乳腺癌相關(guān)微小RNA的研究進(jìn)展

1、乳腺癌相關(guān)微小RNA的研究進(jìn)展(1)    【關(guān)鍵詞】  微小RNA(microRNA，miRNA)；乳腺癌；腫瘤乳腺癌發(fā)生機(jī)制和癌細(xì)胞耐藥機(jī)制至今仍尚未完全闡明；近年來(lái)科研工作者對(duì)乳腺癌相關(guān)組織或細(xì)胞中微小RNA（micro RNA,miRNA）進(jìn)行了研究，為闡明乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，并對(duì)其治療提供了嶄新的思路。1  miRNA簡(jiǎn)介    miRNA是一類(lèi)長(zhǎng)度約為1825個(gè)核苷酸(nucleotide，nt)(平均22 nt)的非編碼小RNA分子，通過(guò)與mRNA的3端非翻譯區(qū)(3untranslate

2、d region，3UTR)結(jié)合而介導(dǎo)翻譯水平的調(diào)控。miRNA基因在RNA聚合酶的指導(dǎo)下，轉(zhuǎn)錄成命名為primiRNA的初級(jí)轉(zhuǎn)錄物。然后primiRNA進(jìn)入由Drosha酶和輔助因子DGCR8(Disgorge syndrome critical region gene 8)Pasha所構(gòu)成的復(fù)合體中，在細(xì)胞核中被剪切成長(zhǎng)約6070 nt）、具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的miRNA前體(precursor microRNA，premiRNA)。在核膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（exportin）5(Exp5)的協(xié)助下，premicroRNA從核內(nèi)被轉(zhuǎn)運(yùn)到胞質(zhì)中，經(jīng)Dicer酶的作用被進(jìn)一步剪切成2125 nt的成熟miRNA

3、。成熟的miORNA整合入基因沉默復(fù)合體(RNAinduced silencingcomplex，Rlsc)形成miRISC復(fù)合物，通過(guò)直接剪切靶mRNA或者與靶mRNA的非翻譯區(qū)互補(bǔ)結(jié)合，抑制靶mRNA的翻譯、影響蛋向質(zhì)的合成，從而來(lái)調(diào)控多種生物學(xué)行為。miRNA涉及的主要生物學(xué)領(lǐng)域有：干細(xì)胞的分化1，細(xì)胞的凋亡2，出生缺陷3以及腫瘤的發(fā)生4。2  miRNA的研究方法    mRNA的研究方法主要包括兩大類(lèi)，即生物信息學(xué)分析和生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法。在miRNA研究的初期，生物信息學(xué)方法發(fā)揮了非常重要的作用，可為miRNA研究提供有益的線(xiàn)索，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。

4、而生物學(xué)實(shí)驗(yàn)則能提供直接而有力的證據(jù)，對(duì)預(yù)測(cè)結(jié)果加以確認(rèn)。二者各有優(yōu)勢(shì)，互為補(bǔ)充，有機(jī)地將miRNA的生物信息學(xué)分析方法和生物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法相結(jié)合，是miRNA研究的合理選擇。2.1  生物信息學(xué)分析方法2.1.1  miRNA基因預(yù)測(cè)  miRNA克隆是發(fā)現(xiàn)miRNA基因的主要方法，但該方法存在許多缺陷，比如由于受所選取的組織樣品量的限制，一些低表達(dá)量的miRNA可能會(huì)被遺漏，出現(xiàn)假陰性的結(jié)果。隨著人們對(duì)miRNA結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及保守性的逐漸了解，依據(jù)miRNA在進(jìn)化過(guò)程中的保守性及其莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體結(jié)構(gòu)特點(diǎn)編寫(xiě)計(jì)算機(jī)程序，對(duì)miRNA進(jìn)行預(yù)測(cè)正成為尋找新miRNA基因的主

