血脂各個項(xiàng)目的不同測定方法

1、血清脂類測定血漿中的脂類包括膽固醇、膽固醇脂、甘油三酯、磷脂和非酯化脂肪酸等。目前，對有關(guān)脂類代謝疾患的診斷和治療過程，均必須檢測血漿（清）中的脂類，通過其 含量的變化，對臨床疾患提供協(xié)助診斷的依據(jù)。有關(guān)醫(yī)學(xué)科研工作，脂類的定量檢測也是 一項(xiàng)必備的研究項(xiàng)目。1膽固醇測定 血漿中膽固醇及其酯的含量檢測，從方法學(xué)上可分為兩大類：一類是化學(xué)法包括抽提法和 直接測定法，這類方法目前仍在沿用；另一類是酶法測定，方法敏感特異快速，并能自動 化分析，已常規(guī)應(yīng)用?；瘜W(xué)測定法種類多，由于顯色反應(yīng)的特異性不同，其結(jié)果有一定的 差異。目前公認(rèn)的參考方法是 Abell-Kendall（L-B 反應(yīng)）法。另外，三氯化鐵

2、 - 硫酸反應(yīng)法（Zak法）具有顯色穩(wěn)定法、操作簡便、靈敏度約 5倍于L-B反應(yīng)法，膽固醇酯與游離膽 固醇顯色程度比較接近等優(yōu)點(diǎn)，缺點(diǎn)是特異性差，干擾因素比 L-B 法多，如冰醋酸中含有 的乙醛酸，血清樣品中的血紅蛋白，膽紅素以及硫酸的質(zhì)量等因素均可影響Zak方法的準(zhǔn)確性， Zak 法更適合于科研使用。酶法測定血清膽固醇的方法已被廣泛采用，國產(chǎn)試劑已 能滿足臨床的需要。膽固醇測定用的標(biāo)準(zhǔn)品，按美國國家標(biāo)準(zhǔn)局（NBS出品純度達(dá)是國際公認(rèn)的參考物，國內(nèi)李健齋等已純化制成符合這一要求的膽固醇純品，已供臨床檢測 血清膽固醇使用。2甘油三酯測定血漿甘油三酯的測定， 目前多以化學(xué)法和酶法定量。 化學(xué)法測定

3、甘油三酯是以脂蛋白變性， 水解成甘油，并以甘油為計(jì)算依據(jù)。酶法是以特異酶水解甘油三酯，除去脂肪酸，再測定 甘油，方法特異，準(zhǔn)確而快速，臨床廣為應(yīng)用。目前甘油三酯測定的方法主要以定量甘油 為依據(jù)，然而血清樣品中存在有游離甘油，如何從反應(yīng)過程中的總甘油中減去游離甘油， 多年來一直在研究討論這一問題。若不減去，其測定值將會高于血清樣品中的真值，如果 要減去，就必須先測出血清樣品中的游離甘油，甘油三酯的測定方法將增加一個繁雜的步 驟，實(shí)際工作中難以做到。有報(bào)道血清樣品中的游離甘油實(shí)際量是L,相當(dāng)于甘油三酯的L,為此建議，實(shí)測的甘油三酯量減去一個校正系數(shù)即： 甘油三酯（mmol/L） = X 總甘油（m

4、mol/L） （mmol/L）。這一校正系數(shù)也僅適用于健康人，對臨床病人并不一定適用。據(jù)報(bào)道，血清樣品的游離甘 油一直是個未知數(shù)，無法測準(zhǔn)。為此，目前臨床測定血清甘油三酯時(shí)，基本上未考慮游離 甘油，因?yàn)槠浜亢苌伲瑫呵液雎圆挥?。甘油三酯測定的參考物，推薦三油酸甘油酯和三 軟脂酸甘油酯混合物（ 2：1，W/W） ，此參考物適用于化學(xué)法。在酶法測定中，仍以高純 度的三油酸甘油酯為參考物。3磷脂測定 血清磷脂包括卵磷脂、溶血卵磷脂、神經(jīng)磷脂、腦磷脂和其他少量磷脂。如需要分別檢測各種磷脂，可以通過薄層層析法、柱層析法和高壓液相色譜法。目前，臨床僅測定血清磷脂總量。血清磷脂總量的測定方法有化學(xué)方法和酶法

5、兩大類?；瘜W(xué)法是以磷脂中的磷為定 量依據(jù)，因?yàn)槊苛字肿又卸己幸粋€磷酸根，故將磷脂的磷稱為脂性磷。由于血清中磷 脂大部分為卵磷脂，其分子量中磷約占 4%，故將脂性磷換算成磷脂的系數(shù)，一般為 25。 由于化學(xué)法均需要抽提， 再測抽提液中的磷脂的磷， 血清中的磷酸鹽不可能混入抽提液中， 因此血清中的磷酸鹽對磷脂測定的干擾很少。酶法是利用磷脂酶進(jìn)行定量測定。生物體中 磷脂酶包括磷脂酶 A、A C和D四種。磷脂酶D特異性差，均可水解卵磷脂、溶血卵磷 脂和神經(jīng)磷脂，三者約占血清總磷脂的 95%，臨床多用含磷脂酶 D 的試劑進(jìn)行磷脂的定量 測定。4游離脂肪酸測定游離脂肪酸屬于未酯化的一類脂肪酸，故又稱為

