石蠟切片的制作

1、石蠟切片的制作1、取材根據(jù)實驗要求從標本中切取適當位置和大小的組織塊，大小以 1.5cmx 1.5cmx( 0.2-0.3 ) cm為宜。2、固定標本從活體取下后應及時固定，根據(jù)組織塊大小確定固定時 間。固定液為 10%中性福爾馬林，一般固定時間為 24 小時內。其 作用主要有一、能防止細菌的腐蝕和組織的自溶；二、保存細胞固有的物質， 能凝固或沉淀細胞內或組織液， 糖元等；三、使組織硬化，便于切塊。3、脫水 把含于組織內或細胞內的水份用脫水劑把其置換出來的過程稱 組織脫水。 現(xiàn)在大多數(shù)用的是酒精來脫水， 但是酒精容易使組織硬化 和變脆。因此在使用時，通常是從低濃度至高濃度，濃度系列一般是 70

2、%、80%、 90%、 95%和 100%。水與二甲苯不互溶，因此水未脫完全 進入二甲苯會出現(xiàn)白霧狀現(xiàn)象。操作步驟如下： 75%乙醇：1h。 85%乙醇： 1h。 95%乙 醇I: 1h。 95%乙醇1h。 無水乙醇I: 1.5h。 無水乙醇H: 1.5h。4、透明組織經過一系列酒精的處理后， 雖然組織里所含有的水分已基本 上被脫去， 但是組織脫水時機里可殘留著許多酒精， 酒精不能溶解石 蠟，必須尋找一種既能與酒精混合，又能溶解石蠟的試劑，方能使石 蠟浸入到組織中去， 這類物質被稱為透明劑。 二甲苯是目前最常用的 透明劑。二甲苯對組織的硬化程度特強，如果在其放置過長，就會引 起組織的硬脆，難切

3、片。操作步驟如下: 二甲苯I: 20mi n。 二甲苯H： 30min。5、浸蠟組織經過透明劑的完全透明后，被放于 65 c 左右熔化的石蠟中 浸漬的過程稱為浸蠟。操作步驟如下:石蠟I: 30min石蠟H: 1h。石蠟皿：1h。6、 包埋包埋前必須確定包埋機中的石蠟已融化，并打開冷凍臺。 將待包埋的標本至于包埋機兩側的槽內 （避免標本石蠟凝固） ， 仔細看清號碼，從最前面的號碼開始包。 將包埋模具放于包埋機出蠟口。 用鑷子將包埋盒從脫水籃中拿出 用手將包埋盒蓋子打開。 更換鑷子。 將組織放入包埋模、壓平。（仔細觀察包埋面，如有線結、鋼 針等必須去除）。 將包埋盒放于包埋模上，注蠟，不能有氣泡。

4、 將包好的包埋模放于冷臺上。 用此鑷子將下一個包埋盒從脫水籃中拿出。 嚴禁將包埋盒拿出后放在臺子上，包另一個組織。? 待冷臺上的蠟塊冷卻后，除去模具，修掉邊緣多余的蠟，按順 序放在冰盒上置于-20 C冰箱待切。7、切片 先將蠟塊在一20 C凍20min左右。 提前開啟攤片機并設定溫度為45C左右（比石蠟熔點低10C -12 C為宜）。 將石蠟塊固定在標本架上。 選擇粗調修片至標本的最大面。（可用舊刀口修） 選擇細調及切片厚度，切片。（換成新刀口切） 切片時先切下幾刀，用左手的毛筆托起，然后右手邊轉左手邊 輕拉，有時也可輕吹切片使其展平。 用鑷子夾起切片攤于水面，展平后撈片。 寫上編號，豎著玻片

5、將水瀝干。8、HE 染色操作步驟1) 烤片石蠟切片染色前置65C烤片45min-1h。(使蠟溶解并能讓組織與 玻片貼的更牢。)2) 脫蠟 二甲苯I: 10mi n。 二甲苯10mi n。3) 返水 無水乙醇I: 1mi n。 無水乙醇1min。 95%乙 醇I: 1mi n。 95%乙醇 H: 1min。 85%乙醇: 1min。 75%乙醇: 1min。 自然水: 2min。4) 染色 蘇木素: 1-5min 。 水洗: 1-8min 。 ( 返藍) 伊紅； 20S-5min。 水洗: 30S。5) 脫水 由于伊紅是醇溶的，在低濃度酒精中易褪色，故不宜太長時間。 75%乙醇: 20S。 85%乙醇: 30S。 95%乙 醇I: 1mi n。 95%乙醇 H: 1min。 無水乙醇I: 1mi n。 無水乙