5、要方法。Lim等使用MjrScan軟件，分別在線(xiàn)蟲(chóng)和人中鑒定了30個(gè)和38個(gè)新的miRNA基因5。MirScan采用了一種獨(dú)特的算法，即首先通過(guò)RNA fold軟件尋找保守的并且可以形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)的序列作為候選miRNA前體，然后再與已知miRNA進(jìn)行相似性比較，對(duì)候選前體評(píng)分，得分超過(guò)某一設(shè)定域值者作為候選的miRNA基因6。但只有少數(shù)候選miRNA基因已被實(shí)驗(yàn)確證：還有些候選基因的表達(dá)模式尚未知曉，未檢測(cè)出其表達(dá)，因而出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果7。2.1.2  miRNA靶基因預(yù)測(cè)  成熟的miRNA通過(guò)其序列5端的28個(gè)堿基(seed區(qū))與mRNA上的相應(yīng)靶點(diǎn)結(jié)合，發(fā)揮其抑制翻譯和

6、誘導(dǎo)mRNA降解的功能8。人們只有先對(duì)miRNA靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，才能對(duì)miRNA靶基因開(kāi)展鑒定和功能研究等后續(xù)工作。從已知的miRNA與靶基因的相互作用中，人們發(fā)現(xiàn)miRNA 5端的seed區(qū)可以與靶mRNA 3端UTR區(qū)或者CDS區(qū)結(jié)合。因此，這一特點(diǎn)被各種靶基因預(yù)測(cè)方法廣泛采用。同時(shí)結(jié)合miRNA與靶基因形成二聚體的熱力學(xué)穩(wěn)定性和二級(jí)結(jié)構(gòu)分析軟件，如MFold、RNAFold和RNAhybrid等，以及將miRNA的57端與靶基因的互補(bǔ)情況等作為其他限制條件來(lái)進(jìn)行miRNA靶基因預(yù)測(cè)。目前，不同研究小組已開(kāi)發(fā)出多個(gè)miRNA靶基因預(yù)測(cè)軟件，如TargetScan、miR。anda、Pict

7、ar、DIANAMicr。oT和miRBase Targets等。    不同的預(yù)測(cè)方法，其程序算法不盡相同，結(jié)果很可能有較大偏籌；為減小不同方法帶來(lái)的偏差，在實(shí)際應(yīng)用中，需要多種算法聯(lián)合分析。例如9：當(dāng)分析miRNA在人血管緊張素I型受體(hAT1R)基因上的靶位時(shí)，miRanda軟件預(yù)測(cè)出27個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，TargetScan預(yù)測(cè)結(jié)果超過(guò)37個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，其中有8個(gè)位點(diǎn)與miRanda結(jié)果重復(fù)：而應(yīng)用PicTar算法，卻未找到結(jié)合位點(diǎn)。也有觀(guān)點(diǎn)表明：至少應(yīng)由上述兩種算法預(yù)測(cè)出的miRNA的結(jié)合位點(diǎn)，才對(duì)后續(xù)的miRNA靶位的證明實(shí)驗(yàn)有較大意義10。2.2 

8、; miRNA靶標(biāo)基因的體外驗(yàn)證  在生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)之后，為了排除預(yù)測(cè)的無(wú)功能位點(diǎn)和進(jìn)一步對(duì)miRNA進(jìn)行功能研究，還需進(jìn)行miRNA靶標(biāo)基因的確認(rèn)和鑒定。該實(shí)驗(yàn)過(guò)程需先將靶mRNA完整的3UTR序列克隆至SV40啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的報(bào)告基因(通常為螢火蟲(chóng)熒光素酶)的下游，如果一個(gè)特定miRNA可以與這個(gè)靶mRNA3UTR相結(jié)合，就會(huì)抑制報(bào)告蛋白的生成，因此可通過(guò)檢測(cè)被抑制的報(bào)告蛋白的活性(或表達(dá)程度)，來(lái)判斷miRNAmRNA之間的交互作用10。該方法簡(jiǎn)單易行，但其只是一種體外驗(yàn)證方法，不能完全模擬體內(nèi)真實(shí)的調(diào)控環(huán)境。因此，當(dāng)探討特意miRNA在某一生理或病理過(guò)程中的功能、宣召其靶基因

