重型肝炎時中性粒細(xì)胞的形態(tài)改變

1、    重型肝炎時中性粒細(xì)胞的形態(tài)改變        摘要目的：觀察并探討重型肝炎時血中性粒細(xì)胞的形態(tài)變化及其意義。方法：20例重型肝炎患者血中性粒細(xì)胞標(biāo)本，常規(guī)固定、包埋制片、電鏡檢查。結(jié)果：所有患者的中性粒細(xì)胞均有明顯異常，其改變程度與患者肝衰竭分期相平行。主要包括：中性粒細(xì)胞質(zhì)變性，吞噬泡欠缺，細(xì)胞器及細(xì)胞顆粒減少，線粒體腫脹，細(xì)胞核濃縮等。核面積測量、線粒體和細(xì)胞顆粒電鏡計數(shù)結(jié)果與上述改變一致。結(jié)論：該結(jié)果可視為嚴(yán)重肝病患者中性粒細(xì)胞功能減退及其對細(xì)菌易感性顯著增高的

2、形態(tài)學(xué)證據(jù)，患者中性粒細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)異常與肝衰竭之間可能有某些互為因果關(guān)系。主題詞肝炎；中性白細(xì)胞；顯微鏡檢查，電子 Morphological changes of neutrophils in severe hepatitisWANG Ying-Jie, WANG Yu-Ming, LI Meng-Dong, KE Jing-Xing, ZHANG Wei-Jun, CHEN Xi-WeiDepartment of Infectious Disease, Southwest Hospital, Third Military College, Chongqing (400038)Abstrac

3、tAIM: To study the morphological changes of neutrophils in patients with severe hepatitis and discuss their significance. METHODS: 20 cases of neutrophils specimens prepared with routine methods were observed by electron microscopy. RESULTS: Abnormalities of neutrophils were observated in all patien

4、ts, which paralleled closely with the stage of hepatic failure in patients. Main ultrastructrual changes included cytoplasm degeneration, want of pinocytotic vesicle and phagosone, decreased organelles and granules, mitochondria swelling, nucleus condensation, etc. Nuclear area measure, mitochondria

5、 and cell granules count were consistent with the above observation.CONCLUSION: This results could be regarded as a morphological evidence of the reduced neutrophil functions and the increased susceptibility to bacterial infection in patients with severe liver disease. A mutually causal relation may

6、 be existed between the ultrastructural abnormalities of neutrophils and the hepatic failure in severe hepatitis patients.MeSH Hepatitis; Neutrophils; Microscopy, electron有關(guān)肝病患者中性粒細(xì)胞異常的研究已為數(shù)不少，但大多系針對肝硬化等慢性肝病患者細(xì)菌易感性增高而進(jìn)行的中性粒細(xì)胞功能研究13，對其形態(tài)改變了解尚少。本文對20例重型病毒性肝炎(重型肝炎)患者中性粒細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步觀察，以期從形態(tài)學(xué)角度為闡明中性粒細(xì)胞在重型

7、肝炎病情演變中的意義提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。材料與方法1.臨床資料：重型肝炎20例，系我科住院的乙型重型肝炎患者，男16例，女4例，平均年齡35.4歲。臨床表現(xiàn)均符合1995年病毒性肝炎防治方案中的診斷標(biāo)準(zhǔn)。其中13例經(jīng)肝組織病理檢查證實(shí)本病。依患者肝衰竭程度及是否伴有嚴(yán)重并發(fā)癥分早期和極期各10例進(jìn)行觀察。以本院健康獻(xiàn)血員為正常對照組，共15例，男10例，女5例，平均年齡34.3歲。2.電鏡標(biāo)本的制備：取靜脈血4.5mL，0.13mol/L枸櫞酸鈉抗凝，以100×g離心5min，于所分離的血漿中緩慢加入0.03mol/L戊二醛0.2mL，常溫放置5min。再以1000×g離心10m

