參冬心寶口服液對柯薩奇病毒B3病毒性心肌炎小鼠的NK細(xì)胞及干

1、    參冬心寶口服液對柯薩奇病毒B3病毒性心肌炎 小鼠的NK細(xì)胞及干擾素活性的影響        【摘要】目的探討參冬心寶口服液在小鼠體內(nèi)免疫促進(jìn)作用，為該藥的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法以柯薩奇病毒B3型(Coxsackie virus B3, CBV3m)病毒感染10日齡乳鼠為模型，觀察了參冬心寶口服液對病毒感染急性期不同階段心肌炎小鼠自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)活性及干擾素(IFN)水平的影響。結(jié)果參冬心寶口服液能增強(qiáng)病毒感染急性期不同階段小鼠的NK細(xì)胞活性，并能

2、促進(jìn)感染小鼠體內(nèi)誘生干擾素，治療組與對照組的試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，差異具有顯著性意義(P<0.05)。結(jié)論參冬心寶口服液具有免疫促進(jìn)作用。該研究結(jié)果為臨床采用參冬心寶口服液治療病毒性心肌炎提供了佐證?！局黝}詞】參冬心寶口服液心肌炎/病毒學(xué)干擾素NK細(xì)胞Effect of Shen-dong-xin-bao oral liquid on IFN-induction and NK cell activity in CVB3m infected miceWAN Sujun, LI Jiannong,CHEN Hongshan et al. Guang An Men Hospital &

3、 The Chinese Academy of Traditional Chinese Medicine 100053 【Abstract】ObjectiveOur aim was to investigate the effect of Shen-dong-xin-bao oral liquid on IFN-induction and NK cell activity in mice with coxsackie virus B3(CVB3m) infection in different infective stages. MethodsThe level of serum interf

4、eron (IFN) and the activity of natural killer (NK) cells in CVB3m induced myocarditis in mice were determined. Natural killer cell cytolytic activity was tested by MTT method and interferon titers by 50% microcytopathic effect assay. ResultsIn the infected mice fed with 30 g/kg or 12 g/kg per day of

5、 Shen-dong-xin-bao oral administration for 10d and 20d, the mean titers of IFN were markedly higher than that in untreated infected group, P<0.05. The NK cell activity in treated infected groups was also prominently higher than that in untreated infected group, especially on 20d, P<0.05. Concl

6、usionThis results demonstrate that administration of Shen-dong-xin-bao oral liquid possesses enhancement of antiviral immunocompetente action.【Key words】Shen-dong-xin-bao oral liquidViral myocarditisInterferonNatural killer cell病毒性心肌炎的發(fā)病率臨床上與日俱增，已成為常見的心血管疾病之一。有關(guān)本病的發(fā)病與免疫的關(guān)系研究已有很大的進(jìn)展。癥狀持續(xù)不愈的病毒性心肌炎患者NK

7、細(xì)胞活性明顯較痊愈者及健康人為低1，動物實(shí)驗(yàn)也見類似報(bào)道2，說明提高機(jī)體免疫功能對病毒性心肌炎患者的恢復(fù)具有重要作用。參冬心寶口服液用于病毒性心肌炎臨床應(yīng)用受到好評，我們借助建立的小鼠Coxsackie B3病毒性心肌炎模型，觀察了該藥對NK細(xì)胞活性及IFN的作用效果。1材料和方法1.1藥物參冬心寶口服液由北沙參、麥冬、黃芪、生地、炒棗仁等組成，含量為2 g/ml生藥，由廣安門醫(yī)院藥劑科提供。1.2動物同批10日齡上海種乳鼠體重67 g，以窩(8只帶母鼠)購自軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心。1.3病毒感染病毒為Coxsackie virus B3嗜心株病毒(CVB3m)，TCID50為10/ml；

8、攻擊病毒為濾泡性口炎病毒(VSV)，TCID50為105/ml。該兩株病毒均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所提供。1.4細(xì)胞靶細(xì)胞用K562細(xì)胞，測定細(xì)胞用L929細(xì)胞。細(xì)胞按常規(guī)方法傳代，實(shí)驗(yàn)時(shí)按所需調(diào)配細(xì)胞濃度。1.5病毒感染及給藥方法實(shí)驗(yàn)共分4組，參冬心寶口服液治療組分設(shè)15 g/kg組和6 g/kg組，病毒感染對照組和正常小鼠對照組。每組2窩共16只。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日小鼠腹腔內(nèi)接種0.3 ml含105CVB3m的RPIM 1640液，正常小鼠不做任何處理，接種病毒后2h，用藥組小鼠以0.2 ml/10 g體重2次/日參冬心寶口服液灌胃治療，病毒對照組小鼠以等體積飲用水替代安慰用藥，正常小鼠自

