乳腺腫瘤彩色多普勒血流顯像與微血管密度血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的研究

1、乳腺腫瘤彩色多普勒血流顯像與微血管密度血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)的研究    【關(guān)鍵詞】  微血管密度；血管內(nèi)皮生長因子；彩色多普勒血流顯像乳腺良、惡性腫瘤鑒別一直是研究的重點(diǎn),本研究選用免疫組化法檢測術(shù)后腫瘤組織內(nèi)的微血管密度及血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)狀況,探討彩色多普勒血流顯像應(yīng)用的血管病理學(xué)基礎(chǔ),評(píng)價(jià)其應(yīng)用價(jià)值。1  資料與方法1.1  臨床資料  我院住院乳腺腫瘤患者92例,患者皆女性,術(shù)前未行化療或放療,其中乳腺癌46例,年齡23歲74歲,平均年齡48歲,均為原發(fā)癌;其他乳腺良性病變46例,年齡26歲66歲,平均年

2、齡42歲。以上病例均經(jīng)手術(shù)及病理證實(shí)。1.2  方法  采用美國產(chǎn)HDI 5000彩色多普勒超聲診斷系統(tǒng),探頭頻率7.5 MHz，選用乳腺常規(guī)檢測程序。首先,二維切面常規(guī)顯示乳腺腫瘤的不同切面,觀察腫瘤的聲像圖特征,以及雙腋窩淋巴結(jié)是否腫大,作出聲像圖診斷，然后,用彩色的普勒血流顯像(CDFI)多切面仔細(xì)觀察腫瘤內(nèi)部及周邊血流情況、血管分布狀態(tài),選取血流信號(hào)最豐富區(qū)域進(jìn)行脈沖多普勒取樣,調(diào)整聲束與血流入射夾角60°,獲得動(dòng)脈血流頻譜,測量血流頻譜參數(shù),即最大流速(Vmax),最低流速(Vmin)及阻力指數(shù)(RI)，CDFI血流信號(hào)分級(jí)判定,按Adler方法1。術(shù)后

3、病理常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)5 m厚切片2張,貼附于涂有多聚賴氨酸的防脫片上,采用SP法:分別進(jìn)行VEGF免疫組化染色,經(jīng)PBS液多次沖洗后,蘇木素復(fù)染、脫水，二甲苯透明,樹膠封片。血管內(nèi)皮生長因子的計(jì)數(shù):胞漿內(nèi)含有棕黃或棕褐色顆粒的腫瘤細(xì)胞被計(jì)數(shù)為陽性細(xì)胞，每張切片選擇5個(gè)區(qū)在400倍視野下連續(xù)計(jì)數(shù)100個(gè)瘤細(xì)胞,以組織中陽性細(xì)胞所占的百分比,將其分為4級(jí):陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞5%為陰性(-);20個(gè)陽性細(xì)胞為低度表達(dá)(+);20個(gè)50個(gè)陽性細(xì)胞為中度表達(dá)(+);50個(gè)陽性細(xì)胞為高度表達(dá)(+)。MVD計(jì)數(shù):先在低倍鏡(40)下任選乳腺腫瘤組織中一個(gè)微血管的部位,然后在高倍鏡(200)下進(jìn)行觀察,按照

4、Weidner等的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn),計(jì)算乳腺腫瘤內(nèi)著色的毛細(xì)血管和微小血管,凡呈現(xiàn)棕色單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞群無管腔與鄰近的微血管或其他結(jié)締組織成分有明顯區(qū)別的均作為一個(gè)血管計(jì)數(shù),為了避免較大血管對(duì)計(jì)數(shù)的干擾,對(duì)肌層較厚及管腔面積8個(gè)紅細(xì)胞直徑的血管不計(jì)數(shù),每例切片分別計(jì)數(shù)5個(gè)視野,由2位醫(yī)生同時(shí)計(jì)數(shù),最后取其平均值為該例的MVD值。結(jié)果用平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。2  結(jié)果2.1  乳腺腫瘤CDFI血流信號(hào)的豐富程度  惡性乳腺腫瘤的CDFI血流信號(hào)分級(jí)為:0級(jí)2例、級(jí)4例、級(jí)14例、級(jí)26例。乳腺癌CDFI顯示腫瘤內(nèi)部多有中量以上的血流信號(hào),89

5、.96%(40/46)為級(jí)級(jí)血流,主要分布于腫瘤的邊緣。其他乳腺良性病變的CDFI血流信號(hào)分級(jí)為:0級(jí)26例、級(jí)16例、級(jí)4例、級(jí)0例。血流豐富程度明顯低于乳腺癌組,91.30%(42/46)為0級(jí)級(jí)血流,兩組間差異有顯著性(P0.01)。2.2  乳腺腫瘤內(nèi)FV測量MVD指標(biāo)  利用免疫組織化學(xué)技術(shù)FV標(biāo)記,測量乳腺腫瘤內(nèi)的微血管密度。乳腺癌(74.00±27.18)個(gè)/mm2,其他乳腺良性病變(40.26±13.17)個(gè)/mm2,乳腺癌內(nèi)MVD明顯高于其他乳腺良性病變內(nèi)MVD,兩組間差異有顯著性(P0.01)。2.3  乳腺腫瘤內(nèi)MVD與C

