超高壓液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法 - 39康復(fù)網(wǎng)

1、超高壓液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飼料中三聚氰胺高麗萍 潘紅鋒 蔡增軒 任一平浙江省疾病預(yù)防控制中心 中國(guó)浙江省杭州 310009【摘要】 本實(shí)驗(yàn)采用超高壓液相色譜-電噴霧串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）法，以多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）為掃描方式，通過對(duì)樣品預(yù)處理、色譜條件、質(zhì)譜參數(shù)等的摸索與優(yōu)化，建立了一種簡(jiǎn)單、快速并且可靠的檢測(cè)飼料中三聚氰胺的方法。本實(shí)驗(yàn)采用AcQuity UPLCTM BEH C18 (100×2.1mm I.D., 1.7µm) 分離柱，水和甲醇為流動(dòng)相。該方法靈敏高，穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度均較好，經(jīng)方法鑒定實(shí)驗(yàn)，三聚氰胺定量限（LOQ）為5.0g/

2、kg（進(jìn)樣量10L）；通過校正曲線作回歸方程，在10300ng/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r2為0.99；日內(nèi)精密度RSD值為6.98%，日間精密度RSD值為5.96；回收率為90100%。本實(shí)驗(yàn)并對(duì)基質(zhì)抑制效應(yīng)作了一定研究?！娟P(guān)鍵詞】 UPLC-MS/MS，三聚氰胺，動(dòng)物飼料1. 前言三聚氰胺(melamine)簡(jiǎn)稱三胺, 學(xué)名三氨三嗪, 別名蜜胺、氰尿酰胺、三聚酰胺, 是一種重要的氮雜環(huán)有機(jī)化工原料。三聚氰胺分子式為C3N6H6，結(jié)構(gòu)式見圖1，呈弱堿性，能溶解于甘油、吡啶、熱乙二醇、乙酸、甲醛等有機(jī)溶劑，能夠與各種酸反應(yīng)生成三聚氰胺鹽。在強(qiáng)酸和強(qiáng)堿液中，三聚氰胺發(fā)生水解，胺基逐步

3、被羥基取代，生成三聚氰胺二酰胺，三聚氰胺一酰胺和三聚氰酸，在某些微生物的代謝下，也能發(fā)生上述反應(yīng)。NH2NNH22圖1三聚氰胺(melamine)三聚氰胺作為一種塑料化工常用材料，作為食品添加劑并沒有實(shí)際作用，更沒有任何營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。但因其一個(gè)碳原子上含有3個(gè)氮，而普通蛋白質(zhì)中一個(gè)碳原子上僅含有一個(gè)氮，目前我們所常用的測(cè)蛋白質(zhì)含量方法為定氮法，是通過測(cè)定氮原子含量來推算蛋白質(zhì)含量。因此食品中添加此種物質(zhì)可以“提高”蛋白質(zhì)含量，從而降低生產(chǎn)成本，達(dá)到盈利的目的。2007年3月, 美國(guó)發(fā)生寵物食用含有三聚氰胺的食品導(dǎo)致死亡的事件，2007年4月，F(xiàn)DA公布了HPLC-UV和GC-MS檢測(cè)三聚氰胺的方法

4、。近日，在美國(guó)加利福尼亞斯坦尼斯洛斯郡的一個(gè)農(nóng)場(chǎng)的飼養(yǎng)豬的尿液里發(fā)現(xiàn)了化學(xué)成分三聚氰胺。同時(shí)，在貓、狗食用寵物飼料后中毒死亡的案例中，從回收的產(chǎn)品主原料小麥蛋白，以及病貓尿液及腎臟中也化驗(yàn)出了該物質(zhì)。目前，尚未確定三聚氰胺到底存在怎樣的毒性，但是它確實(shí)能夠使動(dòng)物腎衰竭和腎結(jié)石并導(dǎo)致死亡。在喂養(yǎng)寵物飼料的老鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的腎結(jié)石的主要成分就是三聚氰胺和尿酸，三聚氰胺就形成于尿素，因此三聚氰胺禁止用于寵物食品及動(dòng)物飼料。同時(shí)，該物質(zhì)也可能通過食物鏈影響人體的健康。美國(guó)食品和藥物管理局證實(shí)，在小麥蛋白、大米濃縮蛋白以及南非的玉米蛋白中都發(fā)現(xiàn)了三聚氰胺，而這些都是從我國(guó)進(jìn)口的寵物糧原料。該問題引起了美國(guó)的

