第二十二章金免疫技術(shù)

1、第二十二章金免疫技術(shù)Chapter 22 colloidal gold immunoassay第一部分教學(xué)內(nèi)容和要求一、目的要求掌握：免疫金標(biāo)記技術(shù)、膠體金、免疫金的概念，金免疫技術(shù)的主要類(lèi)型，金免疫測(cè)定技術(shù)的類(lèi)型、原 理和臨床應(yīng)用；熟悉：金免疫組織化學(xué)染色技術(shù)的類(lèi)型、原理及臨床應(yīng)用；了解：膠體金特性及其制備,免疫金的制備及技術(shù)要點(diǎn)，各檢測(cè)技術(shù)方法的技術(shù)要點(diǎn)。二、教學(xué)內(nèi)容1膠體金與免疫金制備：膠體金特性及其制備，免疫金的制備。2。金免疫測(cè)定技術(shù)：斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)，斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)，臨床應(yīng)用及評(píng)價(jià)。3。金免疫組織化學(xué)技術(shù)：免疫金 （銀）光鏡染色技術(shù)，免疫金電鏡染色技術(shù)，臨床應(yīng)用與評(píng)價(jià)第二部分

2、測(cè)試題一、選擇題（一）單項(xiàng)選擇題（A型題）1. 金免疫技術(shù)由Faulk和Taylor始創(chuàng)，最初用于A(yíng). 金免疫電鏡染色B. 金（銀）免疫光鏡染色B. 斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)D. 斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)E. 金免疫定量檢測(cè)2. 有關(guān)膠體金顆粒大小特性的正確描述A. 膠體金顆粒越大，入max越小B. 膠體金溶液呈色與膠體金顆粒大小無(wú)關(guān)C. 膠體金顆粒越大，呈色越深D. 膠體金顆粒大小與制備時(shí)檸檬酸三鈉加入量無(wú)關(guān)E. 膠體金顆粒大小與制備時(shí)檸檬酸三鈉加入量呈正比3. 同時(shí)檢定膠體金顆粒大小和均一度的方法是A. 觀(guān)察膠體金溶液的顏色B. 分光光度計(jì)掃描入maxC. 掃描電鏡觀(guān)察D. 對(duì)流免疫電泳E. 免疫電泳

3、4. 在免疫金的制備原理中，膠體金與蛋白質(zhì)結(jié)合力為A. 肽鍵結(jié)合力B. 二硫鍵結(jié)合力C. 氫鍵結(jié)合力D. 靜電引力E. 疏水作用力5. 關(guān)于膠體金保存的描述，正確是A. 置于潔凈的玻璃器皿B. 加防腐劑不利于保存C. 使用時(shí)為提高標(biāo)記效率不必低速離心去除凝集顆粒D. 保存過(guò)程產(chǎn)生少量膠體金凝集顆粒就會(huì)影響以后膠體金的標(biāo)記。E. 應(yīng)于干燥處避光保存6. 當(dāng)前免疫電鏡技術(shù)中應(yīng)用最廣的標(biāo)記物A. 辣根過(guò)氧化物酶B. 硝酸銀C. 膠體金D. 鐵蛋白E. FITC7. 斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)間接法測(cè)血清標(biāo)本中抗體,導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果的主要原因A. 血清標(biāo)本中非目的IgG的干擾B. 血清標(biāo)本中非目的抗原的干擾C.

4、 洗滌不充分D. 反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)E. 反應(yīng)時(shí)間過(guò)短8. 斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)小分子抗原（ a）,層析條的待測(cè)樣品結(jié)果判讀處應(yīng)包被A. 膠體金標(biāo)記抗 a 抗體B. 標(biāo)準(zhǔn)抗原（ a）C. 抗免疫金抗體D. 抗a抗體E. 小鼠 IgG9. 免疫層析試驗(yàn)雙抗體夾心法測(cè)大分子抗原 （b） ,層析條的待測(cè)樣品結(jié)果判讀處應(yīng)包被A. 膠體金標(biāo)記抗 b 抗體B. 抗 b 抗體C. 抗免疫金抗體D. 標(biāo)準(zhǔn)抗原（ b）E. 人血清 IgG10. 用于包被斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)載體膜質(zhì)控條（線(xiàn)） 的物質(zhì)是A. 抗免疫金抗體B. 人白蛋白C. 待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)品D. 膠體金標(biāo)記抗體E. 膠體金顆粒11. 關(guān)于斑點(diǎn)金免疫層析