6、DFI血流分級(jí)相關(guān)分析  46例乳腺癌,40例CDFI顯示腫瘤內(nèi)血流信號(hào)為級(jí)級(jí),血管密度范圍為(28140)個(gè)/mm2，平均(74.00±27.18)個(gè)/mm2。46例乳腺良性病變,42例CDFI顯示腫瘤內(nèi)血流為0級(jí)級(jí)，血管密度范圍為(769)個(gè)/mm2,平均(40.26±13.71)個(gè)/mm2。表明CDFI檢測腫瘤內(nèi)血流與乳腺腫瘤內(nèi)MVD的檢測呈正相關(guān)關(guān)系(P0.01)。3  討論1997年Wells首先報(bào)道用連續(xù)波多普勒超聲檢查乳腺腫瘤的血流信號(hào)2。隨著超聲診斷設(shè)備的進(jìn)步,對(duì)低速血流的檢測能力大為提高后,有了更多的應(yīng)用脈沖和彩色多普勒超聲診斷乳腺腫瘤

7、的文獻(xiàn)報(bào)道3。CDFI是目前篩選乳腺癌的重要輔助檢查手段之一。MVD在乳腺良、惡性腫瘤中的表達(dá):腫瘤的生長與擴(kuò)散取決于血管生成,癌腫因生長迅速快、代謝旺盛,需要充足的血流和能量供應(yīng),當(dāng)腫瘤長到3 mm時(shí),進(jìn)一步生長需要新的血管生成,新生的血管不僅向腫瘤提供充足的營養(yǎng),導(dǎo)致腫瘤的惡性生長與轉(zhuǎn)移,腫瘤生長階段血管期的開始標(biāo)志著腫瘤開始快速生長、局部浸潤,最后導(dǎo)致轉(zhuǎn)移的發(fā)生4。MVD可準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)實(shí)體腫瘤內(nèi)血管生成狀況,這為我們研究腫瘤的良、惡性提供了病理學(xué)基礎(chǔ)。本組資料表明FV測量乳腺腫瘤MVD,乳腺癌明顯高于良性病變,差異有顯著性(P0.01)。VEGF在良、惡性腫瘤中的表達(dá):正常情況下,人體內(nèi)血

8、管形成生長因子和抑制因子達(dá)到一種相對(duì)的平衡,使人體能夠維持正常的生理狀態(tài)。在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中,腫瘤細(xì)胞釋放VEGF等血管生成因子,來啟動(dòng)腫瘤細(xì)胞的“血管生成開關(guān)”5,激活血管生成因子,促使內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖,形成血管芽及微血管,其結(jié)果為血管形成生長因子濃度升高或是抑制因子濃度下降,從而使腫瘤形成新生血管,腫瘤組織進(jìn)一步生長,不平衡進(jìn)一步加劇,達(dá)到腫瘤無限生長的惡性循環(huán)。VEGF目前被認(rèn)為是作用最強(qiáng)、特異性最高的血管生成因子,在許多人類腫瘤中均有顯著的高水平表達(dá)6。本研究結(jié)果顯示VEGF在乳腺癌中的表達(dá)強(qiáng)度顯著高于乳腺良性瘤,這就從一方面解釋了良惡性乳腺腫瘤不同的微血管密度產(chǎn)生的機(jī)制,說明乳腺

9、癌組織通過分泌VEGF,刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖,從而促進(jìn)腫瘤的新生血管生成,使腫瘤獲得迅速增殖、浸潤與轉(zhuǎn)移的能力,對(duì)甲狀腺癌的生長轉(zhuǎn)移起重要的促進(jìn)作用。因此,CDFI作為與MVD相關(guān)性好，無損傷,實(shí)時(shí)觀察及可重復(fù)性的影像學(xué)檢查方法,通過對(duì)腫瘤的血流信號(hào)分析,能夠在術(shù)前為乳腺腫瘤的診斷和鑒別提供可靠信息,值得推廣應(yīng)用?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1 羅慧.乳腺癌彩色多普勒超聲診斷研究進(jìn)展J.國外醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)分冊(cè),1999,26(4):222224.2 沈理,方超.小乳腺癌的彩色多普勒超聲診斷J.中國醫(yī)學(xué)影像技術(shù),1997,13(5):447449.3 呂軻,張縉熙,傅先水.彩色多普勒超聲對(duì)乳腺良惡性病變鑒別的價(jià)值J.中國超聲醫(yī)學(xué)雜志,1998,14(5):6466.4 Folkman J.What is the evidence that tumorsareangiogenesisdependentJ.Journal of the National Cancer Institute,1990,82:(1):46.5 Hanahan D，F(xiàn)lokman J.Pattern and emerging mechanisms of the antigenicswitch during tumorgenescell,1