飼料中粗纖維的測定

1、飼料中粗纖維的測定一、實驗目的通過飼料樣品中粗纖維的測定，掌握用飼料中粗纖維的測定方法。二、適用范圍本方法適用于粗纖維含量大于10g/kg的飼料。對粗纖維含量等于或小于10g/kg的飼料，可用ISO 6541描述的方法測定。本標準還適用于谷物和豆類植物。三、方法原理用固定量的酸和堿，在特定條件下消煮樣品，再用醚、丙酮除去醚溶物，經(jīng)高溫灼燒扣除礦物質(zhì)后的所余物為粗纖維。（試樣用沸騰的稀釋硫酸處理，過濾分離殘渣，洗滌，然后用沸騰的氫氧化鉀溶液處理，過濾分離殘渣，洗滌，干燥，稱量，然后灰化。因灰化而失去的質(zhì)量相當于試料中粗纖維質(zhì)量。）它不是一個確切的化學實體，只是在公認強制規(guī)定的條件下，測出的概略養(yǎng)

2、分。其中以纖維素為主，還有少量半纖維素和木質(zhì)素。四、試劑和材料除非另有規(guī)定，只用分析純試劑。（1）水 至少應為GB/T 6682規(guī)定的3級水。（2）鹽酸溶液 c（HCl）=0.5mol/L（3）硫酸溶液 c（H2SO4）（0.23±0.005） mol/L（4）氫氧化鉀溶液 c（KOH）（0.23±0.005） mol/L（5）丙酮。（6）濾器輔料 海沙或硅藻土，或質(zhì)量相當?shù)钠渌牧稀Ｊ褂们?，海沙用沸騰鹽酸c（HCl）4mol/L處理，用水洗至中性，在（500±25）下至少加熱1h。（7）防泡劑 如正辛醇。（8）石油醚 沸點范圍40-60。五、儀器設備（1）粉碎設

3、備 能將樣品粉碎，使其能完全通過篩孔為1mm的篩。（2）分析天平 感量0.1mg。（3）濾堝 石英的、陶瓷的或硬質(zhì)玻璃的，帶有燒結的濾板，濾板孔徑40100m。在初次使用前，將新濾堝小心地逐步加溫，溫度不超過525，并在（500±25）下保持數(shù)分鐘。也可使用具有同樣性能特性的不銹鋼坩堝，其不銹鋼篩板的孔徑為90m。（4）陶瓷篩板。（5）灰化皿。（6）燒杯或錐形瓶 容量500mL，帶有一個適當?shù)睦鋮s裝置，如冷凝器或一個盤。（7）干燥箱 用電加熱，能通風，能保持溫度（30士2）。（8）干燥器 盛有藍色硅膠干燥劑，內(nèi)有厚度為23mm的多孔板，最好由鋁或不銹鋼制成。（9）馬福爐 用電加熱，可

4、以通風，溫度可調(diào)控，在475-525條件下，保持濾堝周圍溫度準至±25。馬福爐的高溫表讀數(shù)不總是可信的，可能發(fā)生誤差，因此對高溫爐中的溫度要定期檢查。因高溫爐的大小及類型不同，爐內(nèi)不同位置的溫度可能不同。當爐門關閉時，必須有充足的空氣供應?？諝怏w積流速不宜過大，以免帶走濾堝中物質(zhì)。（10）冷提取裝置 包括一個濾堝支架、一個裝有至真空和液體排出孔旋塞的排放管及連接濾堝的連接環(huán)。（11）加熱裝置（手工操作方法） 帶有一個適當?shù)睦鋮s裝置，在沸騰時能保持體積恒定。（12）加熱裝置（半自動操作方法） 用于酸和堿消煮，包括：一個濾堝支架、一個裝有至真空和液體排出孔旋塞的排放管、一個容積至少270

5、 mL的圓筒（供消煮用，帶有回流冷凝器）、一個將加熱裝置與濾堝及消煮圓筒連接的連接環(huán)。可選擇性地提供壓縮空氣，使用前，設備用沸水預熱5min。六、分析步驟試樣制備：試樣按GB/T 20195制備。用粉碎裝置將實驗室風干樣粉碎，使其能完全通過篩孔為1mm的篩，充分混合。方法一：手工操作法分析步驟（1）試料 稱取約1g制備的試樣（m1），準確至0.1mg。如果試樣脂肪含量超過100g/kg，或試樣中脂肪不能用石油醚直接提取，則將試樣裝移至一濾堝，并按步驟（2）處理。如果試樣脂肪含量不超過100g/kg，則將試樣裝移至一燒杯。如果其碳酸鹽（碳酸鈣形式）超過50 g/kg，按步驟（3）處理，如果碳酸鹽