9、時(shí)，應(yīng)選擇合適的細(xì)胞膜性或其他有效的實(shí)驗(yàn)工具。2.3  miRNA與mRNA的共表達(dá)及miRNA對(duì)靶蛋白的作用  一種miRNA只有與其靶基因mRNA在生物體內(nèi)共表達(dá)(coexpression)，才能發(fā)揮其抑制靶基因表達(dá)的功能。miRNA與其靶基因是否共表達(dá)，可以簡(jiǎn)單地通過(guò)northern blot或者熒光定量PCR(qPCR)來(lái)證實(shí)。由于TaqMan定量PCR方法操作簡(jiǎn)便，可重復(fù)性強(qiáng)，被推薦為分析特定miRNA與靶mRNA的常用方法。例如，生物信息學(xué)預(yù)測(cè)hATlR基因的3UTR區(qū)存在miR155的結(jié)合位點(diǎn)，研究者提取了血管平滑肌細(xì)胞(VSMCs)的總RNA，并以此為模板進(jìn)

10、行qPCR檢測(cè)，分析hATlR和miR.155二者是否在特定細(xì)胞中存在共表達(dá)的現(xiàn)象。研究結(jié)果表明hATlR和miR155均在VSMCs細(xì)胞中有表達(dá)，并且hATIR的表達(dá)水平受miR155的抑制11。    此外，研究者還可以利用miRNA對(duì)靶蛋白的調(diào)控，來(lái)證實(shí)miRNA對(duì)靶點(diǎn)的作用。通常是先將存在miRNAmRNA共表達(dá)的細(xì)胞暫時(shí)過(guò)度的表達(dá)所要研究的miRNA，利用Western印跡方法分析靶基因所編碼蛋白的表達(dá)變化，從而進(jìn)一步驗(yàn)證miRNA對(duì)靶蛋白的作用。除Western blot以外，ELISA或者免疫化學(xué)熒光試驗(yàn)方法也可以用來(lái)對(duì)蛋白質(zhì)的表達(dá)進(jìn)行定量的研究。2

11、.4  miRNA生物學(xué)功能的研究  如果通過(guò)實(shí)驗(yàn)?zāi)軌蜃C實(shí)某個(gè)miRNA可以對(duì)其靶基因進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)控，則需進(jìn)一步研究miRNA的生物學(xué)功能。主要包括細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞遷移等常規(guī)生物學(xué)方法，還可以通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞表型改變等間接方法研究miRNA對(duì)蛋白質(zhì)的影響12。3  乳腺癌細(xì)胞中miRNA的相關(guān)特征    研究者以乳腺癌細(xì)胞系、正常乳腺組織和乳腺癌組織作為研究對(duì)象，利用不同方法檢測(cè)出眾多與乳腺癌相關(guān)的miRNA，然后利用某些分子生物學(xué)標(biāo)記和細(xì)胞代謝活動(dòng)的相關(guān)數(shù)據(jù)，推測(cè)這些miRNA的功能。在乳腺癌中各種miRNAs的功能不

12、盡相同，對(duì)于其功能的分類(lèi)也會(huì)因需要而有所差異；這里我們把乳腺癌相關(guān)miRNA分為癌基因miRNA和抑癌基因miRNA兩類(lèi)：當(dāng)某些miRNA的表達(dá)在腫瘤中升高時(shí)，就被看做是癌基因；反之，則為抑癌基因14。3.1  抑癌基因miRNA3.1.1  miR206  miR206是Iorio等比較正常乳腺組織與癌組織中miRNA表達(dá)差異時(shí)，最早發(fā)現(xiàn)的與乳腺癌發(fā)生相關(guān)miRNA14。miR206在乳腺癌中的表達(dá)水平和ER的表達(dá)成負(fù)相關(guān)，機(jī)制比較復(fù)雜，包括蛋白質(zhì)的磷酸化、乙酰化、SUMO化修飾、多泛素化修飾等。在ER陰性乳腺癌細(xì)胞中，其表達(dá)量有所上升，提示miR206的功能可