8、in，棄上清，沿試管壁加入0.3mol/L戊二醛緩沖液2mL，常溫下固定5h。輕輕拔出試管內(nèi)的有核細(xì)胞層，用0.1 mol/L磷酸緩沖液沖洗，將所得標(biāo)本修成1.5mm×1.5mm×1.5mm的小塊，置0.3mol/L戊二醛內(nèi)4下固定3h。以0.039mol/L鋨酸作后固定，醋酸鈾塊染，系列丙酮脫水，環(huán)氧樹脂618包埋，半薄切片HE染色后光鏡下選擇粒細(xì)胞層準(zhǔn)確定位，制超薄切片兩鋁染色，H-300型透射電鏡下觀察。3.核面積測量：于3000倍下隨機(jī)對中性粒細(xì)胞攝片，置S-600型像處理系統(tǒng)(重慶大學(xué)研制)進(jìn)行核面積測量，每例隨機(jī)連續(xù)測50個細(xì)胞核，取均值為其核面積代表值，用t檢

9、驗(yàn)處理數(shù)據(jù)。4.線粒體、細(xì)胞顆粒計數(shù)：在電鏡下直接隨機(jī)連續(xù)計數(shù)50個中性粒細(xì)胞內(nèi)線粒體(完全空化者不計數(shù))、致密顆粒和低密度顆粒數(shù)，亦取均值為每例患者各項(xiàng)計數(shù)的代表值，同上方法統(tǒng)計處理。結(jié)果一、超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果(1)。Fig 1The ultrastructural abnormalities of neutrophils in patients with severe hepatitis1.The number of mitochondria, phagosome and granules of neutrophil decreased significantly.2.A significa

10、nt swelling of mitochondria appeared in neutrophil. 3.The nucleus condensation of neutrophils was widely seen in extreme stage. 4.Endoplasmic reticula of neutrophil became dilated and some appeared degeneration1重型肝炎患者中性粒細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變觀察發(fā)現(xiàn)20例患者中性粒細(xì)胞均有明顯的超微結(jié)構(gòu)異常，以極期患者最為顯著，早期患者次之。與正常對照組相比大致有以下幾類變化：(1)粒細(xì)胞表面突起

11、及偽足普遍減少，且不規(guī)則，其內(nèi)所含胞質(zhì)稀少，少見吞噬泡存在。極期及部分早期患者細(xì)胞形態(tài)和大小欠均一，易見質(zhì)膜和胞漿的較多部分外突而使細(xì)胞呈畸形，一些極期患者的細(xì)胞質(zhì)膜有局限性模糊不清和缺損現(xiàn)象。(2)粒細(xì)胞胞漿均有不同程度改變，一些為胞質(zhì)密度不均勻，部分胞質(zhì)溶解、空化和呈凝固狀。多數(shù)為整個細(xì)胞胞質(zhì)疏松、水腫變性，部分細(xì)胞胞漿內(nèi)出現(xiàn)大小不等、數(shù)目多寡不一的空泡。胞漿內(nèi)所含細(xì)胞器明顯減少，吞噬泡、低密度顆粒、致密顆粒等均顯著減少，嚴(yán)重者胞漿內(nèi)僅見到23個細(xì)胞顆粒。(3)粒細(xì)胞線粒體改變頗為突出。其數(shù)量顯著減少，極期患者線粒體完全缺失現(xiàn)象多見。殘留線粒體呈不同程度的退行性改變，包括灶性腫脹、嵴斷裂、

12、高度水腫及空泡化，部分空泡變的線粒體內(nèi)見髓鞘樣結(jié)構(gòu)。(4)極期及多數(shù)早期患者粒細(xì)胞核漿比例下降，呈明顯的核濃縮，部分甚至呈核固縮，染色質(zhì)亦顯著濃縮，電子密度極度，伴有核周間隙消失等改變。(5)粒細(xì)胞內(nèi)的膜性管道系統(tǒng)變化不一 。有些患者細(xì)胞內(nèi)微管數(shù)量增多，呈灶性聚集。有些內(nèi)質(zhì)網(wǎng)高度擴(kuò)張，內(nèi)含均一的細(xì)顆粒狀物質(zhì)，部分甚至擴(kuò)張成大空泡，并伴膜結(jié)構(gòu)的溶解消失和較多的髓鞘樣結(jié)構(gòu)。表1中性粒細(xì)胞核面積測量和細(xì)胞器計數(shù)Tab 1The nuclear area measure and the organelles count of neutrophilsGroupnNucleararea(m2）Mitoch

