虎杖植物提取物國際商務(wù)標(biāo)準(zhǔn)編制說明

1、國際商務(wù)標(biāo)準(zhǔn)虎杖提取物編制說明1 任務(wù)來源 本標(biāo)準(zhǔn)的制定工作，是由中國醫(yī)藥保健品進(jìn)出口商會提出而進(jìn)行的,國際商務(wù)標(biāo)準(zhǔn)植物提取物編號為WM 。本標(biāo)準(zhǔn)由長沙綠蔓生物科技有限公司、中國醫(yī)藥保健品進(jìn)出口商會等單位負(fù)責(zé)起草。2 標(biāo)準(zhǔn)制定的意義 虎杖提取物是以蓼科植物虎杖的干燥根和根莖中提取分離獲得。其提取物中白藜蘆醇具有抑制單胺氧化酶、抗氧化、消除自由基、抗血小板聚集抗腫瘤等功效1，已廣泛用于醫(yī)藥、保健品、化妝品等多種行業(yè)，國際市場需求很大。常用天然提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參考手冊2003中規(guī)定了白藜蘆醇的產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)和檢驗(yàn)方法，但在這當(dāng)中沒有規(guī)定白藜蘆醇的來源是否為虎杖且這里面的規(guī)格是白藜蘆醇及糖苷95%；中華

2、人民共和國藥典2010版一部中規(guī)定了原料虎杖的產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)和檢驗(yàn)方法，但在這當(dāng)中都沒有規(guī)定對白藜蘆醇的含量檢測且對農(nóng)藥殘留、重金屬沒有限制規(guī)定；查閱國外標(biāo)準(zhǔn)也沒有找到控制該產(chǎn)品品質(zhì)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)前外貿(mào)出口貿(mào)易中的食品安全形式十分嚴(yán)峻，為保障國家外貿(mào)經(jīng)濟(jì)運(yùn)行的安全和我國人民群眾的食品衛(wèi)生安全，及時(shí)建立虎杖提取物白藜蘆醇的國內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。3 標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則本標(biāo)準(zhǔn)遵循GB/T1.1-2009標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則；GB/T20001.2-2001標(biāo)準(zhǔn)化工作指南 第2部分：采用國際標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)則和GB/T20001.4-2001標(biāo)準(zhǔn)編寫規(guī)則 第4部分：化學(xué)分析方法規(guī)則

3、編寫。還參照相關(guān)國家標(biāo)準(zhǔn)編寫指南的要求2 10。4 標(biāo)準(zhǔn)編制依據(jù)和主要內(nèi)容4.1本標(biāo)準(zhǔn)主要從以下幾方面制定產(chǎn)品的技術(shù)要求： 4.1.1 真?zhèn)畏矫妫?鑒別。用感官及理化方法鑒別產(chǎn)品的真?zhèn)危?4.1.2 安全方面：按中國藥典中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究制定技術(shù)要求（國家藥典委員會）中的規(guī)定，注重中藥安全性檢測方法和指標(biāo)的建立和完善，加強(qiáng)對重金屬及有害元素、殘留溶劑、微生物等外源污染物的檢測； 4.1.3 產(chǎn)品質(zhì)量方面：參考中國藥典2010年版及相關(guān)文獻(xiàn)資料，根據(jù)產(chǎn)品的實(shí)際功效，選定相應(yīng)的功效成分控制產(chǎn)品的質(zhì)量；4.2 規(guī)格： 市場上虎杖提取物規(guī)格有很多種，其中不同規(guī)格的產(chǎn)品在某些技術(shù)參數(shù)上有所區(qū)別，在這里只是

4、針對常用規(guī)格，即50%、98%白藜蘆醇兩種規(guī)格。4.3 技術(shù)指標(biāo)： 本標(biāo)準(zhǔn)參照中國常用天然提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參考手冊2003中白藜蘆醇產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)；歐洲藥典、美國藥典、日本藥典中對重金屬、溶劑殘留、微生物的限度要求；結(jié)合抽查全國各地50%、98%規(guī)格虎杖提取的實(shí)際檢測結(jié)果及客戶對這產(chǎn)品的技術(shù)要求，最終確定本標(biāo)準(zhǔn)的產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)。4.4 檢測方法： 本標(biāo)準(zhǔn)中粒度、干燥失重、熾灼殘?jiān)?、重金屬、微生物檢測采用中華人民共和國藥典2010版一部附錄中規(guī)定方法，溶劑殘留檢測采用中華人民共和國藥典2010版二部附錄中規(guī)定方法，白藜蘆醇含量檢測采用常用天然提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參考手冊2003中規(guī)定方法，鑒別及大黃素含量檢

5、測參照中華人民共和國藥典2010版一部正文中大黃規(guī)定方法，由于本標(biāo)準(zhǔn)中產(chǎn)品為提取物，所以在樣品溶液制備過程中直接甲醇提取溶解即可。同時(shí)對各項(xiàng)檢測方法分別進(jìn)行方法學(xué)考察、樣品測定。5 名稱、分子式、相對分子質(zhì)量及CAS編號5.1 中文名稱：白藜蘆醇。5.2 英文名稱：Resveratrol。5.3 分子式： C14H12O3。5.4 分子結(jié)構(gòu)式：5.5 分子量：228.245.6 國際食品法典委員會食品添加劑INS（International Numbering System）編號：958。5.7 CAS編號：501-36-0。6 產(chǎn)品技術(shù)要求6.1 性狀描述：50%白藜蘆醇規(guī)格的虎杖提取物呈現(xiàn)