5、試驗(yàn)雙抗體夾心法結(jié)果正確的判讀A. 僅出現(xiàn)一條棕紅色質(zhì)控條帶者為試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性B. 出現(xiàn)兩條棕紅色條帶者為試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性C. 出現(xiàn)棕紅色質(zhì)控條帶者為試劑失效D. 必需在 5 分鐘內(nèi)觀(guān)察結(jié)果E. 僅在實(shí)驗(yàn)區(qū)出現(xiàn)一條棕紅色條帶者為試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性12. 關(guān)于斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)競(jìng)爭(zhēng)法結(jié)果正確的判讀A. 僅出現(xiàn)一條棕紅色質(zhì)控條帶為陰性B. 出現(xiàn)兩條棕紅色條帶為陽(yáng)性C. 無(wú)棕紅色質(zhì)控條帶出現(xiàn)為試劑失效D. 都無(wú)棕紅色條帶出現(xiàn)即為陽(yáng)性E. 出現(xiàn)一條棕紅色條帶即為陽(yáng)性13. 膠體金間接免疫層析法測(cè)血清抗體,常設(shè)計(jì)成反流免疫層析法的主要目的A. 縮短反應(yīng)時(shí)間B. 減少樣品用量C. 提高靈敏度D. 提高特異性E. 減少

6、血清中非特異性免疫球蛋白對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果干擾14. 關(guān)于斑點(diǎn)金免疫滲濾和免疫層析實(shí)驗(yàn)操作,二者相同的是A. 二者均需要膠體金標(biāo)記物、洗滌液等溶液試劑B. 所有反應(yīng)都是在固相膜的一個(gè)固定區(qū)域完成C. 反應(yīng)結(jié)果的的判斷,二者均不需酶促底物反應(yīng)呈色D. 所有試劑均預(yù)制在膜上E. 兩者結(jié)果判讀模式一樣15. 斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)來(lái)源于A(yíng). RIAB. dot-ELISAC. 免疫層析實(shí)驗(yàn)D. 免疫印跡實(shí)驗(yàn)E. 熒光免疫組化染色16. 關(guān)于斑點(diǎn)金免疫層析實(shí)驗(yàn)原理正確的描述A. 其實(shí)驗(yàn)的基本原理與 dot-ELISA 相似B. 其實(shí)驗(yàn)所用的試劑均被預(yù)先固相化在濾膜上C. 樣品以橫流層析通過(guò)濾紙條不同區(qū)域時(shí),完成酶

7、促反應(yīng)D. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程須洗滌E. 其競(jìng)爭(zhēng)法試驗(yàn)結(jié)果判斷以出現(xiàn)兩條沉淀線(xiàn)為陽(yáng)性17. 關(guān)于斑點(diǎn)金固相膜免疫測(cè)定,下列錯(cuò)誤的是A. 可以適用于定性和定量試驗(yàn)B. 其示蹤物是膠體金顆粒C. 免疫滲濾實(shí)驗(yàn)是利用了微孔膜的毛細(xì)管作用D. 免疫層析實(shí)驗(yàn)是利用了微孔膜的穿流性E. 方法具有簡(jiǎn)便、快速、靈敏度較高的特點(diǎn)18. 免疫金（銀）光鏡染色技術(shù)中，常用的金離子（Au+）還原劑為A. 對(duì)苯二酚B. 苯酚C. 甲醇D. 草酸鹽E. 白磷19. 關(guān)于免疫金銀染色的描述，錯(cuò)誤的是A. 敏感度較單純免疫金染色更高B. 多用于組織化學(xué)檢測(cè)C. 利用金顆粒對(duì)銀離子的還原性D. 具有定位精確的優(yōu)點(diǎn)E. 陽(yáng)性結(jié)果為桔紅色顆