5、強(qiáng)烈關(guān)注，也在中國(guó)境內(nèi)造成了不小的波瀾，這將在一定程度上影響我國(guó)農(nóng)作物和寵物糧原料的出口貿(mào)易。因此，為了嚴(yán)格控制寵物飼料的品質(zhì)，有必要建立一種準(zhǔn)確測(cè)定食品中三聚氰胺含量的方法?，F(xiàn)有的三聚氰胺測(cè)定方法主要有光譜法（Spectroscopy）、色譜法（Chromatographic）和色譜-質(zhì)譜（Chromatographic-MS）聯(lián)用檢測(cè)法等。1995年Martine L. Scheepers等1運(yùn)用拉曼光譜法分析了三聚氰胺甲醛樹脂中三種三聚氰胺成分，且樣品不需要任何前處理。高效液相色譜（HPLC）結(jié)合紫外檢測(cè)器法因其靈敏度高、自動(dòng)化程度高、檢測(cè)限低等優(yōu)點(diǎn)在國(guó)際上得到了最為廣泛的應(yīng)用。1990

6、年Takiko Sugita2用HPLC-UV法檢測(cè)了三聚氰胺及其三種代謝產(chǎn)物。采用Zorbax氨基柱(25cm×4.6mm I.D.，5m)，以水78乙腈水溶液和225mM磷酸鹽緩沖溶液(pH6.7)作為流動(dòng)相。在其中加入煮沸30min的4乙酸以加強(qiáng)其靈敏度，LOQ達(dá)到0.02ng/ml。2000年Robert A. Yokley等3用70/30的乙腈-碳酸銨溶液提取土壤中的三聚氰胺，離心后，再經(jīng)過處理，進(jìn)樣，用LC-UV法檢測(cè)三聚氰胺的殘留量，其LOQ為10ng/ml。色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)法是近幾年興起的新技術(shù)，與其他方法相比較具有更高的選擇性和靈敏度。1987年Toth, J.

7、P等4運(yùn)用毛細(xì)管氣相色譜-質(zhì)譜法，以阿滅凈作為內(nèi)標(biāo)，檢測(cè)了三胺嗪及其代謝物三聚氰胺。氣相分離柱為fused-silica DB-17柱(15cm × 0.32 mm)，質(zhì)譜采用EI單離子選擇模式，方法的檢測(cè)限達(dá)到了0.3ng。2005年J.V. Sancho等5應(yīng)用離子對(duì)色譜-電噴霧質(zhì)譜(LC-ESI-MS/MS)聯(lián)用技術(shù)檢測(cè)甜菜中的賽滅凈和它的代謝物三聚氰胺，由于這兩種農(nóng)藥都是弱極性堿性分子，這使檢測(cè)工作變得復(fù)雜。實(shí)驗(yàn)中，使用添加了磷酸鹽緩沖液的甲醇萃取液并高速攪拌，tridecafluoroheptanoic acid(TFHA)作為離子對(duì)試劑，萃取液只用水稀釋一倍后，便采用LC

8、-ESI-MS/MS進(jìn)行檢測(cè)分析。兩種農(nóng)藥的檢測(cè)限均低于0.01mg/kg，賽滅凈和三聚氰胺的回收率分別為92、78。LC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確度好、靈敏度高，測(cè)定時(shí)間短，可提供可靠的、精確的相對(duì)分子量和結(jié)構(gòu)信息，是測(cè)定痕量物質(zhì)的理想方法。應(yīng)用LC-MS/MS聯(lián)用技術(shù)測(cè)定食品中三聚氰胺的國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)均未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用超高壓液相色譜-電噴霧串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）法，建立了一種快速并且可靠的檢測(cè)食品中三聚氰胺的方法。本方法可適用于各種動(dòng)物飼料中三聚氰胺的測(cè)定，且具有前處理簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn)。2. 實(shí)驗(yàn)材料與方法2.1 儀器ACQUITY Ultra Performance