6、黃棕色或棕褐色粉末、98%白藜蘆醇規(guī)格的虎杖提取物呈現(xiàn)白色或類白色粉末。6.2 功能：白藜蘆醇具有抑制單胺氧化酶、抗氧化、消除自由基、抗血小板聚集抗腫瘤等功效。6.3 技術(shù)指標(biāo)確定6.3.1 感官指標(biāo) 根據(jù)產(chǎn)品的生產(chǎn)要求，結(jié)合產(chǎn)品的實(shí)際情況進(jìn)行描述，能直觀的體現(xiàn)產(chǎn)品的外在質(zhì)量。經(jīng)對10批規(guī)格為50%白藜蘆醇樣品實(shí)際觀察，樣品多為黃棕色或棕褐色粉狀，對10批規(guī)格為98%白藜蘆醇樣品實(shí)際觀察，樣品多為白色或類白色粉狀。6.3.2 鑒別 白藜蘆醇來源廣，主要存在于葡萄屬、蓼屬、花生屬、藜蘆屬等21個(gè)科、31個(gè)屬的至少72種植物中，其中包括虎杖、決明、桑樹等常用要用植物，以及葡萄、花生等農(nóng)作物。為防止

7、其他摻假產(chǎn)品替代虎杖提取物，此標(biāo)準(zhǔn)中添加虎杖提取物的鑒別項(xiàng)，在中華人民共和國藥典2010版一部正文虎杖中，大黃素為虎杖的一個(gè)鑒別成分，故在此標(biāo)準(zhǔn)中采用大黃素檢出與否作為虎杖提取物的鑒別指標(biāo)，而規(guī)格98%白藜蘆醇純度很高，故在此標(biāo)準(zhǔn)中鑒別項(xiàng)只針對50%規(guī)格的虎杖提取物，98%不在鑒別項(xiàng)范圍內(nèi)。 在此標(biāo)準(zhǔn)中，考慮大黃素的瀉下活性，有對虎杖提取物中大黃素含量的限度要求，所以虎杖提取物中大黃素的含量測定同時(shí)作為其鑒別項(xiàng)6.3.3 粒度 按照中國藥典2010版一部附錄 B第二法對98%樣品進(jìn)行過篩分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)98%白藜蘆醇樣品在篩動過程中由于很輕又很容易結(jié)團(tuán)，如果不借助外力基本上很難過篩下去，考慮98%

8、白藜蘆醇的特殊性，在此標(biāo)準(zhǔn)中沒有98%規(guī)格的過篩分析。 按照中國藥典2010版一部附錄 B第二法規(guī)定方法對10批樣品（50%規(guī)格）進(jìn)行測定，測定結(jié)果見表1：表1 虎杖提取物（50%規(guī)格）粒度測定結(jié)果生產(chǎn)廠家批號規(guī)格80目過篩率（%）廠家AA-150%白藜蘆醇97.3廠家AA-250%白藜蘆醇96.6廠家BB-150%白藜蘆醇97.1廠家BB-250%白藜蘆醇96.9廠家CC-150%白藜蘆醇95.4廠家DD-150%白藜蘆醇98.1廠家DD-250%白藜蘆醇96.2廠家EE-150%白藜蘆醇94.8廠家FF-150%白藜蘆醇95.7廠家GG-150%白藜蘆醇96.7結(jié)果表明： 50%白藜蘆醇過

9、80目篩的通過率大部分在95%以上，為了更好控制產(chǎn)品質(zhì)量，將粒度的限度確定為：95%6.3.4 干燥失重 按照中國藥典2010版一部附錄 G規(guī)定方法對20批樣品進(jìn)行測定，測定結(jié)果見表2：表2 虎杖提取物干燥失重測定結(jié)果生產(chǎn)廠家批號規(guī)格干燥失重（%）廠家AA-150%白藜蘆醇2.94廠家AA-250%白藜蘆醇2.69廠家BB-150%白藜蘆醇3.42廠家BB-250%白藜蘆醇2.77廠家CC-150%白藜蘆醇5.16廠家DD-150%白藜蘆醇4.08廠家DD-250%白藜蘆醇3.13廠家EE-150%白藜蘆醇6.79廠家FF-150%白藜蘆醇4.27廠家GG-150%白藜蘆醇2.29廠家AA-3

10、98%白藜蘆醇0.43廠家BB-398%白藜蘆醇0.51廠家BB-498%白藜蘆醇0.57廠家BB-598%白藜蘆醇0.56廠家CC-298%白藜蘆醇0.81廠家CC-398%白藜蘆醇0.74廠家DD-398%白藜蘆醇0.60廠家FF-298%白藜蘆醇0.55廠家HH-198%白藜蘆醇1.24廠家II-198%白藜蘆醇0.36結(jié)果表明： 50%白藜蘆醇的干燥失重絕大部分在5%以下，為了更好控制產(chǎn)品質(zhì)量，將干燥失重的限度確定為：不得過5.0%。 98%白藜蘆醇的干燥失重絕大部分在1%以下，為了更好控制產(chǎn)品質(zhì)量，將干燥失重的限度確定為：不得過1.0%。6.3.5 熾灼殘?jiān)凑罩袊幍?010版一部

