TH1TH2在慢性丙型肝炎發(fā)病機制中的作用

1、TH1/TH2在慢性丙型肝炎發(fā)病機制中的作用        作者：段國榮 周永興 聶青和 賈戰(zhàn)生 馮志華 謝玉梅 【關(guān)鍵詞】 肝炎 關(guān)鍵詞: 肝炎，乙型;肝炎，丙型;細胞活素類;Th1/Th2 摘 要:目的 研究Th1/Th2變化在慢性丙型肝炎發(fā)病機制中的作用. 方法 采用雙抗體酶聯(lián)分析法檢測了20例正常人，35例慢性丙型肝炎，30例慢               &

2、#160;                 作者：段國榮周永興聶青和賈戰(zhàn)生馮志華謝玉梅  【關(guān)鍵詞】  肝炎 關(guān)鍵詞: 肝炎，乙型;肝炎，丙型;細胞活素類;Th1/Th2  摘 要:目的  研究Th1/Th2變化在慢性丙型肝炎發(fā)病機制中的作用. 方法  采用雙抗體酶聯(lián)分析法檢測了20例正常人，35例慢性丙型肝炎，30例慢性乙型肝炎患者血清中的IFN-，IL-2，IL-4和IL-6的水平.

3、 結(jié)果  慢性丙型肝炎組Th2類細胞因子（IL-4，IL-6）水平明顯高于正常對照組（P<0.05），Th1類細胞因子水平IL-2也增高（P<0.05），然而，Th1類細胞因子IFN-水平有增加趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）.Th2類細胞因子水平比Th1類細胞因子水平高. 結(jié)論  Th2類細胞因子水平增高以及由此引起的Th1/Th2比值下降可能與慢性丙型肝炎的病程持續(xù)有關(guān).             Keywords:hepatitis B;h

4、epatitis C;cytokines;Th1/Th2      Abstract:AIM To study the roles of Th1and Th2cy-tokines in chronics HCV infection.METHODS Serum levels of Th1cytoines，interferon gamma（IFN-gammn）and inter-leukin（IL）-2，and Th2cytokines，IL-4and IL-6，were mea-sured by using enzyme-linked immunosorb

5、ent assay.Thirty-five individuals with chronic HCV infection，20healthy sub-jects as normal controls and30chronic HBV infected patients as disease controls were observed.RESULTS Th2cytokines（IL-4and IL-6）significantly increased in chronic HCV infect-ed patients compared with normal controls（P<0.05

6、）.Simi-larly，the levels of Th1cytokine（IL-2）also rose in individu-als with chronic HCV infection as compared with normal con-trols（P<0.05）.However，Th1cytokine IFN-gamma level slightly increased，but there was no difference between chronic HCV infection and normal controls（P>0.05）.CONCLUSION Lev

7、els of Th2cytokines are higher than Th1cytokine in HCV infection.This suggests that there might exist a low ratio of Th1/Th2in chronic HCV infected patients and an enhanced Th2responses during HCV infec-tion，which may partly be responsible for the persistence of HCV infection.    

8、0;  0 引言       研究表明，感染性疾病、自身免疫性疾病、過敏性疾病及移植排斥反應(yīng)等與Th1/Th2失衡有關(guān)1 .近年來有關(guān)細胞因子在肝炎病毒免疫中的作用研究較多，但仍存在一些問題.Woitas等2 研究了10例健康者和10例HCV患者，用C區(qū)抗原和C區(qū)的5個多肽刺激外周血單個核細胞（PBMC），前者主要產(chǎn)生Th1類細胞因子，后者主要產(chǎn)生Th2類細胞因子，表明HCV感染慢性化的原因與缺乏Th1類細胞因子有關(guān).然而，F(xiàn)errari等3 的研究結(jié)果則發(fā)現(xiàn)，慢性丙肝患者外周血很容易得到HCV特異性CD4 ，CD8 反應(yīng)，并且Th1

9、類細胞因子占優(yōu)勢.由此可見，HCV感染中細胞因子的作用還有待證實.我們通過檢測血清中的IFN-，IL-2，IL-4和IL-6的表達水平，觀察Th1/Th2變化，探討其在慢性丙型肝炎發(fā)病中的作用，為今后尋找調(diào)節(jié)和平衡Th1/Th2的措施，指導(dǎo)臨床治療提供實驗的證據(jù).現(xiàn)將結(jié)果報告如下.       1 對象和方法       1.1 對象  健康獻血員20（男15，女5）例，為正常對照（對照血清標(biāo)本來自本校唐都醫(yī)院獻血科，肝功正常，肝炎病毒標(biāo)志物陰性），平均年齡30（2535）歲.慢性乙型

10、肝炎（中度）30（男15，女15）例作為疾病對照，平均年齡32.5（2441）歲.慢性丙型肝炎（中度）35（男20，女15）例，平均年齡31（2339）歲.65例肝炎血清標(biāo)本來自本校唐都醫(yī)院感染病科門診及住院患者，診斷符合1995年（北京）第五次全國傳染病與寄生蟲病學(xué)術(shù)會議修定的診斷標(biāo)準(zhǔn).       1.2 方法  試劑:IFN-檢測試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司，批號991225;IL-2，IL-4和IL-6檢測試劑盒購自上海森雄實業(yè)有限公司，批號0009089.方法:IFN-，IL-2，IL-4和IL-6檢測采用雙抗體夾心酶

11、聯(lián)分析法.從已平衡至室溫的密封袋中取出所需板條，分別將標(biāo)本及不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品（100L/孔）加入相應(yīng)孔中，然后再加入生物素化抗體工作液（50L/孔）和酶結(jié)合物（2025）共同孵育120min.洗板3次.先后加入底物A，B各100L/孔，避光置室溫1030min.加入終止液50L/孔，混勻后即刻在ELISA讀數(shù)儀上測量A450值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并測定各血清標(biāo)本中IFN-，IL-2，IL-4和IL-6的濃度（ngL-1 ）.以IFN-濃度代表Th1，IL-4濃度代表Th2，從而計算Th1與Th2的比值.統(tǒng)計學(xué)處理:采用基于秩次的非參數(shù)檢驗等.     

