尿中ALA測定實驗報告.

1、08 檢疫HapyWu尿中 氨基 酮戊酸 ( ALA) 的測定一、實驗?zāi)康膶W(xué)會用乙酸乙酯萃取對二氨基苯甲醛比色法測定尿中 氨基 酮戊酸 (ALA) 的含量，從而了解鉛吸收和鉛中毒的診斷。二、實驗原理在 PH 為 4.6 及溫度為 100的條件下， ALA 與乙酰乙酸乙酶縮合生成吡咯化合物。此化合物用乙酸乙酯提取，并與顯示劑（對二甲氨基苯甲醛）作用生成紅色化合物，根據(jù)顏色深淺進行比色定量。三、實驗步驟1. 標準曲線的繪制取具賽比色管 10ml6 支，按下表配置標準色列：試劑012345ALA標準應(yīng)用液（ ml） 0.00.10.30.50.71.0水（ ml）2.01.91.71.51.31.0

2、ALA含量（ ug)0135710A. 各管中加入 2ml 乙酸緩沖液， 0.4ml乙酰乙酸乙酯，混勻，于沸水中加熱 10 分鐘，取出冷至室溫。B. 各管加入 4ml 乙酸乙酯，加塞振搖1 分鐘，離心 5 分鐘、取出靜置分層。C.各取乙酸乙酯提取液2ml 于另外 6 支管中，各管加入2ml 顯色劑，加塞振搖，靜置10 分鐘。D.用分光光度計（波長554），以零管作參比，測其吸光度。根據(jù)ALA濃度與吸光度的關(guān)系繪制標準曲線。2. 尿樣測定A. 預(yù)先測定尿液比重，測得尿樣比重為1.010 。B. 分別取 1ml 尿樣于兩支上述一樣的管內(nèi)，各加入水 1ml，乙酸緩沖液 2ml, 混勻。其一為樣品管，

3、另一為空白管。向樣品管中家兔 0.4ml乙酰乙酸乙酯，空白管中加入0.4 乙酸緩沖液，充分混勻，同時置沸水浴中加熱 10 分鐘，取出冷至室溫。C.按標曲繪制的 BD進行，以乙酸乙酯作參比，進行比色定量。四實驗結(jié)果與計算1. 標準曲線繪制管號012345ALA含量0135710（ ug)吸光度 A00.0540.1520.2420.2880.4792. 尿樣結(jié)果 空白管為 0.022 ，樣品管為 0.110 。帶入標準曲線查得樣品管中ALA含量為 1.83ug 。根據(jù)尿樣比重為1.010 ，在正常范圍內(nèi)，故尿中 ALA（mg/L)=樣品管中 ALA含量（ ug)=1.83mg/L五實驗結(jié)論根據(jù)鉛實驗室檢測指標值，尿中氨基 酮戊酸 (ALA)的診斷值為 8mg/L，因此本實驗所用的尿樣樣品未超標。六實驗討論1.進行比色定量時，為什么樣品測定時用乙酸乙酯作參比？原因是標準曲線用的是應(yīng)用液，可以用零管參比， 而測定管中的最大容積為乙酸乙酯， 為了最大限度的消除背景吸收等帶來的誤差，因此選擇乙酸乙酯作為參比。2.若鳥樣比重不在正常的范圍內(nèi)，測的結(jié)果應(yīng)如何計算此時應(yīng)先進行校正，采用公式：尿中 ALA（mmol/L）