11、附錄 J規(guī)定方法對20批樣品進(jìn)行測定，測定結(jié)果見表3：表3 虎杖提取物熾灼殘?jiān)鼫y定結(jié)果生產(chǎn)廠家批號規(guī)格熾灼殘?jiān)?）廠家AA-150%白藜蘆醇2.29廠家AA-250%白藜蘆醇2.30廠家BB-150%白藜蘆醇3.61廠家BB-250%白藜蘆醇1.11廠家CC-150%白藜蘆醇4.47廠家DD-150%白藜蘆醇3.45廠家DD-250%白藜蘆醇2.07廠家EE-150%白藜蘆醇1.64廠家FF-150%白藜蘆醇2.53廠家GG-150%白藜蘆醇5.16廠家AA-398%白藜蘆醇0.23廠家BB-398%白藜蘆醇0.16廠家BB-498%白藜蘆醇0.43廠家BB-598%白藜蘆醇0.27廠家CC

12、-298%白藜蘆醇0.74廠家CC-398%白藜蘆醇0.19廠家DD-398%白藜蘆醇0.24廠家FF-298%白藜蘆醇0.30廠家HH-198%白藜蘆醇0.46廠家II-198%白藜蘆醇0.21結(jié)果表明： 50%白藜蘆醇的熾灼殘?jiān)^大部分在5%以下，為了更好控制產(chǎn)品質(zhì)量，將熾灼殘?jiān)南薅却_定為：不得過5.0%。 98%白藜蘆醇的熾灼殘?jiān)^大部分在0.5%以下，為了更好控制產(chǎn)品質(zhì)量，將熾灼殘?jiān)南薅却_定為：不得過0.5%。6.3.6 重金屬及有害元素 中藥中殘留的重金屬及有害元素問題，已是中藥行業(yè)十分關(guān)注的問題之一。對于虎杖提取物這種廣泛用于保健食品、藥品中的原料，若重金屬及有害元素超標(biāo)，長期

13、服用勢必會產(chǎn)生重金屬及有害元素的蓄積，危害身體健康。因此，對重金屬及有害元素的控制是十分必要的。 按照中國藥典2010版一部附錄 B第一法（原子分光光度法）對部分地區(qū)和廠家的虎杖原料及20批虎杖提取物樣品進(jìn)行測定，測得結(jié)果見表4. 通過檢索、查閱相關(guān)藥典及文獻(xiàn)資料，匯整了部分國家和地區(qū)對中藥重金屬及有害元素的限度標(biāo)準(zhǔn)，具體見表5。表4 虎杖原藥材及虎杖提取物的重金屬及有害元素測定結(jié)果表 注：檢測限為0.01mg/kg a 虎杖原藥材測定結(jié)果表來源鉛（mg/kg）鎘（mg/kg）砷（mg/kg）汞（mg/kg）銅（mg/kg）廣西（自購）0.37未檢出0.110.027.07江西（自購）0.25

14、未檢出0.080.053.96四川（自購）0.10未檢出0.05未檢出4.64貴州（自購）0.38未檢出0.04未檢出3.23廠家A0.33未檢出0.120.024.74廠家B0.24未檢出0.050.025.50廠家C0.31未檢出0.310.045.91廠家D0.25未檢出0.060.044.65 b 虎杖提取物的測定結(jié)果表生產(chǎn)廠家批號規(guī)格鉛（mg/kg）鎘（mg/kg）砷（mg/kg）汞（mg/kg）銅（mg/kg）廠家AA-150%白藜蘆醇0.77未檢出0.020.025.98廠家AA-250%白藜蘆醇0.45未檢出0.06未檢出4.46廠家BB-150%白藜蘆醇0.67未檢出0.03

15、未檢出3.12廠家BB-250%白藜蘆醇1.24未檢出0.090.012.23廠家CC-150%白藜蘆醇0.33未檢出0.030.014.72廠家DD-150%白藜蘆醇0.57未檢出0.07未檢出6.35廠家DD-250%白藜蘆醇0.58未檢出0.030.021.47廠家EE-150%白藜蘆醇0.11未檢出0.01未檢出7.75廠家FF-150%白藜蘆醇1.03未檢出0.50未檢出0.92廠家GG-150%白藜蘆醇0.36未檢出0.02未檢出2.27廠家AA-398%白藜蘆醇未檢出未檢出0.020.016.39廠家BB-398%白藜蘆醇0.47未檢出0.120.015.02廠家BB-498%白