13、能與下調(diào)ER基因的表達(dá)有關(guān)。Adams等發(fā)現(xiàn)：miR206可以與ER受體mRNA的3UTR端兩個(gè)特異序列結(jié)合，下調(diào)ERQ的翻譯，而不會(huì)影響ER13基因的表達(dá)；同時(shí)發(fā)現(xiàn)雌二醇（E2)或特異性ER激動(dòng)劑PPT也能明顯下調(diào)miR206的水平。值得注意的是，ER激活劑可以抑制miR206的表達(dá)，ER激活劑或者黃體激素卻沒(méi)有抑制作用，這說(shuō)    明miR206對(duì)ER基因表達(dá)的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中存在反饋調(diào)節(jié)。此外他們還發(fā)現(xiàn)mir21、let27d也能調(diào)控ER mRNA的表達(dá)水平，提示不同的miRNA可以調(diào)控同一個(gè)靶基因15。在ER陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞中，miR206的表達(dá)量則明顯下降，若再

14、將miR206轉(zhuǎn)入雌激素依賴(lài)的MCF7乳腺癌細(xì)胞中，癌細(xì)胞的增殖受到抑制，這同樣說(shuō)明miR206對(duì)乳腺癌細(xì)胞中ER的表達(dá)的負(fù)調(diào)控作用16。miR206可能在乳腺癌惡性轉(zhuǎn)化及其轉(zhuǎn)化過(guò)程中ER受體表達(dá)缺失導(dǎo)致非雌激素依賴(lài)性生長(zhǎng)中起調(diào)控作用，但具體功能仍有待于進(jìn)一步研究17。3.1.2  miR175p  miR175p是來(lái)源于經(jīng)常發(fā)生雜合子丟失(LOH)的染色體13q31區(qū)域的一簇miRNA。有學(xué)者通過(guò)生物信息學(xué)算法推測(cè)miR175p的潛在靶點(diǎn)為AIB1一種可以上調(diào)ER和E2F1轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄輔助激活因子18，19。miR175p通過(guò)抑制AIBl的表達(dá)，從而使ER和E2F的表達(dá)發(fā)生

15、改變。降低AIBl的表達(dá)可以使E2依賴(lài)性的乳腺癌細(xì)胞、非E2依賴(lài)性的乳腺癌細(xì)胞、ER菲依賴(lài)型的乳腺癌細(xì)胞的增殖速度下降20。此外，miR175pmiR20a家族的表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞中cyclin D1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性，miR175pmiR20a通過(guò)與cyclin D1 3端UTR區(qū)保守序列結(jié)合，來(lái)抑制cyclin D1的翻譯。cyclin D1也可以反饋調(diào)節(jié)miR175pmiR20a的表達(dá)，miR175p對(duì)細(xì)胞周期的調(diào)控，可能是乳腺癌發(fā)生的原因之一21。3.1.3  miR27b  功胞色素P450 1Bl(cytochrome P450，family 1，subfamil

16、y b，polypeptide 1，CYPIBI)是細(xì)胞色素氧化酶P450家族1家族B的惟一成員：CYPlBl的作用是催化某些致癌物和17的代謝；包括乳腺癌在內(nèi)的眾多腫瘤中都能檢測(cè)到其過(guò)表達(dá)22。CYPlBl基因mRNA序列中所預(yù)測(cè)的miRNA結(jié)合位點(diǎn)與miR27b的序列有良好的匹配關(guān)系。與正常組織細(xì)胞相對(duì)比，miR27b在乳腺癌細(xì)胞MCF7中的表達(dá)水平明顯下降，同時(shí)CYP1B1處于高表達(dá)水平，由此說(shuō)明miR27b有下調(diào)CYPlBl表達(dá)的功能23。3.1.4  miR125a和miR125b  這組miRNA在過(guò)度表達(dá)HER2的乳腺癌細(xì)胞中顯著下調(diào)24。通過(guò)生物信息學(xué)方法在

17、HER2和HER3基因3UTR區(qū)域發(fā)現(xiàn)了miR125的靶點(diǎn)。在乳腺癌細(xì)胞中，高表達(dá)的HER2基因和其蛋白產(chǎn)物，可導(dǎo)致乳腺腫瘤進(jìn)一步的惡化25。在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，SKBR3(一種ErbB2依賴(lài)性的人類(lèi)乳腺癌細(xì)胞系)細(xì)胞中miR125a和miR125b過(guò)表達(dá)，可以抑制HER2、HER3的轉(zhuǎn)錄、表達(dá)，從而降低SKBR3細(xì)胞的附壁生長(zhǎng)能力、細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力、侵襲力，起到了抑制腫瘤的作用。但miR125a、miR125b過(guò)表達(dá)對(duì)HER2非依賴(lài)性的乳腺癌細(xì)胞系MCF10A的抑制作用卻不明顯26。3.1.5  miR200c  Hurteau等應(yīng)用生物信息學(xué)方法和定量RTPCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)miR20

