醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)習(xí)指導(dǎo)

1、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)實(shí)習(xí)指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵蟆灸康摹?1掌握病原生物學(xué)的基本實(shí)驗(yàn)方法和操作技術(shù)。 2通過實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的討論和實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，培養(yǎng)學(xué)生科學(xué)思維方法，提高獨(dú)立工作能力。 【要求】 1每次實(shí)習(xí)前必須做好預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理、方法及操作中的注意事?xiàng)等，避免和減少發(fā)生錯(cuò)誤。 2實(shí)驗(yàn)過程中必須持嚴(yán)肅認(rèn)真的態(tài)度。 3對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須進(jìn)行仔細(xì)地觀察和認(rèn)真地記錄，然后進(jìn)行科學(xué)分析，得出恰當(dāng)結(jié)論。 4獨(dú)立認(rèn)真完成實(shí)驗(yàn)報(bào)告，書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告要字跡清楚，畫圖應(yīng)根據(jù)實(shí)際標(biāo)本的畫。 5切實(shí)遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)則。 實(shí)驗(yàn)室規(guī)則1上實(shí)驗(yàn)課時(shí)，穿好白衣（實(shí)驗(yàn)防護(hù)衣），隨身只帶必要的實(shí)習(xí)指導(dǎo)、筆記本和文具，不得將食品等無關(guān)東西帶入實(shí)驗(yàn)室。

2、2實(shí)驗(yàn)室要保持肅靜和秩序，不得高聲喧嘩和隨處走動(dòng)。 3實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止飲食和吸煙，不得用嘴舔濕鉛筆和標(biāo)簽等。 4如遇有盛檢驗(yàn)材料的器皿破損或污染其它物品時(shí)，應(yīng)立即向老師匯報(bào)，不得私自作出處理。5實(shí)驗(yàn)過程中用過的有菌器材或培養(yǎng)物等，應(yīng)放于指定的地點(diǎn)，不得隨意拋置。 6注意節(jié)約實(shí)驗(yàn)試劑，愛護(hù)實(shí)驗(yàn)器材。損壞器材與標(biāo)本片時(shí)，應(yīng)立即報(bào)告指導(dǎo)教師。 7易燃物品（乙醇、二甲苯等）不準(zhǔn)接近火源。一旦起火，應(yīng)迅速用沾水的布類和沙土覆蓋撲火。 8進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室不要亂動(dòng)實(shí)驗(yàn)室的儀器，不要亂開開關(guān)與紫外燈。9、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將實(shí)驗(yàn)臺(tái)整理好，廢紙扔入紙簍，沾有菌的廢棄物扔入滅菌袋內(nèi)。10、值日同學(xué)打掃室內(nèi)衛(wèi)生，并檢查水、電、煤氣

3、等開關(guān)是否關(guān)好，防止發(fā)生安全事故。 9做過細(xì)菌學(xué)的實(shí)驗(yàn)后在離開實(shí)驗(yàn)室之前，請(qǐng)到門口的消毒水中清洗雙手，完畢用自來水沖洗雙手。脫下白大衣，反裝后離去。11、未經(jīng)許可，不得將實(shí)驗(yàn)室內(nèi)任何物品（特別是菌種）帶出室外。顯微鏡的使用方法 【目的】 要求熟練掌握顯微鏡的使用方法，尤其是油浸鏡的使用方法。 【要求】 1使用前必須對(duì)所用顯微鏡進(jìn)行詳細(xì)檢查，如發(fā)現(xiàn)問題應(yīng)及時(shí)向老師報(bào)告。 2調(diào)光：檢查未染色標(biāo)本時(shí)，以弱光線為宜，此時(shí)可將集光器下降或縮小光柵，檢查染色標(biāo)本時(shí)，以光線強(qiáng)為宜，此時(shí)應(yīng)適當(dāng)升高集光器或?qū)⒐鈻糯蜷_。 3標(biāo)本觀察：將標(biāo)本置于載物臺(tái)上，先用低倍鏡觀察。用粗螺旋調(diào)至看出物象后，再調(diào)節(jié)微螺旋，使物像

4、更加清晰。在換高倍鏡觀察前，鑒于高倍鏡視野范圍比低倍鏡小，故須將被觀察內(nèi)容移至視野中央后再換之。有時(shí)顯微鏡本身存在偏心現(xiàn)象，此時(shí)要記住其偏心的方向和距離。 用油浸鏡觀察前，應(yīng)先轉(zhuǎn)開低倍鏡或高倍鏡鏡頭，在玻片上加一滴鏡油，再轉(zhuǎn)換油鏡頭。眼從側(cè)方看，調(diào)節(jié)粗螺旋，使鏡頭浸入鏡油中至接近玻片時(shí)為止（注意勿壓碎玻片）。眼看目鏡，調(diào)節(jié)粗螺旋提升鏡筒，至看到物象，再調(diào)節(jié)細(xì)螺旋，至可清楚看到標(biāo)本為止。觀察完畢，應(yīng)先提高鏡筒，并將高倍鏡（或油浸鏡）頭扭向一側(cè)，再取下玻片。 寄生蟲標(biāo)本絕大多數(shù)為封片標(biāo)本，有一定厚度，因此在觀察時(shí)應(yīng)不斷調(diào)節(jié)細(xì)螺旋。 用油浸鏡觀察微生物標(biāo)本時(shí)，應(yīng)將顯微鏡亮度開關(guān)調(diào)至最亮，集光器升至最