9、 LC液相色譜儀（Waters公司），Micromass Quattro Ultima TM Pt 質(zhì)譜儀（Waters公司），BECKMAN AvantiTMJ-20XP 高速離心機(jī)，Milli-Q水純化系統(tǒng)（法國(guó)Millipore公司），渦旋混合器，BECKMAN Allegra X-22R離心機(jī)，AUTO SCIENCE MTN-2800W氮吹儀2.2 試劑三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品 純度：99% (W/W)；甲醇，乙腈，購(gòu)于Merk公司，均為色譜純；超純水。2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：將三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品用超純水配制成濃度0.1mg/mL作為儲(chǔ)備液，在0以下避光保存。2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工

10、作液：用超純水將儲(chǔ)備液稀釋分別成10g/mL和1g/mL的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)工作液。m）；柱溫：35；樣品溫度：25 ，進(jìn)樣體積：10µL；流速：0.3mL/min；流動(dòng)相A：超純水；流動(dòng)相B：甲醇；色譜梯度洗脫條件見表1。表1 色譜梯度洗脫條件 時(shí)間（min） 流動(dòng)相A % 流動(dòng)相B%2210010022 梯度變化曲線 6 1 6 1 6 1 98 98 0 0 98 982.5 質(zhì)譜參數(shù)2.5.1 離子源：ESI+；毛細(xì)管電壓：3.00kV；錐孔電壓：35V；離子源溫度：120；RF透鏡1：50.0；光圈：0.5；RF透鏡2：0.9；錐孔反吹氣流量：50 L/hr；脫溶劑氣溫度：350

11、；脫溶劑氣流量：550L/hr；碰撞池壓力：3.0×10-3mbar。2.5.2 質(zhì)量分析器：低端分辨率LF Lens1: 12.5V；高端分辨率HM Lens1：12.5V；離子能量1：0.6；入口透鏡電壓：0V；碰撞梯度：1；出口電壓：0V；低端分辨率LF Lens2:12.5V；高端分辨率HM Lens2: 12.5V；離子能量2:2.0 eV。2.5.3 質(zhì)量條件參數(shù)詳見表2。表2 質(zhì)量條件參數(shù) 離子三聚氰胺 質(zhì)量數(shù) 碰撞能量離子源 母離子/ 定量子離子ESI+ 定性子離子ESI+2.6 樣品預(yù)處理方法準(zhǔn)確稱取0.5g樣品于50ml的離心管中，加入10mL乙腈溶液，在旋轉(zhuǎn)式搖

12、震蕩器中搖震1min。充分混勻后，將離心管置入超聲波中超聲提取5min，放入高速離心機(jī)14000rpm下離心5min，取上清液2mL，4550下氮?dú)獯蹈桑?mL甲醇溶解殘留物，渦旋混勻，15000 rpm離心10min，用0.22m微孔濾膜過濾，進(jìn)樣。3. 結(jié)果與討論3.1 色譜條件的選擇3.1.1 色譜柱的選擇由于本實(shí)驗(yàn)只需分離一種物質(zhì)，故對(duì)色譜柱的分離效率并無很高要求。但是，三聚氰胺是一種強(qiáng)極性的物質(zhì)，一般在色譜柱上的保留時(shí)間較短，而在分析樣品時(shí)，一些極性和小分子物質(zhì)會(huì)在較早時(shí)間出峰，干擾待測(cè)物。我們就需要選擇合適色譜柱使其保留時(shí)間盡可能的延長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)使用同一濃度的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用三

13、種普通MS柱與三種UPLC柱分別進(jìn)行分離（柱1：Waters Xterra C18，2.1×150mm，粒徑5m；柱2：Waters Sunfire C18，2.1×150mm，粒徑5m；柱3：Waters Antilants C18，2.1×150mm，粒徑5m；柱4：Waters ACQUITY UPLC BEH C8，2.1×100mm，粒徑1.7m；柱5：Waters ACQUITY UPLC ShieldC18，2.1×100mm，粒徑1.7m；柱6：Waters ACQUITY UPLC BEH C18，2.1×50mm，

