Twist蛋白、E-cadherin、VEGF在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)

1、Twist蛋白、E-cadherin、VEGF在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)         11-03-30 14:27:00     編輯：studa20                作者：趙杰,楊春雨，王麗華，孟海，李春宏，高志安【摘要】  目的 研究轉(zhuǎn)錄因子Twist蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌（ESCC）中的表達(dá)及其通過(guò)

2、對(duì)上皮型鈣黏附蛋白（E-cadherin）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的作用在判斷腫瘤的生物學(xué)行為方面的意義。方法 采用SP免疫組化方法檢測(cè)了54 例ESCC組織（20 例癌旁組織作為對(duì)照）中Twist的表達(dá)。結(jié)果 Twist蛋白陽(yáng)性表達(dá)率（70.1%）明顯高于癌旁組織（15%），（P = 0.000）；Twist在有外膜浸潤(rùn)的病例中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)外膜浸潤(rùn)的病例；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組；在TNM分期期中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于在期中的陽(yáng)性表達(dá)率(P0.05）；Twist蛋白表達(dá)與ECadherin存在明顯負(fù)相關(guān)（r=0.401, P =0.003）；與VEGF

3、存在明顯正相關(guān)關(guān)系（r=0.526, P = 0.000）。結(jié)論 Twist蛋白在ESCC中過(guò)度表達(dá)，可能通過(guò)分別上調(diào)和下調(diào)VEGF、E-cadherin的表達(dá)，進(jìn)而在ESCC的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。 【關(guān)鍵詞】  食管鱗狀細(xì)胞癌; Twist；E-cadherin；VEGF；免疫組織化學(xué)Abstract：Objective  To investigate the expression of Twist protein in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) and the significance in deter

4、mining the biological behaviors of the tumor by its function on E-cadherin (E-cad) and vascular endothelial growth factor (VEGF). Methods  Twist，E-cad and VEGF proteins expression were detected by SP immunohistochemistry method in 54 cases of ESCC（controlled with 20 cases of paraneoplastic tiss

5、ue specimens）.Results  The positive rate of Twist protein was higher in ESCC (70.1) than that in paraneoplastic tissues (15%,P=0.000）.The expression of Twist protein in the groups of adventitia invasion，lymph node metastasis and stage were significantly higher than that in the groups of non-adv

6、entitia invasion, non-lymph node metastasis and stagerespectively (P0.05). Negative correlation was obtained between the expression of Twist and E-cad proteins (r=0.401, P=0.003), while positive correlation was gained between the expression of Twist and VEGF proteins (r=0.526, P=0.000）. Conclusions&

7、#160; The over-expression of Twist protein in ESCC might play an important role in the invasiveness and metastasis of the tumor by down-regulating the expression of E-cadherin and up-regulating the expression of VEGF.    Key words:esophageal squamous cell carcinoma; Twist; E-cadherin;

8、 VEGF; immunohistochemistry    Twist基因是存在于果蠅、鼠、人等生物體內(nèi)的一種堿性螺旋環(huán)螺旋轉(zhuǎn)錄因子。人Twist基因位于7p21.2,含有2個(gè)外顯子和一個(gè)內(nèi)含子，編碼由202個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)，屬于堿性螺旋環(huán)狀結(jié)構(gòu)家族中高度保守的轉(zhuǎn)錄因子之一；近期研究發(fā)現(xiàn)，Twist在抑制腫瘤凋亡,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移進(jìn)程中起重要作用1。本研究采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)Twist蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌（ESCC）組織中的表達(dá)，并探討Twist與上皮型鈣粘蛋白（Ecadherin）及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）在ESCC侵襲、轉(zhuǎn)移等方面的作用。&#

9、160;   1  材料與方法    1.1  標(biāo)本來(lái)源    54例食管鱗狀細(xì)胞癌標(biāo)本和20 例癌旁組織取自2004年1月至2007年1月遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院病理科存檔蠟塊。其中男性49 例，女性5 例，年齡3977 歲；高-中分化39 例，低分化15 例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36 例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18 例；臨床病理分期采用國(guó)際抗癌聯(lián)盟2002年TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，期38 例，期16 例。標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4微米厚連續(xù)切片。所有患者術(shù)前均未接受放、化療及生物治療。  

10、  1.2  試劑與方法    1.2.1  主要試劑  兔抗人Twist多克隆抗體為美國(guó)Santa Crus公司產(chǎn)品, 鼠抗人VEGF單克隆抗體、鼠抗人Ecadherin單克隆抗體及免疫組化試劑盒均購(gòu)自福建邁新生物技術(shù)有限公司。    1.2.2  方法  采用免疫組化SP法，按照SP免疫組化試劑盒說(shuō)明書所示步驟進(jìn)行，切片經(jīng)枸櫞酸緩沖液（pH=6.0）高壓熱修復(fù)預(yù)處理。PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知陽(yáng)性組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照。    1.2.

11、3  免疫組化結(jié)果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)  Twist、VEGF、Ecadherin蛋白陽(yáng)性表達(dá)呈棕黃色顆粒。免疫組織化學(xué)結(jié)果采用半定量記分法判定,按陽(yáng)性著色程度評(píng)分:0分為無(wú)著色；1分為淺黃色；2分為棕黃色；3分為棕褐色。再按陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分:0分為陰性；1分為<10%；2分為11%50%；3分為51%75%；4分為>75%，以兩者乘積判定結(jié)果: 412分定為陽(yáng)性,4分以下定為陰性。    1.2.4  統(tǒng)計(jì)方法  采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行采用2檢驗(yàn)，Spearman相關(guān)分析。  

12、0; 2  結(jié)    果    2.1  Twist蛋白在ESCC中的表達(dá)    Twist蛋白表達(dá)呈棕褐色，定位于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核，以細(xì)胞質(zhì)為主（見(jiàn)圖1）。54 例癌組織中，陽(yáng)性38 例，陽(yáng)性率為70.1%；癌旁組織中Twist陽(yáng)性3 例，陽(yáng)性率為15% ，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(2=18.11， P=0.000)；在有外膜浸潤(rùn)的病例中陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)外膜浸潤(rùn)的病例（2=5.131, P =0.024）；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（2=17.763, P =0.000）；在TNM分期期中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于在-期中的陽(yáng)性表達(dá)率，（2=4.474, P =0.034）；而與患者性別、年齡、腫瘤大小及腫瘤分化等因素均未顯示相關(guān)性(見(jiàn)表1)。 表1  Twist與ESCC臨床病理特征的關(guān)系臨床    2.2  Ecadherin 、VEGF 在 ESCC中的表達(dá)（見(jiàn)圖2、3）。    Ecadherin陽(yáng)性表達(dá)以胞膜著色為主, VEGF陽(yáng)性表達(dá)以胞質(zhì)著色為主,均呈現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒。54例ESCC中,