秦皮中秦皮甲素的二階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極譜法定量研究

1、    秦皮中秦皮甲素的二階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極譜法定量研究        摘要：目的：建立中草藥秦皮中秦皮甲素的二階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極譜定量分析方法。方法：二階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極譜法。結(jié)果：秦皮甲素在乙醇-2mol.L-1氯化鋰-水（215）的底液中，于-1.703V（vs Ag/AgCl）處出現(xiàn)一良好的二階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極譜法峰，其峰幅值與秦皮甲素在0.21.6mmol.L-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.999 8），檢測限為50nmol.L-1。結(jié)論：本法簡便、快速、靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確

2、。關(guān)鍵詞：秦皮；秦皮甲素；二階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極譜法；定量分析中分類號(hào)：R917文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1008-9926(2000)05-254-04Study on Quantitative Determination of Aesculin in Cortex Fraxini by Secondary Derivative Differential Pulse PolarographyLIANG Yun-Ai(Rizhao Institute for Drug Control,Rizhao276800,Shandong)ZHU Ji-Jun(Donggang People's Hos

3、pital of Rizhao,Rizhao276800,Shandong)LIU Jian-Fang(Rizhao City People's Hospital,Rizhao276800,Shandong)ABSTRACT：Aim The secondary derivative differential pulse polarography was developed for the quantitative determination of the aesculin in medicinal herbs (Cortex Fraxini).Method Secondary deri

4、vative differential pulse polarography.Results By using containing ethanol-2mol.L-1 lithium chloride-water(215)solution,there is a very good secondary derivative differential pulse polarogram peak at -1.703 V(vs Ag/AgCl).The linear relationship between concentration of aesculin and peak height was o

5、btained in the concentration range of 0.21.6mmol.L-1(P<0.01).The determination limit was 50nmol.L-1.Conclusion The method is simple,rapid,sensitive.The results are accurate.KEY WORDS：Cortex Fraxini;Aesculin;Secondary derivative differential pulse polarography;Quantitative determination秦皮始載于神農(nóng)本草經(jīng)，

6、列為中品，為木犀科植物苦櫪白蠟樹、白蠟樹、尖葉白蠟樹、宿柱白蠟樹的干燥枝皮或干皮。具有清熱燥濕、收澀、明目的功效，用于熱痢、泄瀉、赤白帶下、目赤腫痛、目生膜等癥。其主要有效成分為秦皮甲素1等。秦皮中秦皮甲素的含量測定，藥典法2采用薄層色譜法提取分離后，再用紫外分光光度法測定其含量。筆者用二階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極譜法（SDDPP）對(duì)其進(jìn)行了定量分析，結(jié)果平均回收率為100.7%，RSD為1.58%，n=12。1實(shí)驗(yàn)部分1.1主要儀器與試藥DP-A型微分脈沖極譜儀：(筆者與中科院大氣物理研究所聯(lián)合研制)；Milli-Q型純水器(日本日立公司)；Pye Unicam 8800UV/Vis Spectrop

7、hotometer(英國Beckman公司)。秦皮甲素對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào) 0740-9303）；秦皮標(biāo)準(zhǔn)品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào) 0970-9302）；秦皮購于日照市藥材公司，經(jīng)山東省藥品檢驗(yàn)所中草藥室徐本明副主任藥師鑒定。氯化鋰、乙醇、正丁醇、氯仿、甲苯、甲酸、氯化鉀等均為分析純；實(shí)驗(yàn)用水為去離子蒸餾水經(jīng)Milli-QII型純水器處理制得的高純水。秦皮甲素標(biāo)準(zhǔn)溶液（40g*ml-1)：精密稱取秦皮甲素對(duì)照品20.0mg，置500ml容量瓶中，加乙醇125ml溶解，加2mmol*L-1氯化鋰溶液62.5ml，加水定容即得。1.2實(shí)驗(yàn)條件的選擇將DP-A型微分脈沖極譜儀

8、打到SDDPP檔。選用滴汞電極為工作電極，滴間隔為15s；Ag/AgCl電極為參比電極，內(nèi)裝1.0mol*L-1的氯化鉀參比溶液；微鉑電極為輔助電極。將其余4個(gè)可能影響試驗(yàn)準(zhǔn)確度的試驗(yàn)條件各分為3個(gè)水平，采用正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)法進(jìn)行選擇，其因素與水平的設(shè)計(jì)見表1。表1秦皮甲素因素與水平的設(shè)計(jì)水平因素A預(yù)置電壓(V)B電流靈敏度(A.V-1)C掃描速度(mV.s-1)D脈沖振幅(mV)1-0.0105250102-0.05010300203-0.1001535040各取秦皮甲素標(biāo)準(zhǔn)溶液8ml，加入極譜池中，按上述設(shè)計(jì)，用L9（34）表安排正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)，為了便于統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，將回收率試驗(yàn)結(jié)果減80%，結(jié)果

