卵巢上皮性癌組織APE1和P53的表達(dá)及其耐藥性

1、卵巢上皮性癌組織APE1和P53的表達(dá)及其耐藥性         08-10-11 15:55:00     編輯：studa20             作者：張穎，王建，辛?xí)匝啵鯑|，向德兵，林莉  【摘要】  目的： 探討脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶（APE1）基因和P53在卵巢上皮性癌中的表達(dá)相關(guān)性，探討兩者與卵巢癌化療耐藥的相關(guān)性.

2、方法： 應(yīng)用免疫組織化學(xué)法對(duì)原發(fā)性卵巢癌組織120例中脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶（APE1）和P53表達(dá)狀況進(jìn)行測(cè)定. 結(jié)果： P53表達(dá)與APE1表達(dá)強(qiáng)度和亞細(xì)胞定位無相關(guān)性（P>0.05）. APE1/p53不同表達(dá)狀態(tài)的卵巢癌組織對(duì)鉑類為基礎(chǔ)的化療敏感性有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05). 結(jié)論：APE1和P53在鉑類的耐藥性產(chǎn)生過程中發(fā)揮重要作用，對(duì)預(yù)測(cè)化療藥物敏感性具有一定的臨床指導(dǎo)價(jià)值. 【關(guān)鍵詞】  卵巢腫瘤 脫嘌呤脫嘧啶核酸內(nèi)切酶 基因 p53 DNA修復(fù)【Abstract】 AIM: To investigate the correlation between p

3、53 and apurinic/apyrimidinic endonuclease 1 (APE1) gene expressions in epithelial ovarian carcinoma and their roles in the chemoresistance of ovarian carcinoma. METHODS: The expressions of APE1 and p53 in 120 cases of primary ovarian carcinoma were determined using immunohistochemistryThe relationsh

4、ip between the expression of APE1 and clinical pathological features was analyzed. All the patients did not receive chemotherapy or radiotherapy before operation. RESULTS: All epithelial ovarian carcinomas expressed APE1.P53 gene immunoreactivity in epithelial ovarian carcinomas was present by 50.8%

5、. The location status of APE1/p53 was significantly correlated with platinum-based chemotherapy sensitivity (P<0.05)CONCLUSION: APE1 and p53 play important roles in the drug-resistance of ovarian carcinoma to platinum-based chemotherapy,so they may be used as the indicators of the chemotherapy se

6、nsitivity.【Keywords】  ovarian neoplasms；apurinic/apyrimidinic endonuclease；genes,p53；DNA repair0   引言    卵巢癌是我國(guó)最常見的婦科惡性腫瘤之一，耐藥是導(dǎo)致其化療失敗的主要原因. 脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1，APE1)具有DNA損傷修復(fù)及氧化還原雙重功能，是一種多功能蛋白，對(duì)維持DNA的穩(wěn)定和調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的表達(dá)具有重要作用. 研究表明，APE1和卵巢癌以鉑類為基礎(chǔ)

7、的化療療效和化療耐藥有相關(guān)性；此外，p53蛋白的狀態(tài)是也決定卵巢癌耐藥性的重要因素之一1. 因此，我們采用免疫組化SP法檢測(cè)卵巢癌中APE1和P53的表達(dá)相關(guān)性，分析他們與臨床化療療效及病理指標(biāo)間的關(guān)系.1    材料和方法1.1   材料   標(biāo)本：取自第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院和第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院1998-01/2007-03經(jīng)手術(shù)確診的卵巢癌初治患者120例，年齡1981（平均47.2）歲. 其中漿液性囊腺癌54例，粘液性囊腺癌35例，子宮內(nèi)膜樣癌7例,未分化腺癌24例；細(xì)胞學(xué)分級(jí)中高分化癌19例，中分化癌68例，低分化癌

8、33例. 按國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO)2003年手術(shù)病理分期標(biāo)準(zhǔn)，I期23例、期11例、期73例、期13例. 術(shù)后均給予鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療后隨訪78例，失訪24例，隨訪率65.0%，失訪病例截止日期取病例末次住院的出院日期. 試劑：濃縮型APE兔抗人mAb購(gòu)自Novus  Biologicals公司，工作濃度為15000；SP免疫組化試劑盒Power VisionTM(IgG抗體-HRP多聚體)和DAB顯色試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)公司.1.2   方法   所有組織標(biāo)本均經(jīng)甲醛固定，石蠟包埋，切片厚5 m，分別行HE染色核實(shí)診斷和SP二

9、步法免疫組化染色. 以PBS替代一抗作為陰性對(duì)照，已知APE1陽性的骨肉瘤標(biāo)本作為陽性對(duì)照. 免疫化學(xué)分析采用二步法，二甲苯脫蠟，乙醇梯度水化，30 mL/LH2O2一甲醇室溫10 min，微波抗原修復(fù)，滴加一抗，4過夜，37孵育30 min，DAB-H2O2顯色，蘇木素復(fù)染. 采用磷酸鹽緩沖液代替一抗作為免疫染色陰性對(duì)照，采用已知APE陽性的骨肉瘤標(biāo)本作為陽性對(duì)照.     將5 m石蠟切片脫蠟水化后,分別行HE染色核實(shí)診斷和SP二步法免疫組化染色. 二甲苯脫蠟，乙醇梯度水化，30 mL /LH2O2一甲醇室溫10 min，微波抗原修復(fù)，滴加一抗，4過夜，37孵

10、育30min，DAB-H202顯色，蘇木素復(fù)染. 陰性對(duì)照用PBS代替一抗，已知陽性骨肉瘤組織切片作陽性對(duì)照. 光學(xué)顯微鏡鏡下觀察，免疫陽性信號(hào)為棕黃色細(xì)小顆粒. 參照文獻(xiàn)采用半定量積分法，即對(duì)每張切片的陽性細(xì)胞率及陽性細(xì)胞著色強(qiáng)度進(jìn)行分級(jí)計(jì)分，然后根據(jù)兩項(xiàng)之和確定其陽性強(qiáng)度. 0分為陰性，1分為弱陽性，2分為陽性，3分為強(qiáng)陽性. 陽性細(xì)胞率即陽性細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞的比例，以隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)高倍視野細(xì)胞為準(zhǔn)，陽性細(xì)胞<5為0分，5%25%為1分，2650為2分，5175為3分，>75為4分，兩項(xiàng)之和13分為弱陽性，35分為中度陽性，57分為強(qiáng)陽性.     統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS13.0軟件，對(duì)計(jì)數(shù)資料應(yīng)用2檢驗(yàn)，對(duì)等級(jí)資料進(jìn)行秩和檢驗(yàn). P<0.05 為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.2   結(jié)果 2.1   卵巢癌組織中APE1和P53的表達(dá)   APE1在正常卵巢組織中為核表達(dá)，而在卵巢上皮癌組織APE1廣泛表達(dá)，亞細(xì)胞定位呈胞核表達(dá)、單純胞質(zhì)表達(dá)或核質(zhì)共同表達(dá)，且其異位染色較胞核染色顯著，胞核染色強(qiáng)弱不等. 卵巢癌組織APE1異位表達(dá)率為39.2. P53蛋白在卵巢上皮性癌組織中有一定的表達(dá)缺失，亞細(xì)胞定位為核表達(dá)，陽性表達(dá)率為50.8%. 在P53陰性表達(dá)的卵巢癌中，