6、不超過50 g/kg，則按步驟（4）處理。（2）預先脫脂 在冷提取裝置中，在真空條件下，試樣用石油醚脫脂3次，每次用石油醚30ml，每次洗滌后抽吸干燥殘渣，將殘渣裝移至一燒杯。（3）除去碳酸鹽 將100ml鹽酸傾注在試樣上，連續(xù)振搖5min，小心將此混合物傾入一濾堝，濾堝底部覆蓋一薄層濾器輔料。用水洗滌兩次，每次用水100ml，細心操作最終使盡可能少的物質(zhì)留在濾器上。將濾堝內(nèi)容物轉移至原來的燒杯中并按步驟（4）處理。（4）酸消煮 將150ml硫酸傾注在試樣上。盡快使其沸騰，并保持沸騰狀態(tài)30±1min。在沸騰開始時，轉動燒杯一段時間。如果產(chǎn)生泡沫，則加數(shù)滴防泡劑。在沸騰期間使用一個適

7、當?shù)睦鋮s裝置保持體積恒定。（5）第一次過濾 在濾堝中鋪一層濾器輔料，其厚度約為濾堝高度的1/5，濾器輔料上面可蓋一篩板以防濺起。當消煮結束時，將液體通過一個攪拌棒濾至濾堝中，用弱真空抽濾，使150ml幾乎全部通過。如果濾器堵塞，則用一個攪拌棒小心地移去覆蓋在濾器輔料上的粗纖維。殘渣用熱水洗滌5次，每次約用10ml水，要注意使濾堝的過濾板始終有濾器輔料覆蓋，使粗纖維不接觸濾板。停止抽真空，加一定體積的丙酮，剛好能覆蓋殘渣，靜置數(shù)分鐘后，慢慢抽濾排出丙酮，繼續(xù)抽真空，使空氣通過殘渣，使之干燥。（6）脫脂 在冷提取裝置中，在真空條件下，試樣用石油醚脫脂3次，每次用石油醚30ml，每次洗滌后抽吸干燥。

8、（7）堿消煮 將殘渣定量轉移至酸消煮用的同一燒杯中。加150ml氫氧化鉀溶液，盡快使其沸騰，保持沸騰狀態(tài)（30±1）min，在沸騰期間用一適當?shù)睦鋮s裝置，使溶液體積保持恒定。（8）第二次過濾 燒杯內(nèi)容物通過濾堝過濾，濾堝內(nèi)鋪有一層濾器輔料，其厚度約為濾堝高度的1/5，上蓋一篩板以防濺起。殘渣用熱水洗至中性。殘渣在真空條件下用丙酮洗滌3次，每次用丙酮30ml，每次洗滌后抽吸干燥殘渣。（9）干燥 將濾堝置于灰化皿中，灰化皿及其內(nèi)容物在130干燥箱中至少干燥2h。在灰化或冷卻過程中，濾堝的燒結濾板可能有些部分變得松散，從而可能導致分析結果錯誤，因此將濾堝置于灰化皿中。濾堝和灰化皿在干燥器中

9、冷卻，從干燥器中取出后，立即對濾堝和灰化皿進行稱量（m2），準確至0.1mg。（10）灰化 將濾堝和灰化皿置于馬福爐中，其內(nèi)容物在（500±25）下灰化，直至冷卻后連續(xù)兩次稱量的差值不超過2mg。每次灰化后，讓濾堝和灰化皿初步冷卻，在尚溫熱時置于干燥器中，使其完全冷卻，然后稱量（m3），準確至0.1mg。（11）空白測定 用大約相同數(shù)量的濾器輔料，按步驟（4）-步驟（10）進行空白測定，但不加試樣?；一鸬馁|(zhì)量損失不應超過2mg。方法二：半自動操作方法的分析步驟（1）試料 稱取約1g制備的試樣（m1），準確至0.1mg。轉移至一帶有約2g濾器輔料的濾堝中。如果樣品脂肪含量超過100