18、0c的靶位之一是一種重要的腫瘤延長(zhǎng)因子TCF8(也稱(chēng)作EF1)，該因子介導(dǎo)上皮鈣黏蛋白抑制物的轉(zhuǎn)錄和乳腺癌上皮細(xì)胞的可塑性調(diào)定27。在原本低表達(dá)miR200c的MDAMB231乳腺癌細(xì)胞中，增加miR200c的表達(dá)量后，TCF8的水平出現(xiàn)下降，鈣黏連蛋白E的水平有所恢復(fù)，細(xì)胞異型性程度也有所下降28。miR200c的這種作用機(jī)制，可阻止乳腺癌細(xì)胞“上皮間充質(zhì)細(xì)胞(EMT)”的轉(zhuǎn)變過(guò)程，也阻礙了細(xì)胞的惡變29。3.1.6  miR335、miR126和miR206  miR335、miR126和miR206是一族可能與乳腺癌轉(zhuǎn)移、擴(kuò)散相關(guān)的miRNA。通過(guò)與非選擇性的乳腺癌M

19、DAMB231細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比，研究者首先找出了六種  (rrliR335，miR126，miR206，miR122a，miR199a*，miR489)在高轉(zhuǎn)移乳腺癌細(xì)胞系中表達(dá)量降低的miRNA。在乳腺癌骨轉(zhuǎn)移細(xì)胞和肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞中，恢復(fù)miR335、miR126、miR206的表達(dá)水平后，小鼠模型中腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力明顯下降。在培養(yǎng)的細(xì)胞中，過(guò)度表達(dá)miR126后可抑制細(xì)胞的增殖：而在體外試驗(yàn)中，miR335和miR206的表達(dá)可使細(xì)胞的侵襲力降低；在乳腺癌臨床標(biāo)本中，低表達(dá)miR335和miR126的臨床病例，因腫瘤的惡性侵襲而表現(xiàn)為極低的生存率。研究者還在侵襲性細(xì)胞找出了四個(gè)miRN

20、A335的直接作用靶點(diǎn)，它們分別是蛋白酪氨酸性磷酸酶  (PTPRN2)，酪氨酸蛋白激酶(MERTK)，成分同生蛋白C(TNC)和以SRY基因?yàn)榛境蓡T的一類(lèi)控制發(fā)育的SOX4。這些靶點(diǎn)的表達(dá)水平可以作為精確判斷腫瘤侵襲性依據(jù)17。3.1.7  Let7家族  根據(jù)腫瘤干細(xì)胞假說(shuō)，腫瘤干細(xì)胞與腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、耐藥以及復(fù)發(fā)有直接關(guān)系30。具有自我增殖能力的乳腺癌干細(xì)胞(BTIC)可以通過(guò)分選純化的CD44+CD24/low細(xì)胞或者孤立懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞球而獲得。有實(shí)驗(yàn)表明，從乳腺癌患者體內(nèi)分離出來(lái)的細(xì)胞以及富含CD44+CD24/low細(xì)胞的Sk3rd細(xì)胞中，l

21、et7家族的miRNA在潛在的乳腺癌干細(xì)胞表達(dá)有顯著的下降。在小鼠模型內(nèi)，過(guò)表達(dá)let7家族miRNA后，可以降低腫瘤細(xì)胞的增殖、形成乳腺球囊細(xì)胞團(tuán)、生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的能力，因此在今后的臨床治療中，Let7家族具有很大的應(yīng)用前景31。3.1.8  miR205  在乳腺癌細(xì)胞MCF7、MDAMB231中，miR205表達(dá)比良性乳腺腫瘤細(xì)胞和正常乳腺細(xì)胞低。miR205可調(diào)控表皮生長(zhǎng)因子ErbB3和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(VEGFA)，miR205通過(guò)直接與靶蛋白mRNA的3UTR端結(jié)合，抑制靶蛋白的生成。在腫瘤細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR205，可以抑制癌細(xì)胞的增殖、非停泊性生長(zhǎng)和侵襲32。因