14、粒徑1.7m），比較出峰效果（見圖2）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：采用柱4和柱5時(shí)，三聚氰胺的保留時(shí)間太短；采用柱1和柱2時(shí)，靈敏度與其他色譜柱相比顯得較低，故不采用這4種柱子。從圖4中看出，柱3和柱6的分離效果并無太大差異，而兩者的信噪比也相接近。普通MS柱與UPLC柱相比粒徑大，壓力小，柱填料粒徑為5m，而 UPLC柱僅為1.7m，單位體積內(nèi)的表面積大大增加，使柱效顯著提高，盡管長(zhǎng)度比普通MS柱縮短了三分之一，但仍然能得到完全的分離，而且又能大大縮短分離所需的時(shí)間。因此超高壓液相色譜柱具有極高的柱效和極快的分離速度，而且其最適流速0.20.3mL/min與電噴霧離子化方式流速的要求恰好相符。故本實(shí)驗(yàn)選

15、擇了柱6即Waters ACQUITY UPLC BEH C18（2.1×50mm，粒徑1.7m）柱用于分離。圖2 色譜柱的選擇3.1.2 流動(dòng)相的選擇流動(dòng)相的選擇除考慮色譜系統(tǒng)分離效果外，同時(shí)必須注意組分進(jìn)入質(zhì)譜前離子化的效率，以獲得最佳的分離度和最高的靈敏度。本實(shí)驗(yàn)采用同一濃度的三聚氰胺溶液，比較了不同的流動(dòng)相（見圖3）。由于三聚氰胺易溶于甲醇和乙腈，本實(shí)驗(yàn)分別選擇甲醇（a）和乙腈（b）作為流動(dòng)相B，從圖3中可以看出，選用甲醇和乙腈作流動(dòng)相B時(shí)，兩者相對(duì)豐度相近，靈敏度相同，但是保留時(shí)間存在差別，用甲醇作流動(dòng)相時(shí)三聚氰胺的保留時(shí)間明顯長(zhǎng)于用乙腈作流動(dòng)相時(shí)的保留時(shí)間。故本實(shí)驗(yàn)選擇甲

16、醇作為流動(dòng)相B。分別選擇純水(b)，10Mm醋酸銨誰溶液(c)，0.1%氨水(d)，0.1%甲酸水溶液(e)作為流動(dòng)相A。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：當(dāng)以純水作為流動(dòng)相時(shí)，三聚氰胺的出峰時(shí)間晚于用其他溶液作為流動(dòng)相的出峰時(shí)間。同時(shí)，純水對(duì)三聚氰胺的靈敏度也明顯高于其他三種溶液。故本實(shí)驗(yàn)選擇純水作為流動(dòng)相A。3.1.3 流動(dòng)相洗脫條件選擇本實(shí)驗(yàn)采用純水與甲醇作為流動(dòng)相，進(jìn)行液相色譜恒定和線性變梯度分離測(cè)定，從試驗(yàn)結(jié)果可見：采用恒梯度洗脫比線性變梯度洗脫更為優(yōu)越，因?yàn)槿矍璋返臉O性使其在線性變梯度洗脫條件下更早的出峰。對(duì)于三聚氰胺來說，100純水洗脫是最為理想的洗脫條件，但是Waters ACQUITY UPL

17、C BEH C18這一柱子并不適宜采用100的純水作為流動(dòng)相，故采用恒梯度洗脫的同時(shí)，以2乙腈水溶液作為初始流動(dòng)相，洗脫條件見表1。相對(duì)豐度圖3 流動(dòng)相的選擇3.2 質(zhì)譜條件的選擇3.2.1 母離子的選擇選用ESI（+）和ESI（-）作為電離化模式，通過直接進(jìn)樣一定濃度的三聚氰胺水溶液，在優(yōu)化質(zhì)譜參數(shù)和選擇標(biāo)準(zhǔn)溶液種類的基礎(chǔ)上，確定其母離子質(zhì)量數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：在離子源ESI+電離條件下，三聚氰胺的母離子峰為M+H+，最終選擇的母離子見表2。3.2.2 子離子的選擇在確定三聚氰胺的母離子后，使用Daughter掃描的方式選擇特征離子，隨著碰撞能量的不斷增加，選擇豐度較大的兩個(gè)子離子分別作為定量

