5、：在發(fā)病初期或急性期較易檢出病原體。病程第一周內(nèi)并在使用廣譜抗生素前采集510ml，立即在患者床邊接種于動物。血清學檢查標本一般采集 3份血液標本，分別取自病程早期、病后1014天及病后2128天。如患者已使用抗生素治療，需采集第4份標本。2. 活檢或尸檢材料（二）標本直接檢查1. 立克次體的染色法：多用于臟器標本的檢查。 標本印片、固定后用熒光抗體染色或常規(guī)染色鏡檢。PCR技術和核酸探針檢測。2. 核酸檢測：針對特異性抗原基因的序列設計引物，采用（三）立克次體培養(yǎng)法1. 立克次體分離：斑疹傷寒、斑點熱、恙蟲病和Q熱病原體分離多用動物接種。漢賽巴通體用人工培養(yǎng)基。埃立克體用細胞培養(yǎng)。2. 分離

6、株的大量繁殖及保存用雞胚卵黃囊培養(yǎng)或細胞培養(yǎng)。（四）血清學試驗研究立克次體的重要方法，也是立克次體病實驗診斷和鑒定病原體的重要手段 病人雙份血清的試驗結果，有利于立克次體病現(xiàn)癥診斷。1. 間接免疫熒光（IFA）試驗、ELISA間接法是目前檢測標本中特異性抗體的常用方法。單份血清滴度1： 128者有現(xiàn)癥診斷意義，一般滴度在1: 16或以上即為陽性,4倍增長可作為立克次體病的現(xiàn)癥診斷。2. 凝集試驗：（1）特異性凝集試驗：微量血凝試驗（MA ：滴度1： 8以上者為陽性間接血凝試驗（IHA）、乳膠凝集試驗（LA）:滴度在1: 50以上有診斷價值。（2）非特異性凝集試驗：外斐試驗常用于立克次體屬的三個

7、生物型的診斷，缺乏敏感性和特異性。損 病變形桿BSSI®OXjOXk+地方性斑疹飭塞+或+或+4+差蟲擒+腺熱一十+4倍增長才有診斷意義。SSS-2S-1 外 SfiS血清滴度達1： 160即為陽性，病程中雙份或多份血清試驗，至少效價有 斑疹傷寒立克次體（一）生物學特性1. 形態(tài)與結構比細菌小，呈多形性；在感染細胞內(nèi)大多聚集成團分布在胞漿內(nèi)。經(jīng)Gime nez法染色后立克次體呈紅色，背景為綠色。 細胞壁不含磷壁酸，與 G的肽聚糖成分相似。2. 培養(yǎng)特性雞胚成纖維細胞、L929細胞、Vero細胞CC2條件下，繁殖一代需要 68小時。3. 抗原構造群特異性抗原：與黏液層的脂多糖有關。種特

8、異性抗原：與細胞壁外膜的表面蛋白成分有關。外斐反應（Wid-Felix reaction ）:大部分立克次體與普通變形桿菌某些X菌株的耐熱多糖抗原有共同的抗原性，故可用這些 X菌株代替立克次體抗原進行非特異性凝集反應去檢測抗體，可作為立克次體病 的輔助診斷。4. 基因組Madrid E 株染色體為1111523bp組成的環(huán)狀 DNA G+ C含量為29.1mol%。Wilmington 株基因組全長為 1111496bp，為單鏈環(huán)狀 DNA G+ C含量為28.9mol%。5. 抵抗力對熱敏感，耐低溫和干燥，在干虱糞中能保持兩個月左右。對四環(huán)素和氯霉素類抗 菌藥物敏感?；前房纱碳て湓鲋场＃ǘ?/p>

9、致病性地方性斑疹傷寒主要儲存宿主嚙齒類動物，主要傳播媒介鼠蚤或鼠虱自然感染周期為鼠蚤-嚙齒類動物-鼠虱、鼠蚤高熱、頭痛、全身皮疹為主要特征；有的伴有神經(jīng)系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)籌癥狀和實質(zhì)性器官損傷（三）微生物檢驗血S標本、活檢.尸檢材料 廠發(fā)病血清學試驗（抗體IS接橙查恙蟲病立克次體（一）生物學特性1. 形態(tài)與結構多形性，但以球桿狀或短桿狀為常見革蘭染色陰性，吉姆薩染色呈紫紅色；Macchiavello 染色呈藍色；Gime nez染色呈暗紅色；背景為綠色分布在細胞質(zhì)內(nèi)，密集于細胞核旁2. 培養(yǎng)特性專性細胞內(nèi)寄生動物接種、雞胚接種、細胞培養(yǎng)3. 抗原成分耐熱性多糖抗原、特異性抗原與變形桿菌OX株具有