22、此在乳腺癌細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR205可以在未來(lái)臨床中，作為治療乳腺惡性腫瘤的方法。3.2  起癌基因作用的miRNA3.2.1  miR21  科研工作者應(yīng)用實(shí)時(shí)RPCR研究5種乳腺癌腫瘤中的157種miRNA時(shí)，發(fā)現(xiàn)miR21的表達(dá)明顯升高33，并發(fā)現(xiàn)敲除miR21的MCF7乳腺癌細(xì)胞表現(xiàn)為敲除量依賴(lài)性的低生長(zhǎng)、高凋亡；在小鼠轉(zhuǎn)移模型中miR21有抑制腫瘤增殖和降低腫瘤標(biāo)記物Ki67抗體結(jié)合能力的作用34。為進(jìn)一步了解miR21作用的分子生物學(xué)機(jī)制，應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法，對(duì)比過(guò)表達(dá)的腫瘤細(xì)胞和miR21敲除的腫瘤細(xì)胞的蛋白質(zhì)表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)具有抑制腫瘤作用的原肌凝蛋白

23、(TPMl)是潛在靶點(diǎn)之一35。Yan LX等檢測(cè)了113例乳腺癌標(biāo)本中miR21的表達(dá)情況，可知miR21高表達(dá)的患者由于早期癥狀不明顯、癌細(xì)胞通過(guò)淋巴轉(zhuǎn)移，表現(xiàn)為愈后較差、生存期較短。因此miR21可以作為乳腺癌預(yù)后效果和疾病進(jìn)展的一項(xiàng)監(jiān)測(cè)指標(biāo)36。近期Wickljamasinghe NS等人發(fā)現(xiàn)，E2可以通過(guò)ER介導(dǎo)，使miR21的靶位丟失，從而抑制miR21在MCF7乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)37。3.2.2  miR155、miR9和miR10  研究人員在篩選乳腺癌細(xì)胞和人正常乳腺上皮細(xì)胞之間差異表達(dá)的miRNA時(shí)，發(fā)現(xiàn)乳腺癌細(xì)胞中miR155、miR91、miR10b

24、的表達(dá)量都有顯著的上升。不同于miR155和miR9的是，miR10b僅在轉(zhuǎn)移的乳腺癌細(xì)胞中高度表達(dá)。功能學(xué)研究表明，體外miR10b的過(guò)度表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞的遷徙和侵襲，在體內(nèi)miR10b則可以啟動(dòng)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。研究人員還發(fā)現(xiàn)，與浸潤(rùn)性小葉癌相關(guān)的轉(zhuǎn)錄蛋白Twist的高表達(dá)，可直接誘導(dǎo)miR10b的表達(dá)。miR10b的推測(cè)靶點(diǎn)為轉(zhuǎn)錄因子的同源異型盒D10(HOXD10)，miR10b抑制HOXD10的翻譯，導(dǎo)致細(xì)胞在啟動(dòng)轉(zhuǎn)移基因的產(chǎn)物RAs同源基因家族成員C的誘導(dǎo)下發(fā)生了一系列的異常變化38。本篇論文由網(wǎng)友投稿，讀書(shū)人只給大家提供一個(gè)交流平臺(tái)，請(qǐng)大家參考，如有版權(quán)問(wèn)題請(qǐng)聯(lián)系我們盡快處理。3