16、藜蘆醇0.32未檢出0.030.013.61廠家BB-598%白藜蘆醇0.83未檢出0.230.013.55廠家CC-298%白藜蘆醇0.37未檢出0.06未檢出4.16廠家CC-398%白藜蘆醇0.39未檢出0.34未檢出3.88廠家DD-398%白藜蘆醇0.76未檢出1.03未檢出4.43廠家FF-298%白藜蘆醇0.44未檢出0.02未檢出5.32廠家HH-198%白藜蘆醇0.18未檢出0.09未檢出4.16廠家II-198%白藜蘆醇0.30未檢出0.030.013.82表5 部分國家和地區(qū)對中藥重金屬及有害元素的限度標(biāo)準(zhǔn)11-19（mg/kg）國家/地區(qū)使用對象鉛（Pb）汞（Hg）砷（

17、As）鎘（Cd）銅（Cu）中國大陸進(jìn)出口藥用植物及制藥50.220.320香港中藥材50.220.3-澳門外用中成藥及傳統(tǒng)藥物200.55-150臺灣中藥材302-2-新加坡中成藥200.55-150韓國草藥50.230.3-日本藥材20-2-英國草藥5-5-加拿大草藥材100.250.3-膳食補(bǔ)充劑原料10-50.3-美國草藥產(chǎn)品10-0.3-飲食補(bǔ)充劑原料10-50.3-WHO草藥10-0.3- 參照部分國家和地區(qū)對中藥重金屬及有害元素的限度標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合虎杖原料、虎杖提取物樣品的有害元素檢測結(jié)果，最終確定虎杖提取物重金屬及有害元素的限度標(biāo)準(zhǔn)為：鉛（Pb）3.0mg/kg 、汞（Hg）0.2m

18、g/kg 、砷（As）2.0mg/kg 、鎘（Cd）0.3mg/kg 、銅（Cu）20mg/kg 。6.3.7 農(nóng)藥殘留 農(nóng)藥的使用大大減少了食物中存在的昆蟲，真菌和霉菌，藥用植物中的農(nóng)藥殘留是在耕作過程中噴灑農(nóng)藥，改良土壤，在貯藏過程中使用薰蒸劑而積聚起來的。但考慮農(nóng)藥殘留品種繁多，對于不同的用途農(nóng)殘限度要求差別很大，且不同國家和地區(qū)對其限度要求也不一，因此在這里不體現(xiàn)農(nóng)殘的限制，對于出口產(chǎn)品，應(yīng)符合出口目的國相關(guān)法規(guī)的規(guī)定；對于進(jìn)口產(chǎn)品，依據(jù)不同用途，應(yīng)符合我國相關(guān)法規(guī)的規(guī)定。6.3.8 溶劑殘留 虎杖提取物是以乙醇提取，經(jīng)提純、濃縮干燥而得，所以在產(chǎn)品中有甲醇乙醇存在的可能，為確保提取物

19、使用安全，參照中國藥典（2010年版二部）殘留溶劑測定法（附錄 P第一法）對20批樣品進(jìn)行甲醇乙醇?xì)埩舻臋z測，檢測結(jié)果見表6。表6 虎杖提取物的甲醇乙醇測定結(jié)果表生產(chǎn)廠家批號規(guī)格甲醇?xì)埩簦╩g/kg）乙醇?xì)埩簦╩g/kg）廠家AA-150%白藜蘆醇10.917.08廠家AA-250%白藜蘆醇24.9419.21廠家BB-150%白藜蘆醇11.2613.51廠家BB-250%白藜蘆醇54.3245.32廠家CC-150%白藜蘆醇25.2729.18廠家DD-150%白藜蘆醇19.1316.45廠家DD-250%白藜蘆醇27.1120.31廠家EE-150%白藜蘆醇20.3941.92廠家FF-1

20、50%白藜蘆醇49.6257.12廠家GG-150%白藜蘆醇24.3530.43廠家AA-398%白藜蘆醇8.7425.79廠家BB-398%白藜蘆醇7.2141.82廠家BB-498%白藜蘆醇13.8921.85廠家BB-598%白藜蘆醇5.7024.70廠家CC-298%白藜蘆醇4.1564.15廠家CC-398%白藜蘆醇6.483.79廠家DD-398%白藜蘆醇7.174.51廠家FF-298%白藜蘆醇8.0319.02廠家HH-198%白藜蘆醇16.1135.21廠家II-198%白藜蘆醇9.0430.07 查閱相關(guān)藥典，其中對藥品中甲醇、乙醇的限度規(guī)定均為甲醇?xì)埩舨怀^3000ppm

21、、乙醇?xì)埩舨怀^5000ppm；但植物提取物屬于食品，所以對甲醇乙醇的要求更嚴(yán)格，結(jié)合對20批樣品甲醇乙醇的檢測結(jié)果及客戶對甲醇乙醇?xì)埩粝薅鹊囊笠约皬?fù)核單位對虎杖提取物中甲醇乙醇結(jié)果，為了更好控制產(chǎn)品質(zhì)量，將甲醇、乙醇的限度確定為：甲醇?xì)埩舨怀^100ppm、乙醇?xì)埩舨荒艹^500ppm。6.3.9 黃曲霉毒素 虎杖提取物是以干燥的虎杖根為原料，在加工、貯藏、運(yùn)輸?shù)冗^程中基本不易發(fā)生霉變，產(chǎn)生黃曲霉毒素，因此在這里不體現(xiàn)黃曲霉毒素的限度要求，但考慮黃曲霉毒素的高毒性，對于出口產(chǎn)品，應(yīng)符合出口目的國相關(guān)法規(guī)的規(guī)定；對于進(jìn)口產(chǎn)品，依據(jù)不同用途，應(yīng)符合我國相關(guān)法規(guī)的規(guī)定。6.3.10 微生物 植物