9、然喂養(yǎng)。連續(xù)治療至急性期10天，每組殺檢8只小鼠，進(jìn)行NK細(xì)胞活性和IFN水平的測定，余小鼠繼續(xù)接受治療至20天殺檢，重復(fù)上述檢測。1.6IFN的測定采用微量細(xì)胞病變抑制法。將實(shí)驗(yàn)組和對照組鼠血清系列倍比稀釋，取0.1 ml分別加入96孔培養(yǎng)板，再加入2×106/ml L929細(xì)胞0.1 ml，37培養(yǎng)24h，以200 TCID 50 VSV攻擊。48h內(nèi)觀察細(xì)胞病變。用Reed-Muench法計(jì)算結(jié)果。1.7NK細(xì)胞活性測定將實(shí)驗(yàn)組和對照組鼠脾臟用完全1640培養(yǎng)液制成1×105/ml懸液，以K562細(xì)胞為靶細(xì)胞，參照文獻(xiàn)3，4方法進(jìn)行NK細(xì)胞活性測定。2結(jié)果2.1參冬心

10、寶口服液對CVB3m心肌炎小鼠IFN水平的影響從表1可見，參冬心寶口服液能促進(jìn)感染小鼠體內(nèi)誘生IFN，其在不同階段(10，20天)的誘生水平與病毒對照組比較，均有顯著性差異。 表1Tab.1組別Group鼠數(shù)No. ofmice每日劑量Dosage perday (g/kg)IFN滴度(U/0.1 ml)IFN titer第10天The tenthday第20天The twentiethday病毒對照Virus control16治療 Treatment1630*治療Treatment1612*正常小鼠Normal mice16*     *P<0

11、.05：與病毒對照組比較*P<0.05：As compared with virus control2.2參冬心寶口服液對CVB3m小鼠NK活性的影響在感染期不同階段，感染治療組與感染對照組比較，參冬心寶口服液均能明顯提高小鼠NK細(xì)胞活性。見表2。表2Tab.2組別Group鼠數(shù)No. ofmice每日劑量Dosage perday (g/kg)自然殺傷細(xì)胞(%)NK cell(%)第10天The tenthday第20天The twentiethday病毒對照Virus control16治療 Treatment1630*治療Treatment1612*正常小鼠Normal mice1

12、6     *P<0.05：與病毒對照組比較*P<0.05：As compared with virus control3討論細(xì)胞免疫在病毒性心肌炎發(fā)病中的作用已受到臨床上的普遍重視，Godney E K等在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，小鼠對CoxB3m病毒抵抗力不依賴T細(xì)胞功能而與NK細(xì)胞活性有一定的關(guān)系5，證明機(jī)體防御病毒感染，NK細(xì)胞是不可缺少的。而干擾素是NK細(xì)胞一種強(qiáng)大激活劑，二者在體內(nèi)有效形成IFN-NK系統(tǒng)，對病毒感染起直接作用6。本研究觀察到，中藥參冬心寶口服液對病毒感染急性期不同階段的Coxsackie B3病毒性心肌炎小鼠均具有增強(qiáng)脾臟N

13、K細(xì)胞的活性，明顯促進(jìn)其體內(nèi)誘生IFN的作用，證明了參冬心寶口服液具有免疫增強(qiáng)作用，這種作用對于抑制病毒繁殖，清除病毒及促進(jìn)病毒感染后機(jī)體恢復(fù)是十分重要的。本研究為臨床采用該藥治療病毒性心肌炎奏效，提供了有力的佐證。本研究為國家中醫(yī)藥管理局資助課題作者單位：100053北京中國中醫(yī)研究院廣安門醫(yī)院(萬素君毛艷榮)；中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)藥生物技術(shù)研究所(李建農(nóng)陳鴻珊)；中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外醫(yī)院(阮英茆張連莊) 參考文獻(xiàn)1揚(yáng)英珍，金佩英，王球達(dá)，等.Coxsackie B3病毒性心肌炎患者中天然殺傷細(xì)胞活性及.r干擾素的觀察.中華心血管病雜志，1998，16(6)：337-339.2陳小敏，陳曙霞，鄭道聲，等.柯薩奇B3m病毒性心肌炎小鼠細(xì)胞免疫.上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1992，12(4)：304-307.3王新江，李燕，谷淑燕.用MIT法檢測小鼠NK細(xì)胞活性.中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，1991，5(1)：81-83.4蔣景儀，劉玉珍，朱珉，等.中藥來源的新型免疫佐劑ASDP/ASDE3的抗病毒及誘生IFN，IL-1，IL-2的活性