18、離子和輔助定性離子，并確定其最佳誘導(dǎo)碰撞能量的范圍，最后在MRM方式中進(jìn)一步調(diào)整碰撞能量，選擇子離子豐度最高的碰撞能量作為最佳碰撞能量。最終所選擇的特征離子和碰撞能量詳見表2。三聚氰胺的裂解原理見圖4。圖4 三聚氰胺的裂解示意圖3.3 預(yù)處理的優(yōu)化本實(shí)驗(yàn)樣品預(yù)處理的關(guān)鍵因素是減少雜質(zhì)干擾，這就需要選擇合適的預(yù)處理方法以盡可能的減少雜質(zhì)的干擾。3.3.1 提取液的選擇我們必須選擇合適的提取液在獲得較好提取效率的同時(shí)，也可盡可能的沉淀飼料中的蛋白以減少其對(duì)待測(cè)物測(cè)定的干擾。由于高氯酸、甲醇和乙腈都有較好的沉淀蛋白的效果，故本實(shí)驗(yàn)分別選選用了0.1Mm高氯酸水溶液、甲醇、乙腈作為提取液，加入1

19、81;g標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行2.6的操作。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，選用乙腈作為提取液時(shí)，三聚氰胺的響應(yīng)值明顯高于其他兩者。三聚氰胺在強(qiáng)酸下易水解，使得其在高氯酸提取的條件下測(cè)得的相應(yīng)值很低，實(shí)驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)，當(dāng)以甲醇作為提取液時(shí)，得到的三聚氰胺峰會(huì)出現(xiàn)分叉的現(xiàn)象。故選擇乙腈作為最終的提取溶劑。結(jié)果詳見圖6。圖6 提取液的選擇3.3.2 MCX柱凈化準(zhǔn)確稱取2.0g樣品于50ml的離心管中，加入1µg標(biāo)準(zhǔn)品，再加入10mL乙腈溶液，在旋轉(zhuǎn)式搖震蕩器中搖震1min。充分混勻后，將離心管置入超聲波中超聲提取5min，放入高速離心機(jī)14000rpm下離心5min，取上清液5mL，加入1mL0.03M乙酸，作為上樣

20、液，按331操作，以水定容。同時(shí)做空白平行，并以空白基質(zhì)作為定容液，配制100ppb三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)樣。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，以過柱凈化后的空白基質(zhì)作為定容液得到的峰面積與以未過柱的空白基質(zhì)作為定容液得到的峰面積相接近，說明MCX柱凈化這一步驟對(duì)減少基質(zhì)干擾，增高回收率并無實(shí)際意義。因此在本課題中，未采用MCX柱凈化方法，而采用26的步驟。（結(jié)果見圖7）圖7 MCX柱的凈化效果比較3.3.3 Al2O3柱準(zhǔn)確吸取10µg/ml的三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)溶液100µl，加入5ml乙腈，作為上樣液。Al2O3柱用5ml乙腈，加上樣液過柱，直接收集濾液，并用2ml乙腈淋洗。再氮?dú)獯蹈?，最后?/p>

21、水定容至1ml，進(jìn)樣。結(jié)果表明，經(jīng)過Al2O3柱凈化后的三聚氰胺溶液在質(zhì)譜中無響應(yīng)信號(hào)，說明Al2O3在吸附雜質(zhì)的同時(shí)，對(duì)三聚氰胺也幾乎全部吸附，因此Al2O3柱不適合作為本實(shí)驗(yàn)的固相萃取柱。3.3.4 定溶液的選擇吹干后的定容液會(huì)直接影響待測(cè)物的離子化效應(yīng)及其靈敏度。一般而言，都以初始流動(dòng)相作為定容液，因本課題的流動(dòng)相為純水和甲醇，故本實(shí)驗(yàn)選擇不同比例的甲醇水溶液作為定容液來比較效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著定容液中甲醇比例的增高，三聚氰氨的相應(yīng)值也不斷增大，當(dāng)以100%的甲醇定容時(shí)，峰面積達(dá)到最大值，有利于對(duì)三聚氰胺的檢測(cè)。故選擇甲醇作為最終定容液（詳見圖8）。圖8 定容液的選擇3.3.5 提取