22、提取物下游或終端產(chǎn)品的微生物檢測是植物提取物質(zhì)量控制的重要內(nèi)容，微生物生命個(gè)體小，但危害非常嚴(yán)重，稍有不慎即會導(dǎo)致中毒甚至死亡。而植物提取物終端產(chǎn)品，特別是功能性食品、食品添加劑和植物源日用化學(xué)品等，常含有微生物生長所需要的水分、碳源和氮源，因此在貯運(yùn)過程中易使產(chǎn)品腐敗變質(zhì)；而植物提取物產(chǎn)品通常為攝入性產(chǎn)品，微生物滋生導(dǎo)致腐敗變質(zhì)的產(chǎn)品被人、畜等生物誤食以后就會導(dǎo)致疾病或中毒。植物提取物從原料采收、生產(chǎn)、貯運(yùn)及銷售各環(huán)節(jié)都可能存在微生物污染問題，因此對植物提取產(chǎn)品進(jìn)行微生物檢測，控制和減少這些過程中的污染，從而避免因污染引起的危害至關(guān)重要。 參照2010年版一部附錄 C中規(guī)定方法對20批樣品進(jìn)

23、行微生物的檢測，檢測結(jié)果見表7。 通過檢索、查閱相關(guān)藥典及文獻(xiàn)資料，匯整了部分國家對中藥微生物的限度標(biāo)準(zhǔn)，具體見表8。表7 虎杖提取物的微生物測定結(jié)果表生產(chǎn)廠家批號規(guī)格菌落總數(shù)（cfu/g）霉菌（cfu/g）酵母菌（cfu/g）大腸埃希菌（cfu/g）沙門氏菌（cfu/25g）廠家AA-150%白藜蘆醇8731010未檢出未檢出廠家AA-250%白藜蘆醇6311535未檢出未檢出廠家BB-150%白藜蘆醇8651010未檢出未檢出廠家BB-250%白藜蘆醇5672520未檢出未檢出廠家CC-150%白藜蘆醇6831010未檢出未檢出廠家DD-150%白藜蘆醇6053010未檢出未檢出廠家DD-

24、250%白藜蘆醇7021010未檢出未檢出廠家EE-150%白藜蘆醇4733010未檢出未檢出廠家FF-150%白藜蘆醇102410659未檢出未檢出廠家GG-150%白藜蘆醇5101010未檢出未檢出廠家AA-398%白藜蘆醇7413613未檢出未檢出廠家BB-398%白藜蘆醇3621010未檢出未檢出廠家BB-498%白藜蘆醇4241010未檢出未檢出廠家BB-598%白藜蘆醇5161046未檢出未檢出廠家CC-298%白藜蘆醇7134015未檢出未檢出廠家CC-398%白藜蘆醇4571320未檢出未檢出廠家DD-398%白藜蘆醇6322018未檢出未檢出廠家FF-298%白藜蘆醇3141

25、020未檢出未檢出廠家HH-198%白藜蘆醇2231010未檢出未檢出廠家II-198%白藜蘆醇5473420未檢出未檢出表8 部分國家對中藥微生物的限度標(biāo)準(zhǔn)20 21 22國家使用對象菌落總數(shù)（cfu/g）霉菌及酵母菌（cfu/g）大腸埃希菌（cfu/g）沙門氏菌（cfu/25g）中國含藥材原粉的不同制劑102 -104102未檢出未檢出白藜蘆醇103102未檢出未檢出歐洲植物藥產(chǎn)品（如提取物）104102未檢出未檢出美國植物提取物粉末104103未檢出未檢出 參照部分國家對中藥微生物的限度標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合對20批樣品的微生物檢測結(jié)果，為更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，最終確定虎杖提取物微生物的限度標(biāo)準(zhǔn)為：菌

26、落總數(shù)1000cfu/g 、霉菌及酵母菌數(shù)100cfu/g 、每1g樣品中不得檢出大腸埃希菌和每25g樣品中不得檢出沙門氏菌。6.3.11 大黃素含量 采用附錄B方法對20批樣品進(jìn)行大黃素的含量檢測，檢測結(jié)果見表9.表9 大黃素檢測結(jié)果生產(chǎn)廠家批號規(guī)格大黃素含量（%）廠家AA-150%白藜蘆醇1.81廠家AA-250%白藜蘆醇1.03廠家BB-150%白藜蘆醇1.05廠家BB-250%白藜蘆醇1.12廠家CC-150%白藜蘆醇1.65廠家DD-150%白藜蘆醇1.32廠家DD-250%白藜蘆醇0.98廠家EE-150%白藜蘆醇0.64廠家FF-150%白藜蘆醇1.47廠家GG-150%白藜蘆醇