6、非酯化脂肪酸，其量很少，采用方法必須 是靈敏的方法，還需要避免脂肪水解產(chǎn)生脂肪酸的干擾。測定方法有：滴定法需要微量 滴定裝置，因?yàn)橐ㄟ^肉眼觀察顏色，難免會有主觀因素的影響，所以難以測定準(zhǔn)確，很 難用于常規(guī)；光度法，以銅皂法常用；酶法，主要采用特異性不強(qiáng)的脂肪酶D進(jìn)行檢測，方法特異，快速準(zhǔn)確，已常規(guī)應(yīng)用于臨床。FC占30% CE中的G的-OH在LCAT作用 軟脂酸（ 10%）、亞麻油酸（ 6%）、花生 血清中膽固醇在 LDL中最多，其次是HDL第一節(jié) 膽固醇測定 血清中膽固醇包括CE和 FC,酯型的CE占70% 下，可分別結(jié)合亞油酸（ 43%）、油酸（ 24%）、 四烯酸（ 6%）、硬脂酸（

7、3%）等脂肪酸結(jié)合而成。 和VLDL CM最少。血清總膽固醇測定方法分為化學(xué)法和酶法兩大類。1化學(xué)法 化學(xué)法一般包括：抽提；皂化；毛地黃皂苷沉淀純化；顯色比色四個階段。代表 性的方法有Sperry-Webb 法,通過步驟操作過程。常規(guī)操作中多采用省去了、。 或者用省去、步驟的Zak-Heniy法及省去步驟的Abell-Kendall法，現(xiàn)將此法作為 標(biāo)準(zhǔn)參考方法予以引用。2酵法測定CE在膽固醇酯酶（cholesterol esterase ）作用下水解成FC和NFFA TC再經(jīng)膽固醇氧化 酶（cholesterol oxidase,COD）氧化成4膽甾烯酮和HQ。再分別定量 Q的消耗或者HbQ

8、 的生成量，或者膽甾烯酮生成量，以作為TC的定量依據(jù)。該法是目前常規(guī)的應(yīng)用方法， 快速準(zhǔn)確，標(biāo)本用量少，便于自動生化分析儀作批量測定。、 Abell-Kendall 改良法 1原理 血清加入醇溶性氫氧化鉀，使膽固醇從脂蛋白中分離出來，同時(shí)使膽固醇酯加水分解成游 離膽固醇，加石油醚振搖、抽提，使膽固醇移入石油醚層，分離并取一定量的石油醚層， 蒸發(fā)至干，再進(jìn)行Liebermann-Burchard 顯色反應(yīng)，620nm比色定量。該法可用于基本功 訓(xùn)練及組織細(xì)胞膽固醇的提取定量。2試劑組成代號種類濃度組? 成貯存2 8C有效時(shí)間R1乙醇優(yōu)質(zhì)純R2石油醚沸點(diǎn)68C，特級純R3水醋酸分析純R4無水醋酸膽

9、固醇分析用，不含 HcIR5濃硫酸分析純R6koK33%(W/W)KoH10g+2Ho20mlR7乙醇性koh液R194ml+R66ml臨用前配制R8Liebermann配制后BurchardR420體積+R51 體積 +R310體積1h試劑*內(nèi)用完R9膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液L膽固醇標(biāo)準(zhǔn)品200mg+R71 100ml0* :在三角燒瓶內(nèi)，加入無水醋酸，于冰水中冷至10°C以下，再慢慢加入濃硫酸，混合,靜置10mi n，又加冰醋酸混勻，備用。3操作圖 15-1 血清膽固醇（ Abell 法）測定操作圖4計(jì)算 標(biāo)準(zhǔn)總膽固醇濃度=&a/EstX （mmol/L）、酶法（ceh cod-PO

10、法）首先將血清中膽固醇酯在膽固醇酯酶（ceh水解為游離膽固醇和脂肪酸，膽固醇在膽固 醇氧化酶（cod作用下，生成4 -膽甾烯酮和HbQ,再HbQ經(jīng)過氧化物酶（pod作用在4-氨基安替比林（4-AA-P）及N-乙基-N-（ 3-磺基醋酸）-3甲氧基苯胺（ N-ethyl-N-（3-sulfopropyl）-manisidine,ESPAS ）參與下，生成紅色醌亞胺色素。HbQ+ES PAS+4氨基安替比林7紅色醌亞胺色素一）手工測定法 1試劑組成代號 種類Na2HPo4Na2H2Po4 膽酸鈉 4-氨基安替比林濃度50mmol/L50mmol/L 3mmol/LL組成貯28C有效時(shí)間R1* EspAsCarbowax-6000CEHCODpOD14mmol/LL33U/L117U/L6700U/L24hR2 標(biāo)準(zhǔn)液用異丙醇溶解膽固醇*混勻，調(diào)pH至± （25 C），或購買試劑盒。酶以活性單位表示。2操作 按圖 15-2 操作。3計(jì)算 標(biāo)準(zhǔn)總膽固醇濃度=&a/EstX （mmol/L）二）自動化分析儀測定 以 CL-7200 型全自動生化分析儀檢測為例。1試劑組成A液：CEH pod抗壞血酸氧化酶等。B液：COD 4-氨基安替比林等。圖 15-2 血清膽固醇測定（酶法）操作圖2上機(jī)參數(shù)項(xiàng) ? 目參? 數(shù)方 ? 法終點(diǎn)法波 ? 長雙波長（