22、溶劑和樣品量的比例關(guān)系飼料樣品中的雜質(zhì)對(duì)三聚氰胺的提取存在較大的影響，為了盡量減少該影響，增大提取效率，我們做了提取溶劑和樣品量的比例關(guān)系的實(shí)驗(yàn)。分別稱取0.5g、1.0g和2.0g樣品，進(jìn)行2.6的操作，同時(shí)平行做空白對(duì)照，以空白基質(zhì)作為定容液，配制100ppb的三聚氰胺的標(biāo)準(zhǔn)溶液。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，當(dāng)稱樣量越少時(shí)，基質(zhì)干擾越小，三聚氰胺的信號(hào)越高，故選擇0.5g作為稱樣量。圖6 稱樣量與提取液的比例關(guān)系3.4 方法學(xué)驗(yàn)證3.4.1 標(biāo)準(zhǔn)校正曲線按2.6的步驟，配制濃度分別為5，10，20，50，100，200，300ng/ml的三聚氰胺基質(zhì)加標(biāo)溶液，進(jìn)樣進(jìn)行分析。以三聚氰胺的峰面積為縱坐標(biāo)，三

23、聚氰胺濃度為橫坐標(biāo)，獲得濃度范圍在5300ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)校正曲線。其相關(guān)系數(shù)r2為0.995，回歸方程為Y1065.47X802.915。(詳見圖7)圖7 線形回歸方程3.4.2 檢出限和定量限當(dāng)信噪比為3倍時(shí)的溶液濃度為最低檢出限，當(dāng)信噪比為10倍時(shí)的溶液濃度為定量限，三聚氰胺至今尚未制定明確的最高限量標(biāo)準(zhǔn)。故只要本實(shí)驗(yàn)的靈敏度足以能夠檢測(cè)出一定含量的三聚氰胺即可。本方法的檢出限（LOD）為1.6µg/kg，定量限（LOQ）為5.0µg/kg。3.4.3 回收率試驗(yàn)取樣品15份，每份0.5g，分別加入高、中、低不同濃度的三聚氰胺溶液，各5份，按2.6方法進(jìn)行前處理，進(jìn)行

24、檢測(cè)，結(jié)果見表3。由表3可見，平均回收率在90100%之間，且高、中、低各濃度五次重復(fù)均獲良好的重現(xiàn)性。表3 回收率實(shí)驗(yàn) 名稱3.4.4 精密度試驗(yàn)日內(nèi)重復(fù)取上述樣品5次，加入50µg三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，按2.6樣品預(yù)處理方法進(jìn)行處理，依次進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果見表4：表4 日內(nèi)精密度序號(hào)1 2 3 4 5 三聚氰胺取上述試驗(yàn)樣品，每天取樣5份，連續(xù)5天，加入100ng三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，按2.6樣品預(yù)處理方法進(jìn)行處理，依次進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果見表5：表5 日間精密度 序號(hào)1 2 3 4 5 三聚氰胺 (mg/1kg)3.5 樣品檢測(cè)對(duì)實(shí)際樣品按照2.6的預(yù)處理方法進(jìn)行檢測(cè)，得到數(shù)據(jù)結(jié)果。見表6表6 檢測(cè)

25、結(jié)果樣品序號(hào)本文建立了超高壓液相色譜-電噴霧串聯(lián)四級(jí)桿質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)法檢測(cè)動(dòng)物飼料中三聚氰胺含量的理想方法。該方法樣品前處理方法簡(jiǎn)單，不需經(jīng)過固相萃取等步驟，只經(jīng)超聲提取，氮?dú)獯蹈?，甲醇定容，直接用濾膜過濾即可進(jìn)樣檢測(cè)，且重現(xiàn)性和回收率均良好。三重四級(jí)桿質(zhì)譜的多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)方式可獲得極高的檢測(cè)靈敏度。第一級(jí)質(zhì)譜選擇了特征母離子，經(jīng)碰撞能量?jī)?yōu)化后，第二級(jí)質(zhì)譜選擇了特征子離子，只有同時(shí)具有這兩種特征的離子質(zhì)量才被記錄，雜質(zhì)干擾的可能性極低。經(jīng)方法學(xué)驗(yàn)證，本方法可適用一般動(dòng)物飼料中三聚氰胺含量的測(cè)定，具有快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、靈敏度高、分析周期短等優(yōu)點(diǎn)。當(dāng)然本方法仍存在一定不足的

26、地方，如檢測(cè)食品中三聚氰胺的殘留量，這需要在以后的工作中不斷完善。5、參考文獻(xiàn)1 Artine L. Scheepers , Robert J. MeierDetermination of free melamine content in melamine-formaldehyde resins by Raman spectroscopyVibrational SpectroscopyJ 1995;9:139-146 2 Akiko Sugita, Hajimu IshiwataDetermination of Melamine and Three Hydrolytic Products by

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