27、1.08廠家AA-398%白藜蘆醇0.02廠家BB-398%白藜蘆醇未檢出廠家BB-498%白藜蘆醇0.07廠家BB-598%白藜蘆醇0.08廠家CC-298%白藜蘆醇1.03廠家CC-398%白藜蘆醇未檢出廠家DD-398%白藜蘆醇未檢出廠家FF-298%白藜蘆醇0.04廠家HH-198%白藜蘆醇0.01廠家II-198%白藜蘆醇0.07 虎杖提取物中主要活性成分為白藜蘆醇和大黃素，其中大黃素是屬于蒽醌類化合物，具有一定的瀉下活性，長期使用會對人體腸胃等器官照成一定的影響。結(jié)合客戶對虎杖提取物中大黃素的限量要求以及對20批樣品中大黃素含量檢測結(jié)果，為更好的控制產(chǎn)品的質(zhì)量、保證人體的健康，最終

28、確定虎杖提取物大黃素的限度標(biāo)準(zhǔn)為：規(guī)格98%白藜蘆醇中大黃素含量低于0.1%、規(guī)格50%白藜蘆醇中大黃素含量低于2.0%。6.4 技術(shù)要求：虎杖提取物技術(shù)指標(biāo)見表10。表10 虎杖提取物技術(shù)指標(biāo)項(xiàng) 目規(guī)格與指標(biāo)50%白藜蘆醇98%白藜蘆醇鑒別樣品液相色譜圖中應(yīng)出現(xiàn)大黃素色譜峰，色譜特征應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)品一致。-白藜蘆醇含量，%50 98大黃素，%2.00.1干燥失重，%5.01.0熾灼殘?jiān)?5.00.5粒度（80目篩通過率），%95-溶劑殘留甲醇，mg/kg100乙醇，mg/kg500銅（Cu），mg/kg20鉛（Pb）， mg/kg 3.0鎘（Cd），mg/kg0.3汞（Hg），mg/kg0.2砷

29、（As），mg/kg2.0菌落總數(shù)，cfu/g 1000酵母菌及霉菌，cfu/g 100大腸埃希氏桿菌，cfu/g不得檢出沙門氏菌，cfu/25g不得檢出7 檢驗(yàn)方法驗(yàn)證7.1 干燥失重 檢驗(yàn)方法采用中國藥典2010版一部附錄 G中規(guī)定方法。7.1.1 儀器 天平：感量為0.1mg，電熱恒溫干燥箱7.1.2 操作步驟 稱取1 g樣品，精確至0.0001 g，按中國藥典2010版一部附錄 G中規(guī)定方法進(jìn)行。7.1.3 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 50%白藜蘆醇（B-1）、98%白藜蘆醇（B-3）兩種規(guī)格的平行測定結(jié)果及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表11、表12。表11 虎杖提取物（50%）干燥失重平行測定結(jié)果樣品編號容器重

30、量g樣品稱樣量g容器樣品處理后重量g干燥失重%50%-170.12041.169071.24913.4550%-270.22621.092771.27953.6150%-369.64341.232170.83153.5750%-471.28441.412772.65023.3250%-570.48691.335671.23203.6950%-671.09271.179472.23203.40SRSD%3.50670.13983.9869表12 虎杖提取物（98%）干燥失重平行測定結(jié)果樣品編號容器重量g樣品稱樣量g容器樣品處理后重量g干燥失重%98%-770.30171.302271.59660

31、.56098%-869.88621.205971.08520.57298%-969.59491.305570.89310.55998%-1069.93991.136071.06890.61698%-1166.44231.219667.65440.61598%-1269.94271.295371.23030.594SRSD%0.58600.02614.45397.1.4 精密度要求 以6次平行結(jié)果計(jì)，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值不大于5%。7.2 熾灼殘?jiān)?檢驗(yàn)方法采用中國藥典2010版一部附錄 J中規(guī)定方法。7.2.1 儀器 天平：感量為0.1mg，馬弗爐7.2.2 操作步驟 稱取1 g樣品，精確至0.00

32、01 g，按中國藥典2010版一部附錄 J中規(guī)定方法進(jìn)行。7.2.3 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 50%白藜蘆醇（B-1）、98%白藜蘆醇（B-3）兩種規(guī)格的平行測定結(jié)果及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表13、表14。表13 虎杖提取物（50%）熾灼殘?jiān)叫袦y定結(jié)果樣品編號容器重量g樣品稱樣量g容器樣品灼燒后重量g熾灼殘?jiān)?50%-137.09841.036537.13553.5850%-232.68351.397432.73183.4650%-333.87291.135033.91293.5250%-435.79051.041635.82913.7150%-534.68901.321834.73783.6950%-630

33、.69131.110030.72983.47SRSD%3.57170.10833.0332表14 虎杖提取物（98%）熾灼殘?jiān)叫袦y定結(jié)果樣品編號容器重量g樣品稱樣量g容器樣品灼燒后重量g熾灼殘?jiān)?98%-732.59981.031932.60160.17498%-834.76541.421834.76790.17698%-935.63971.308035.64190.16898%-1037.57161.013837.57330.16898%-1132.75131.500532.75400.18098%-1234.30901.283734.31120.171SRSD%0.17280.00482