5、高，光柵打至最大。 4注意事項(xiàng)：微螺旋是顯微鏡最精細(xì)、最脆弱的機(jī)械部分，每旋轉(zhuǎn)一周使鏡筒上升或下降，只能做往返回轉(zhuǎn)，不要向單一方向轉(zhuǎn)動(dòng)數(shù)周。觀察滴片標(biāo)本時(shí)，載物臺(tái)應(yīng)放平，注意勿將物鏡鏡頭接觸糞液。觀察封片標(biāo)本時(shí)，勿使鏡頭與蓋玻片接觸，以免壓壞標(biāo)本或損傷鏡頭。觀察血涂片標(biāo)本時(shí)，必須按一定順序，逐個(gè)視野檢查，以免遺漏。 油鏡頭使用完畢，應(yīng)用擦鏡紙蘸少許二甲苯擦試，再用干燥鏡紙擦去殘存之二甲苯。最后將物鏡頭轉(zhuǎn)成"人"字形，降落鏡筒或上抬載物臺(tái)，稍微下降集光器，對(duì)號(hào)送入鏡盒內(nèi)。實(shí)驗(yàn)1不染色標(biāo)本的觀察 應(yīng)用不染色標(biāo)本可直接觀察活細(xì)菌的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)，且能避免由于某些染色操作而引起細(xì)菌變形

6、，常用的不染色標(biāo)本的制備方法有懸滴法和壓滴法。 【材料】 枯草桿菌612h肉湯培養(yǎng)物 葡萄球菌612h肉湯培養(yǎng)物 凡士林 載玻片、凹玻片、蓋玻片、接種環(huán)、煤氣燈 實(shí)習(xí)一、細(xì)菌形態(tài)學(xué)檢查法材料 1. 某種細(xì)菌的純培養(yǎng)物。 2. 載玻片、生理鹽水（N.S）、酒精燈、接種環(huán)。一、不染色標(biāo)本的檢查【方法】 (一)懸滴法取清潔的凹玻片和蓋玻片各一張，涂少許凡士林于凹玻片窩的周圍；取一接種環(huán)菌肉湯培養(yǎng)物滴于蓋玻片之中央，將蓋玻片迅速翻轉(zhuǎn)，復(fù)蓋于凹玻片窩上(圖1-1)。輕壓蓋片，使其固定并密封，防止菌液變干，便于長(zhǎng)時(shí)間觀察。同法再以葡萄球菌肉湯培養(yǎng)物做一懸滴片。鏡檢方法：將集光器稍降下，使視野內(nèi)光線變暗。用

7、低倍鏡找出懸滴的邊緣，然后換用高倍鏡或油鏡觀察滴內(nèi)細(xì)菌的形態(tài)和運(yùn)動(dòng)?？莶輻U菌有鞭毛能運(yùn)動(dòng)。它們可向不同方向運(yùn)動(dòng)，速度較快，相互間的位移很大。葡萄球菌沒有鞭毛不能做固有運(yùn)動(dòng)，但由于受水分子的撞擊而呈分子運(yùn)動(dòng)(布朗氏運(yùn)動(dòng))，只在一定范圍內(nèi)作往復(fù)顫動(dòng)，相互間位移不大。按細(xì)菌運(yùn)動(dòng)性的不同，可以推知細(xì)菌有無鞭毛，這是鑒別菌種的要點(diǎn)之一。(二)壓滴法分別取菌肉湯培養(yǎng)物，放于載物片中央。小心地把蓋玻片放于液滴之上，勿使中間產(chǎn)生氣泡，中間液層越薄越好。鏡檢方法與懸滴法相同。本法較懸滴法簡(jiǎn)單，但標(biāo)本容易干涸，不能長(zhǎng)時(shí)間觀察(注意：勿將菌液壓溢到玻片邊緣之外)二、染色標(biāo)本的檢查方法 1. 涂片 1）取一接種環(huán)生理

8、鹽水，置于玻片上。 2）用滅菌接種環(huán)取很少量菌苔。 3）將菌苔于水珠旁稍微研開后，在與水珠一起研末涂勻，制成1cm左右大小的菌膜。 2. 干燥： 1) 一般放在空氣中自然干燥。如急用可于火焰較遠(yuǎn)處烘干，但要避免烤焦。 3. 固定通常用火焰固定，固定時(shí)手持玻片一端，將涂片在火焰最熱部分通過3次，以手感燙而能忍受為宜。每次約23秒鐘，待冷卻方可染色4、革蘭（Gram）染色法革蘭染色是細(xì)菌學(xué)中使用最廣泛的一種染色方法，籍此染色法，可將所有細(xì)菌區(qū)分為兩大類。【材料】金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和大腸桿菌(Escherichia coli，Ecoli)24h斜面培養(yǎng)物、革蘭染色液、生理鹽水、載玻片、接種環(huán)等?！痉椒ā?、初染：玻片菌膜上滴加結(jié)晶紫染液12滴，染色1分鐘，用細(xì)流水沖冼剩留染液，甩去片上積水。2、媒染：加盧戈碘液處理1分鐘后細(xì)流水沖洗，甩去積水。3、脫色：加95酒精23滴，輕輕搖動(dòng)玻片，使脫色均勻，一般處理約30秒左右，細(xì)流水沖洗，甩去積水。4、復(fù)染：加稀釋石炭酸復(fù)紅液12滴，染30秒鐘，細(xì)流水沖洗，待干或用濾紙吸干，油鏡觀察?！窘Y(jié)果】葡萄球菌染成紫色，為革蘭陽性，以G+表示；大腸桿菌染成紅色，稱革蘭陰性，以G-表示?！咀⒁馐?/p>