10、共同抗原成分4. 基因組Boryong株：2007年，線性 DNA全基因組長 2127051bp，基因組 G+ C含量為30.5mol%。Ikeda株：2008年，環(huán)狀 DNA全基因組長 2008987bp，基因組 G+ C含量為30%（二）致病性恙蟲病疫區(qū)主要分布在東亞、南亞、東南亞太平洋島嶼、日本和我國的東南與西南地區(qū)。38天出現(xiàn)）；嚴重者致病因素：菌體死后所釋放的毒素樣物質(zhì)?；颊呖杀憩F(xiàn)為高熱 （3841 C），寒戰(zhàn)、頭痛、肌肉痛；皮疹（一般在發(fā)病后常出現(xiàn)并發(fā)癥，包括肺炎、肝炎、心臟的病變、腎功能損害、腦膜炎和腦炎等。（三）微生物學檢驗患者采集血液標本、活檢或尸檢材料作為檢測標本。1. 直

11、接檢測ELISA間接法是檢測標本的特異性抗原或抗體的最常用方法。DNA水 平。1）抗原檢測：2） PCR可以檢測出20ng恙蟲病立克次體2. 分離培養(yǎng)：接種小鼠分離病原。ELISA、補體結合試驗等進行抗體檢測。3. 抗體檢測：外斐反應、間接免疫熒光試驗、貝納柯克斯體（一）生物學特性1. 形態(tài)與結構在細胞空泡中繁殖Giemsa染色呈紫紅色個體較小，多為短桿狀或球桿狀，常排列成對，G，但著色不顯；Gime nez法染色呈紅色；有莢膜，呈絨毛狀；有芽胞2. 培養(yǎng)特點1012天雞胚是培養(yǎng)大量立克次體極好宿主，一般培養(yǎng)3. 抗原成分顆粒性抗原，表現(xiàn)為兩相4. 基因組DNA5株貝納柯克斯體被全基因組測序，

12、均為環(huán)狀5. 抵抗力抵抗力強，7090C加熱3060min尚難殺死，一般消毒劑殺滅該病原體較為困難 對乙醇、乙醚、三氯甲烷、氯霉素、四環(huán)素類敏感（二）致病性立克次體中唯一可不借助于媒介節(jié)肢動物通過接觸，氣溶膠經(jīng)呼吸道、消傳染源：受感染的牛、羊等 對人的感染力特別強，是化道等途徑感染人及動物致病物質(zhì)：脂多糖發(fā)熱、頭痛及肌肉痛外，以出現(xiàn)肺炎和肝炎為其主要的臨床特征（三）微生物學檢驗«ISi鑒定血諳免S學血讀學武驗（抗體 * 補體結合 徽fi鬣ft ELISA 間It免疫熒光血液標*, S檢.尸檢財料a接檢Bi* I免寢黃光楡測核酶松測埃立克體（一）生物學特性1. 形態(tài)與結構G，小球菌、呈

13、多形性Roma no wsky染色呈藍色和紫色電鏡下受侵細胞胞質(zhì)內(nèi)可見包涵體2. 基因組目前有5株埃立克體屬菌株被全基因組測序。3. 抗原成分7種主要蛋白抗原，其中 22kD為熱敏性，其他均為熱穩(wěn)定性。（二）致病性埃立克體屬腺熱埃立克體人腺熱埃立克體病查菲埃立克體人單核細胞埃立克體病 人粒細胞埃立克體人粒細胞埃立克體?。ㄈ┪⑸飳W檢查廠 直接檢查免疫熒光檢測工測免疫印跡 ELISA 間接免疫熒光漢賽巴通體（一）生物學特性1. 形態(tài)與結構彎曲的桿狀小體，常呈多形性G, Giemsa染色呈紫藍色，鍍銀染色呈黃色初分離的漢賽巴通體有菌毛，初代后可消失2. 培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求苛刻的需氧桿菌血或巧克力瓊脂、活性炭-酵母浸液瓊脂、心腦浸液等3537 C 5% C0 2環(huán)境下培養(yǎng)（二）致病性巴通體屬內(nèi)對人致病的一個重要病原微生物引起人類桿菌性血管瘤-桿菌性紫癜和貓爪病（三）微生物學檢查血液標本.活檢材料直接檢匿沖比鼻逾核醱檢M Starry染色能査見多形性病原»血清學試驗I驗胞列 反細ft瞬 化其儀刪 做分脂E