12、0; 2 結(jié)果       2.1 正常對照組、乙肝組、丙肝組患者血清四種細胞因子的水平  見Tab1.       表1 正常對照組、乙肝組、丙肝組患者血清四種細胞因子的水平略                 2.2 對照組、乙肝組、丙肝組的Th1/Th2比值  見Fig1.     

13、圖1 略  3 討論       HCV是一種RNA病毒，是導(dǎo)致輸血后肝炎和非甲非乙型肝炎的主要病原，呈世界性流行.大約50%90%的患者病程轉(zhuǎn)為慢性，其中，分別有8%46%和11%19%發(fā)展為肝硬化和肝細胞肝癌4 .相比之下，約10%HBV感染者病程轉(zhuǎn)為慢性.可見，慢性化率高是HCV感染的主要臨床特征之一.有關(guān)丙型肝炎慢性化機制目前尚不明了.一般認為，HCV在體內(nèi)的持續(xù)感染是由病毒和機體免疫狀態(tài)兩方面的因素決定的.就病毒因素而言，典型的HCV感染為低滴度病毒血癥，對機體的刺激性小，不足以引起機體的免疫應(yīng)答5 ;由HCV高度變異性所產(chǎn)

14、生的大量準(zhǔn)種可逃避宿主的免疫攻擊6 ;HCV不同基因型引起的免疫應(yīng)答的強度不盡相同7 .HCV1b型雖有較強的復(fù)制能力，但其抗原表達能力差，所誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫反應(yīng)較為低下，因而有利于HCV的持續(xù)感染.至于宿主的免疫應(yīng)答，盡管HCV誘導(dǎo)產(chǎn)生了中和抗體，但是由于HCV的高度變異性，此抗體對HCV的清除作用不大6，8 .細胞免疫應(yīng)答，尤其是Th1，Th2細胞免疫應(yīng)答則影響著感染的結(jié)局.     輔助性T淋巴細胞根據(jù)其分泌細胞因子的不同，可將其分為Th1和Th2兩個亞群9 .Th1亞群分泌IFN-，IL-2，LT-等，主要參與細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，有利于病毒清除.T

15、h2亞群分泌IL-4，IL-5，IL-6等，主要促進體液免疫反                 輔助性T淋巴細胞根據(jù)其分泌細胞因子的不同，可將其分為Th1和Th2兩個亞群9 .Th1亞群分泌IFN-，IL-2，LT-等，主要參與細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，有利于病毒清除.Th2亞群分泌IL-4，IL-5，IL-6等，主要促進體液免疫反應(yīng).      Kobayashi等10 通過對慢性丙型肝炎（CHC）患

16、者和健康對照組血循環(huán)中的CD4+ T淋巴細胞（產(chǎn)生IFN-或IL4）計數(shù)發(fā)現(xiàn):在體外將CD4+ T淋巴細胞用抗CD3 抗體刺激后，CHC患者的Th1細胞數(shù)量明顯低于對照組，而Th2細胞數(shù)量則明顯高于對照組.提示CHC患者的Th2細胞占優(yōu)勢.Fan等11 通過檢測CHC患者血清Th1類、Th2類細胞因子水平，也提示CHC患者Th2細胞占優(yōu)勢.Eckels等12 應(yīng)用合成的非結(jié)構(gòu)蛋白NS3研究CHC患者的Th反應(yīng)，結(jié)果Th2類細胞占優(yōu)勢，Th1類細胞低下.Tsai等13 分析了重組HCV抗原刺激對急性丙型肝炎患者外周血CD4 +T淋巴細胞增殖及分泌細胞因子的影響.提示Th2細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)在HC

17、V感染慢性化中起著重要作用. 我們研究顯示（Tab1），慢性丙型肝炎組Th1類細胞因子水平IFN-無明顯變化，IL-2水平比正常高，而Th2類細胞因子水平IL-4，IL-6明顯高于正常對照組.由此，Th2類細胞因子水平較Th1類細胞因子水平高.Fig1顯示，Th1/Th2比值明顯低于正常對照組.與文獻報道基本一致.慢性丙型肝炎存在Th1/Th2失衡，Th2細胞應(yīng)答可能與丙型肝炎慢性化有關(guān).      上述研究結(jié)果表明，Th1類和Th2類細胞因子失衡與CHC發(fā)病機制有關(guān).因此，外源性調(diào)節(jié)Th1，Th2的比例可能有利于CHC感染者病情的恢復(fù).問題是，根據(jù)In

18、chanspe等14 的研究結(jié)果，既然所有HCV DNA免疫原誘發(fā)強的Th1反應(yīng)，那麼，在CHC病程中，為何會出現(xiàn)Th2類細胞因子水平的增高?結(jié)合Shapiro等15 的研究，是否與HCV感染PBMC時，對Th1，Th2細胞產(chǎn)生破壞作用，前者受破壞多，影響了細胞的免疫功能，使得HCV不能被清除，導(dǎo)致感染持續(xù).      總之，深入探討Th1/Th2在慢性丙型肝炎發(fā)病中的作用，為今后HCV感染免疫治療提供一條新思路.  參考文獻:       1Prete G，Maggi E，Romagnani

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