9、見表2，表3。實(shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后表明，4種因素對(duì)測定結(jié)果準(zhǔn)確度影響的大小順序?yàn)镈>A>B>C，4種因素中，D影響顯著（P<0.05），A、B、C影響不顯著（P>0.05），最佳試驗(yàn)條件為A2B2C1D3。據(jù)此，將4個(gè)主要試驗(yàn)條件分別設(shè)定為-0.050V，掃描速度為250mV.s-1，電流靈敏度為10A.V-1，脈沖振幅為40mV。1.3實(shí)驗(yàn)方法精密稱取秦皮甲素對(duì)照品10.0mg，置250ml容量瓶中，加乙醇62.50ml溶解，加2mmol.L-1氯化鋰溶液31.25ml，加水至刻度，搖勻。取8ml，加入極譜池中，在上述條件下，自-0.050V-2.050V以2

10、50mV*s-1的速度進(jìn)行陰極掃描，得譜見1。 表2秦皮甲素四因素對(duì)測定結(jié)果的影響試驗(yàn)號(hào)因素回收率試驗(yàn)結(jié)果(-80%)合計(jì)(k)ABCDyik111111.603.300.205.10212223.995.552.1111.653133313.6016.449.8239.86421237.214.568.9520.725223110.109.9012.4432.44623127.0214.558.8830.4573132-3.20-2.88-6.77-12.858321310.0216.3312.6539.0093321-7.99-5.22-3.46-16.67k156.6112.9774.5

11、520.87k283.6183.0915.729.25k39.4853.6459.4599.58k213204.6921168.22085557.7025435.5589k226990.63216903.9481246.49855.5625k23Ri=k21+k22+k2389.870410285.19462877.24969949.41863534.30259338.4959916.176411207.2958Ri/91142.79941105.49091037.61061245.2551S1=R1/9-CT312.7961275.4876207.6073415.2518SE2=S總-S總1

12、=855.2883fE2=18表3秦皮甲素方差分析表來源平方和自由度均方F值顯著性ASA312.79612SA/FA156.3980156.3980/47.5163.29P>0.05BSB275.48762SB/FB137.8938137.8938/47.5162.90P>0.05CSC207.60732SC/FC103.8036103.8036/47.5162.18P>0.05DSD415.25182SD/FD207.6259207.6259/47.5164.47P<0.05誤差ESE855.288318SE/FE47.5162066.4311261秦皮甲素的二階導(dǎo)數(shù)

13、差示脈沖極譜2結(jié)果與討論2.1線性試驗(yàn)精密稱取秦皮甲素適量，置容量瓶中，加乙醇溶解，精密量取此液適量，置50ml容量瓶中，加乙醇-2mol.L-1氯化鋰-水（215）溶液稀釋制成含秦皮甲素為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mmol.L-1的秦皮甲素標(biāo)準(zhǔn)溶液，各取8ml加入極譜池中，在上述條件下進(jìn)行測定。結(jié)果表明，在0.21.6mmol.L-1的濃度范圍內(nèi)，秦皮甲素的濃度C(g.ml-1)與其SDDPP的峰幅值d2i/d2E(mm)呈良好的線性關(guān)系。回歸方程為：C=0.402 26(d2i/d2E)+24.112 0r=0.999 8,n=82.2加樣回收率試驗(yàn)精密

14、量取已知含量的秦皮提取液(含秦皮甲素1.58%）適量，用乙醇-2mol.L-1氯化鋰-水(215)溶液制成含秦皮甲素為80.0g.ml-1的溶液，精密量取此液20.00ml加入容量瓶中，精密加入秦皮甲素標(biāo)準(zhǔn)溶液（40.0g.ml-1）7.5、10.00、12.50ml，分別按上述條件進(jìn)行回收率試驗(yàn)，結(jié)果見表4。表4秦皮甲素加樣回收率測定結(jié)果樣品含量(g.ml-1)加入量(g.ml-1)測得量(g.ml-1)回收率(%)(%)RSD(%)32.06.037.5098.68 32.06.038.99102.632.06.037.7899.4232.06.037.9099.7432.08.041.2