34、.74947.2.4 精密度要求 以6次平行結(jié)果計(jì)，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差值不大于5%。7.3 溶劑殘留 檢驗(yàn)方法采用中國藥典2010版二部附錄 P第一法。7.3.1儀器 天平：感量為0.1mg， 氣相色譜儀（FID檢測器）。7.3.2 操作步驟 稱取樣品（B-1）1.9945g，樣品（B-3）2.0021g，分別添加工作標(biāo)準(zhǔn)液0.1ml，甲醇（117.2ug/ml）、乙醇（124.3ug/ml），按中國藥典2010版二部附錄 P第一法進(jìn)行檢測，平行測定6次，并計(jì)算回收率及RSD值。7.3.3 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 50%白藜蘆醇（B-1）、98%白藜蘆醇（B-3）兩種規(guī)格的溶劑殘留加標(biāo)實(shí)驗(yàn)測定結(jié)果及相對標(biāo)準(zhǔn)偏

35、差見表15。表15 甲醇、乙醇?xì)埩舻木芏扰c回收率測定結(jié)果樣品規(guī)格標(biāo)樣加入量（ug/kg）樣品含量（ug/kg）樣品加標(biāo)測得值 （ug/kg）平均值（ug/kg）標(biāo)準(zhǔn)偏差（S）RSD%回收率（%）50%白藜蘆醇甲醇5.911.2616.97 18.13 18.1517.49 17.16 17.05 17.49170.53263.0446105.6乙醇6.213.5119.98 18.23 18.96 18.03 20.59 19.2119.16670.99015.165691.298%白藜蘆醇甲醇5.87.2114.08 13.87 14.22 12.65 13.64 13.2313.5150

36、0.56664.1926108.7乙醇6.241.8248.97 50.23 47.89 47.56 48.76 46.8548.37671.19742.4751105.8 結(jié)果表明：兩種規(guī)格的樣品溶劑殘留（甲醇、乙醇）加標(biāo)回收率范圍在91.2%-108.7%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）在2.48%-5.16%之間，具有良好的精密度和準(zhǔn)確度。7.4 重金屬及有害元素 檢驗(yàn)方法采用中國藥典2010版一部附錄 B第一法。7.4.1 儀器 天平：感量為0.1mg， 原子吸收光譜儀（石墨爐、火焰、氫化物發(fā)生器）。7.4.2 操作步驟 稱取0.5 g樣品，精確至0.0001 g，分別添加各工作標(biāo)準(zhǔn)液，

37、按中國藥典2010版一部附錄 B中規(guī)定方法進(jìn)行，平行測定6次，并計(jì)算回收率及RSD值。7.4.3 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 50%白藜蘆醇（B-1）、98%白藜蘆醇（B-3）兩種規(guī)格的精密度及回收率測定結(jié)果見表16。表16 有害元素的精密度與回收率測定結(jié)果樣品規(guī)格元素加入量（mg/kg）樣品含量（mg/kg）樣品加標(biāo)測得值 （mg/kg）平均值（mg/kg）標(biāo)準(zhǔn)偏差（S）RSD%回收率（%）50%白藜蘆醇Pb1.000.671.69 1.71 1.68 1.65 1.66 1.721.6850.02741.6253101.5Cr0.20未檢出0.224 0.214 0.2190.238 0.237 0.2

38、27 0.2260.00964.2415113.0As0.200.030.241 0.235 0.2390.227 0.226 0.2230.22980.00903.925299.9Hg0.20未檢出0.213 0.206 0.1970.214 0.195 0.1940.20320.00914.4611101.6Cu10.03.1213.01 13.23 13.0912.77 13.35 12.8513.05000.22091.692899.398%白藜蘆醇Pb1.000.471.47 1.56 1.52 1.46 1.35 1.471.46670.07204.910399.7Cr0.20未檢

39、出0.234 0.214 0.2290.218 0.237 0.2310.22720.00924.0282113.6As0.200.120.331 0.299 0.315 0.304 0.328 0.3330.31830.01464.573099.2Hg0.200.010.209 0.207 0.2310.217 0.209 0.2200.21550.00924.2506102.8Cu10.05.0214.78 14.96 15.1315.04 14.91 16.1415.16000.49453.2618101.4 結(jié)果表明：Pb、Cd、As、Hg、Cu五種元素的加標(biāo)回收率范圍在99.2%-1

40、13.6%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）在1.62%-4.91%之間，具有良好的精密度和準(zhǔn)確度。7.4.4 精密度要求 取兩次平行測定結(jié)果的算術(shù)平均值為測定結(jié)果。兩次平行測定結(jié)果的絕對差值，鉛應(yīng)不大于算術(shù)平均值的20%，鎘應(yīng)不大于算術(shù)平均值的10%，砷應(yīng)不大于算術(shù)平均值的15%，汞應(yīng)不大于算術(shù)平均值的20%，銅應(yīng)不大于算術(shù)平均值的10%。7.5 白藜蘆醇含量檢測1 檢驗(yàn)方法參照常用天然提取物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)參考手冊2003中白藜蘆醇含量檢測的方法。7.5.1 儀器：使用島津SPD-15C高效液相色譜儀，紫外檢測器。7.5.2 白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)品：白藜蘆醇（sigma），純度98.0%（HPLC）。7.5.