25、.2.3  miR27  miR27a是對(duì)SKBr3細(xì)胞應(yīng)用凋亡前計(jì)量的組胺脫乙酰激酶抑制劑LAQ824治療后，表達(dá)下調(diào)的一種miRNA39。miR27潛在的靶點(diǎn)是細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子ZBTB10RINZF，一種調(diào)控細(xì)胞周期的特殊轉(zhuǎn)錄因子蛋白(SPl)的抑制物。miR27作為一種腫瘤癌基因miRNA，通過(guò)調(diào)節(jié)ZBTB10表達(dá)后從而使SPl蛋白過(guò)度表達(dá)，引起細(xì)胞癌變；miR27也可使SP2和SP3過(guò)度表達(dá)，這同樣具有引起癌變的作用40。3.2.4  miR22 1222  乳腺癌MCF7和T47D細(xì)胞中過(guò)表達(dá)miR221222，使雌激素受體表達(dá)量下降，同時(shí)高度表達(dá)

26、miR221222的MCF7和T47D的細(xì)胞對(duì)于抗腫瘤藥物他莫兩芬(tamoxifen)有耐藥作用。由此推測(cè)miR221222的靶位為雌激素受體修復(fù)基因和乳腺癌抗激素治療的基因41。3.2.5  miR210  miR210是Foekens JA等近期發(fā)現(xiàn)的與乳腺癌相關(guān)的miRNA。miR210是在低氧環(huán)境下被誘導(dǎo)產(chǎn)生、從而引起細(xì)胞癌變42，并且與ER+LNN和ERLNN乳腺癌的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)有密切關(guān)系，也是非轉(zhuǎn)移性乳腺癌預(yù)后較差的有效標(biāo)志之一43。4  展望    目前臨床中，局部的手術(shù)范圍日趨保守，化療、放療、內(nèi)分泌治療及生物治療等綜合

27、治療的有效性使得乳腺癌的長(zhǎng)期生存率不斷提高，生活質(zhì)量也不斷改善，但總生存率仍然不理想。生物分子靶向治療是一項(xiàng)十分有希望的治療手段。尋找新的治療靶點(diǎn)，正是目前研究的熱點(diǎn)。FDA于2007年批準(zhǔn)了GSK公司研發(fā)的針對(duì)HER2和EGFR的雙靶點(diǎn)小分子靶向藥物L(fēng)apatinib，在臨床上取得了比較好的療效。miRNA的發(fā)現(xiàn)及其乳腺癌相關(guān)靶基因的確定，初步揭示了其在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展中的調(diào)控作用，為尋找乳腺癌生物治療的新靶標(biāo)提供了很有希望的方向。如本文所述，一種miRNA有多個(gè)相關(guān)的靶基因，如果以這些miRNA為治療靶點(diǎn)，其效率可能遠(yuǎn)比針對(duì)單一的靶基因高。同時(shí)恢復(fù)或沉默腫瘤相關(guān)的miRNA技術(shù)，在乳腺癌的

28、治療領(lǐng)域中將會(huì)有潛在的應(yīng)用前景。與miRNA功能相似的siRNA相關(guān)藥物已經(jīng)進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段，但miRNA是內(nèi)源性的短鏈RNA，因此理論上針對(duì)miRNA的治療將比siRNA具有更高的安全性。目前miRNA在乳腺癌的研究剛剛起步，對(duì)其功能及其靶基因的認(rèn)識(shí)還不清楚。miRNA及其靶基因預(yù)測(cè)方法的日益成熟、檢測(cè)技術(shù)的日新月異，一定能夠極大地推動(dòng)miRNA在多種生理學(xué)和病理學(xué)過(guò)程中的重要調(diào)控作用，而miRNA與腫瘤的相關(guān)研究為腫瘤的預(yù)防和治療開(kāi)辟了嶄新的領(lǐng)域，miRNA的干擾技術(shù)有可能成為治療乳腺癌的一種新的手段。miRNA基因芯片技術(shù)也很可能成為腫瘤診斷的工具，以調(diào)控機(jī)體生命活動(dòng)的miRNA為靶點(diǎn)或

29、以miRNA為治療手段的設(shè)想，以后可能會(huì)成為研究焦點(diǎn)。【參考文獻(xiàn)】  1 Zhang BH,Pan XP,Anderson TA.MicroRNA：a new player in stem cellsJ.Cell Physiol，2006;209(2)：2669.2 Tanno B，Ces IV,Vitali R，et al.Silencing of endogenous IGFBP2 5 by micro RNA interference affects proliferation，apoptosis and differentiation of neuroblastoma cel

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