15、2103.0 32.08.040.56101.4100.71.5832.08.039.7299.3032.08.040.08100.232.010.043.26103.032.010.042.70101.732.010.041.6699.1932.010.041.9899.952.3秦皮中秦皮甲素的含量測定分別取4批不同品種、不同產(chǎn)地的秦皮，于80烘干至恒重，分別精密稱取1.0g，置50ml量瓶中，加乙醇12.5ml，稱重，回流提取30min。放冷，稱重，加乙醇補(bǔ)足重量，加2mol*L-1氯化鋰溶液6.25ml，加水至刻度，搖勻，用濾紙濾過。棄去初濾液，取續(xù)濾液8ml加入極譜池中，在上述條件下

16、進(jìn)行測定，并與藥典法2測得結(jié)果進(jìn)行比較，其結(jié)果基本一致，見表5。 表5秦皮中秦皮甲素的含量測定結(jié)果（n=10）名稱產(chǎn)地本法藥典法含量(%)RSD(%)含量(%)RSD(%)苦櫪白蠟樹Fraxinus 吉林1.591.691.602.26rhynchophylla Hance.白蠟樹Fraxinus四川1.551.531.562.03chinensis Roxb.尖葉白蠟樹Fraxinus chinensis陜西1.561.601.542.18Roxb.var.acuminata Lingelsh. 宿柱白蠟樹Fraxinus陜西1.521.491.502.06stylosa Lingelsh.

17、2.4檢測限的測定精密稱取秦皮甲素對(duì)照品適量，置容量瓶中，加乙醇溶解，精密量取適量，用乙醇-2mol.L-1氯化鋰-水（215）的溶液稀釋制成含秦皮甲素為50、60、70nmol.L-1的溶液，將儀器靈敏度調(diào)為0.01A.V-1，其他按上述條件進(jìn)行掃描，上述3個(gè)濃度在-1.703(vs Ag/AgCl)處均可出現(xiàn)二階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極譜峰，且峰幅值與其濃度仍呈線性關(guān)系，結(jié)果表明，本法測定秦皮甲素，檢測限可達(dá)50nmol.L-1，可用于本品的痕量分析。2.5電極反應(yīng)機(jī)理的初步探討秦皮甲素的化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有不飽和的>C=O，在酸性條件下，可于滴汞電極上發(fā)生下述還原反應(yīng)，產(chǎn)生良好的二階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極

18、譜峰，據(jù)此，對(duì)秦皮甲素及秦皮中秦皮甲素的含量建立了二階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極譜定量測定法。其電極反應(yīng)式如下：2.6電極過程可逆性的初步探討取秦皮甲素樣品溶液用常規(guī)脈沖極譜法（NPP）3進(jìn)行正、反向掃描，結(jié)果正、反向掃描時(shí)NPP波高的比值為71，證明本電極過程是不可逆的。因?yàn)樵诓豢赡骟w系中，由于反掃描時(shí)還原產(chǎn)物不會(huì)再氧化，所以正、反向掃描時(shí)NPP的波高比值為71，理論公式為：式中：i1cath_陰極電流強(qiáng)度；i1anod-陽極電流強(qiáng)度；t1_直流極譜中的汞滴滴下時(shí)間，ms;tm_加脈沖到測量電流時(shí)的時(shí)間隔，ms。 3結(jié)論3.1在上述規(guī)定條件上，用二階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極譜法3測定秦皮甲素，其極譜峰電位為-1.703V（vs Ag/AgCl），可做為本品的定性參考。3.2本試驗(yàn)通過對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的篩選，不僅有利于本法的準(zhǔn)確度，而且有利于待測成分出峰，不利于其中可能存在的雜質(zhì)和分解產(chǎn)物同時(shí)出峰，即便它們及本品結(jié)構(gòu)中的其它極譜活性基團(tuán)可能出峰，亦可經(jīng)過導(dǎo)數(shù)技術(shù)處理，故可消除其干擾。3.3本法是在一階導(dǎo)數(shù)差示脈沖極譜法基礎(chǔ)上建立起來的一種測試分析新技術(shù)4，具有簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)等特點(diǎn)3。除用于秦皮甲素及秦皮中秦皮甲素的定量分析外，現(xiàn)已成功地用于抗生素5及中草藥6等藥物的定量分析。)作者簡介：梁云愛(1960-)，男，副主任藥師。梁云愛（山東省日照市藥品檢驗(yàn)所山東日照276800）朱