41、3 色譜條件a) WondaSil C18 5um 4.6*250mm；b) 流動相：乙腈-水（27:73，v/v）溶液，經(jīng)0.45 µm濾膜過濾、超聲備用；c) 柱溫：室溫；d) 檢測波長：303 nm； e) 流速：1.2mL/min；f) 進(jìn)樣量：10 µL。7.5.4 分析步驟7.5.4.1 對照品溶液的制備 精密稱取白藜蘆醇對照品約10mg，置于100mL棕色量瓶中，加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度，即得0.10mg/ml對照品溶液。7.5.4.2 供試品溶液的制備 取虎杖提取物粉末適量（依含量而定），精密稱定，置于100mL棕色量瓶中，加入約80mL甲醇，超聲提取15

42、min后取出，放置至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。用0.45m微孔濾膜過濾，濾液置于棕色試樣瓶中，即得供試溶液。7.5.5 測定方法 別精密吸取對照品溶液與供試品溶液10µL注入液相色譜儀，按外標(biāo)法測定含量。7.5.6 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果 50%白藜蘆醇（B-1）、98%白藜蘆醇（B-3）兩種規(guī)格的10次平行測定結(jié)果及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表17，原始色譜圖見附錄1、附錄2。表17 白藜蘆醇含量10平行測定結(jié)果規(guī)格樣品編號稱樣量mg白藜蘆醇峰面積測定結(jié)果 （%）50%白藜蘆醇16.8495380750.326.6489940951.337.7563545250.6412.5953156352.75

43、11.4882308253.5613.01017000154.0712.1882823250.486.6505981953.0910.9797649550.5106.8496950550.5SRSD%51.681.462.8298%白藜蘆醇117.5719852199.3127.6724129798.613 8.1771671098.61410.4994388899.01510.61017199699.31610.71019558898.6176.2593750299.1187.3695324198.61910.2980280799.5206.7642472599.3SRSD%98.990.3

44、60.377.5.7 色譜系統(tǒng)穩(wěn)定性試驗(yàn) 取白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)溶液，連續(xù)進(jìn)樣5針，分別計(jì)算： 1）重復(fù)性：5次測試值的峰面積及保留時(shí)間的RSD值，以白藜蘆醇計(jì)，峰面積的RSD值應(yīng)不高于1.0%，保留時(shí)間的RSD值應(yīng)不高于2.0%。 2）拖尾因子：以白藜蘆醇計(jì)應(yīng)不高于2.0。 3）理論塔板數(shù)：以白藜蘆醇計(jì)應(yīng)不低于2000。 結(jié)果見表18、表19，圖譜見附錄3。表18 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果樣品編號白藜蘆醇峰面積保留時(shí)間min169903057.477269460617.477370710167.474469461327.472570839567.479SRSD%700749466551.20.957.4758

45、0.00280.04表19 色譜系統(tǒng)穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果編 號項(xiàng)目結(jié)果15次測試峰面積的RSD值0.95%25次測試保留時(shí)間的RSD值0.04%3拖尾因子0.84理論塔板數(shù)153197.5.8 線性范圍 配制不同濃度的白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在上述色譜條件下，10l進(jìn)樣分析，以白藜蘆醇（resveratrol）峰面積為縱坐標(biāo)，以白藜蘆醇溶液濃度為橫坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng)不低于0.9950。 白藜蘆醇線性范圍結(jié)果見表20、表21。表20 白藜蘆醇線性范圍試驗(yàn)結(jié)果樣品編號白藜蘆醇濃度mg/ml白藜蘆醇峰面積線性方程相關(guān)系數(shù)R210.02432387411y=96213629.6x-8297.

46、4R2=0.999820.0486463712430.0729695417540.0972930748450.121511732187表21 白藜蘆醇標(biāo)準(zhǔn)曲線7.5.9 檢測限和定量限 用濃度為0.0243mg/ml的虎杖提取物標(biāo)準(zhǔn)溶液各進(jìn)樣3次。按照下列公式分別計(jì)算定量限和檢測限： 其中QL-定量限D(zhuǎn)L-檢測限=三次進(jìn)樣響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差S=標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率 檢測限和定量限結(jié)果見表22。表22 白藜蘆醇檢測限和定量限樣 品編 號白藜蘆醇峰面積標(biāo)準(zhǔn)差標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率檢測限ug/ml定量限ug/ml1236418822396.1296213629.60.772.3322407954323943277.5.1

47、0 回收率試驗(yàn) 分別取已知含量的虎杖提取物（50%、98%白藜蘆醇兩種規(guī)格）加入一定量的白藜蘆醇對照品，配制成適宜的濃度，每個(gè)濃度配制兩份，進(jìn)行HPLC分析。以白藜蘆醇計(jì)，回收率結(jié)果應(yīng)在90%-110%之間。回收率結(jié)果分別見表23。表23 白藜蘆醇回收率試驗(yàn)結(jié)果樣品編號加入量（mg）樣品含量（mg）樣品加標(biāo)測得值（mg）回收率（%）50%-13.7310.3813.6195.250%-24.1511.8315.3694.850%-33.829.4713.71104.450%-43.2410.4613.3196.350%-53.4412.7116.56103.250%-63.928.6712.62100.398%-1