10、 g/kg或樣品含脂肪不能用石油醚直接提取，則按步驟（2）進行。如果樣品脂肪含量不超過100 g/kg，其碳酸鹽（碳酸鈣形式）含量超過50，按步驟（3）進行，如果碳酸鹽不超過50 g/kg，則按步驟（4）進行。（2）預先脫脂 將濾堝與冷提取裝置連接，試樣在真空條件下用石油醚洗滌3次，每次用石油醚30ml，每次洗滌后抽吸干燥殘渣。（3）除去碳酸鹽 將濾堝與加熱裝置連接，試樣用鹽酸洗滌3次，每次用鹽酸30 ml，在每次加鹽酸后在過濾之前停留約1min。約用30ml水洗滌一次，按步驟（4）進行。（4）酸消煮 將消煮圓筒與濾堝連接，將150ml沸硫酸轉移至帶有濾堝的圓筒中，如果出現(xiàn)泡沫，則加數(shù)滴防泡劑

11、，使硫酸盡快沸騰，并保持劇烈沸騰（30±1）min。（5）第一次過濾 停止加熱，打開排放管旋塞，在真空條件下通過濾堝將硫酸濾出，殘渣用熱水至少洗滌3次，每次用水30ml，洗滌至中性，每次洗滌后抽吸干燥殘渣。如果過濾發(fā)生問題，建議小心吹氣排出濾器堵塞。如果樣品所含脂肪不能直接用石油醚提取，按步驟（6）進行，否則，按步驟（7）進行。（6）脫脂 將濾堝與冷提取裝置連接，殘渣在真空條件下用丙酮洗滌3次，每次用丙酮30ml。然后，殘渣在真空條件下用石油醚洗滌3次，每次用石油醚30ml。每次洗滌后抽吸干燥殘渣。（7）堿消煮 關閉排出孔旋塞，將150ml。沸騰的氫氧化鉀溶液轉移至帶有濾堝的圓筒，加

12、數(shù)滴防泡劑，使溶液盡快沸騰，并保持劇烈沸騰（30±1）min。（8）第二次過濾 停止加熱，打開排放管旋塞，在真空條件下通過濾堝將氫氧化鉀溶液濾去，用熱水至少洗滌3次，每次用水約30ml，洗至中性，每次洗滌后抽吸干燥殘渣。將濾堝與冷提取裝置連接，殘渣在真空條件下用丙酮洗滌3次，每次用丙酮30ml，每次洗滌后抽吸干燥殘渣。（9）干燥 將濾堝置于灰化皿中，灰化皿及其內(nèi)容物在130干燥箱中至少干燥2h，在灰化或冷卻過程中，濾堝的燒結濾板可能有些部分變得松散，從而可能導致分析結果錯誤，因此需將濾堝置于灰化皿中。濾堝和灰化皿在干燥器中冷卻，從干燥器中取出后，立即對濾堝和灰化皿進行稱量（m2），準

13、確至0.1mg。（10）灰化 將濾堝和灰化盤置于馬福爐中，其內(nèi)容物在（500±25）下灰化，直至冷卻后連續(xù)兩次稱量的差值不超過2mg。每次灰化后，讓濾堝和灰化皿初步冷卻，在尚溫熱時置于干燥箱中，使其完全冷卻，然后稱量（m3），準確至0.1mg。（11）空白測定 用大約相同數(shù)量的濾器輔料，按步驟（4）-步驟（10）進行空白測定，但不加試樣?；一鸬馁|(zhì)量損失不應超過2mg。7測定結果的計算試樣中粗纖維的含量（X）以g/kg表示，按下式計算： 式（1）式中，m1為試料的質(zhì)量，g；m2為灰化盤、濾堝以及在130干燥后獲得的殘渣的質(zhì)量，mg；m3為灰化盤、濾堝以及在（500±25）灰化后獲得的殘渣的質(zhì)量，mg。結果四舍五入，精確到1g/kg。8重復性用同一方法對相同的實驗材料，在同一實驗室內(nèi)，由同一操作人員使用同一臺設備，在短時間內(nèi)獲得的兩個獨立的測定結果之間的絕對差值，超過表7-8中列出的重復性限r(nóng)的情況不大于5%。表7-8 測定結果的重復性限（r）和再現(xiàn)性限（R）樣品粗纖維含量（