13、ondriaHigh densitygranulesLow diensity granulesControl15Early stage1042.6±7.9*4.5±2.4*26.4±10.2*Extreme stage1033.4±10.1*3.6±2.1*5.8±2.9*?18.1±12.8*     *P0.05，?*P0.01，vs control groupP0.05，vs early stage group二、核面積測量和細(xì)胞器計數(shù)結(jié)果(表1)：由表1可見，重型肝炎早期時粒細(xì)

14、胞核面積、細(xì)胞顆粒及線粒體就已低于正常對照組，除致密顆粒外，余均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05)。進(jìn)入極期后，四項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)一步下降，與對照組相差顯著(P0.05，P0.01)。此外，極期與早期核面積之間也有顯著差異(P0.05)。 討論即往的研究證實(shí)，肝硬化等肝病患者粒細(xì)胞功能嚴(yán)重障礙，包括細(xì)胞脫粒，趨化、吞噬作用降低，過氧化物減少，炎性介質(zhì)合成障礙等3，4，由于中性粒細(xì)胞在抵御細(xì)菌感染中起關(guān)鍵作用5，故上述粒細(xì)胞功能障礙是肝病患者易繼發(fā)細(xì)菌感染的主要原因之一。本研究發(fā)現(xiàn)重型肝炎患者中性粒細(xì)胞有明顯的超微結(jié)構(gòu)異常，集中表現(xiàn)為粒細(xì)胞胞漿變性，細(xì)胞器減少、線粒體腫脹、細(xì)胞核濃縮等，這些改變與上述研究結(jié)果基

15、本吻合，可視為肝病患者中性粒細(xì)胞功能異常的形態(tài)學(xué)證據(jù)，同時恰可解釋重型肝炎患者臨床過程中很高的細(xì)菌感染率。Itoh等6發(fā)現(xiàn)，肝硬化患者中性粒細(xì)胞產(chǎn)生過氧離子能力的下降程度與肝功能障礙有相關(guān)關(guān)系，提示肝功能狀態(tài)與粒細(xì)胞依氧性殺菌作用及其它細(xì)胞功能之間有一定的關(guān)系。我們在觀察中注意到，重型肝炎患者中性粒細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變與肝衰竭分期基本一致，早期患者粒細(xì)胞改變已較明顯，極期改變更為突出。提示中性粒細(xì)胞異常不僅可作為衡量重型肝炎患者預(yù)防感染能力的可靠指標(biāo)，而且對重型肝炎患者病情及預(yù)后判斷也有一定的參考價值。已知酒精、營養(yǎng)不良、葉酸代謝失常以及骨髓抑制等均可引起粒細(xì)胞功能障礙，近來一些研究相繼從乙型肝炎

16、患者粒細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)乙肝病毒7，鑒于多種病毒感染外周血細(xì)胞后可引起其細(xì)胞功能改變，故推測肝病時中性粒細(xì)胞的異?？赡芤才c肝炎病毒直接或間接作用有關(guān)。上述研究似可說明肝病患者粒細(xì)胞改變系多種復(fù)雜因素長期慢性作用的結(jié)果，但尚不能完全解釋重型肝炎時的中性粒細(xì)胞異常。由于重型肝炎是以肝衰竭為特征，病情嚴(yán)重者多發(fā)生多器官衰竭，其中嚴(yán)重的內(nèi)毒素血癥及復(fù)雜的免疫反應(yīng)產(chǎn)物、免疫復(fù)合物等可作為血漿因素8而對細(xì)胞功能起直接抑制作用。故我們認(rèn)為，中性粒細(xì)胞異常與肝衰竭之間可能存在著互為因果的關(guān)系，在重型肝炎患者粒細(xì)胞異常中，除其它因素外，肝衰竭本身可能起重要作用，確切的機(jī)理有待進(jìn)一步深入研究。(本研究承蒙本?；A(chǔ)部病理教

17、研室劉友生教授幫助與指導(dǎo)，謹(jǐn)致謝意)作者單位：王英杰王宇明李夢東第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院傳染科(重慶400038)可金星張文軍陳烯偉基礎(chǔ)部中心實(shí)驗(yàn)室電鏡室參考文獻(xiàn)1Holdstock G, Leslie B, Hills C, et al. Monocyte function in cirrhosis. J Clin Pathol, 1982, 35:972.2Fernandez MA, Manifold IH, Fergusson L, et al. Neutrophil and monocyte phagocytosis in chronic liver disease. Clin Sci,

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