8、粒沉積20. 免疫電鏡技術(shù)中，最常用的免疫染色技術(shù)A. 酶標(biāo)記抗原免疫組化技術(shù)B. 金免疫技術(shù)C. 熒光免疫組化技術(shù)D. 非標(biāo)記抗體酶免疫組化技術(shù)E. 鐵蛋白標(biāo)記免疫技術(shù)（二）多項(xiàng)選擇題（ X 型題）1. 關(guān)于膠體金結(jié)構(gòu)和特性的正確描述A. 包括一個(gè)基礎(chǔ)金核B. 顆粒大小約為 1 100nmC. 具有內(nèi)正外負(fù)的雙離子層D. 對(duì)電解質(zhì)敏感E. 吸收峰波長(zhǎng)隨顆粒大小而改變2. 免疫金制備過(guò)程中，影響蛋白質(zhì)（抗原或抗體）吸附膠體金顆粒的因素有A. 膠體金顆粒表面的粗糙程度B. 膠體金顆粒表面帶負(fù)電荷大小C. 蛋白質(zhì)的分子大小及濃度D. 溶液pH值E. 溶液離子強(qiáng)度3. 用于制備膠體金的還原劑A. 白

9、磷B. 聚乙二醇C. 抗壞血酸D. 枸櫞酸鈉E. 鞣酸4. 用于免疫金溶液保存的穩(wěn)定劑A. 多種蛋白質(zhì)B. 葡聚糖CPEG2000D. 明膠E. 甲醛5. 下列說(shuō)法正確的是A. 配制膠體金溶液時(shí)，調(diào)整各試劑的比例可獲大小不同的金顆粒B. 免疫金的保存常用中性的 PBS或Tris緩沖液C. 制備膠體金的玻璃容器最好經(jīng)硅化處理D. 蛋白質(zhì)聚合物易影響膠體金標(biāo)記過(guò)程E. 高分子穩(wěn)定劑可減少免疫金復(fù)合物的非特異性吸附反應(yīng)6. 膠體金性能的鑒定指標(biāo)有A. 膠體金顆粒大小B. 膠體金顆粒的均一程度C. 膠體金顆粒有無(wú)凝集顆粒D. 膠體金顆粒免疫活性E. 膠體金溶液呈色7. 關(guān)于免疫金電鏡染色技術(shù)包埋后染色

10、法的正確描述B. 結(jié)果重復(fù)性好C. 可進(jìn)行多重免疫染色D. 易保持細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整E. 易保持抗原免疫活性8. 斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)的優(yōu)點(diǎn)A. 操作簡(jiǎn)便、快捷B. 操作人員不需技術(shù)培訓(xùn)，無(wú)需特殊儀器設(shè)備C. 試劑穩(wěn)定、易于保存D. 符合“床邊檢驗(yàn)”項(xiàng)目的要求E. 靈敏度較高，高于酶標(biāo)法9. 屬于金免疫測(cè)定技術(shù)的測(cè)定方法A. 金免疫電鏡染色B. 免疫金（銀）光鏡染色C. 斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)D. 斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)E. 膠體金免疫吸附試驗(yàn)10. 影響膠體金溶液穩(wěn)定性的因素A. 膠體金膠粒間的相互吸引力B. 水化層的帶電情況C. 膠體界面的溶劑膜D. 共價(jià)鍵結(jié)合力E. 膠體金溶液濃度二、填空題1. 金免

11、疫技術(shù)主要有 和 ，前者包括 和 ；后者包括和等。2. 免疫金是指 的結(jié)合物 , 在免疫組織化學(xué)染色技術(shù)中，習(xí)慣上稱(chēng)之為 。3. 斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)方法學(xué)類(lèi)型有 、和。4. 滲濾裝置是斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)試劑盒中主要組成部分之一，由 、 和三部分三部分組成。5. 斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)試劑盒由 、和 組成。6. 用于電鏡的免疫金法可分為 和 兩大類(lèi)。7. 免疫金電鏡染色技術(shù)包括 、兩個(gè)主要步驟。8. 為了消除待測(cè)血清標(biāo)本中 的干擾，斑點(diǎn)金間接免疫層析法測(cè)抗體常設(shè)計(jì)成 。三、名詞解釋1. 免疫金銀染色（ immunogold silver staining， IGSS）2. 膠體金 （colloida

12、l gold）3. 免疫金 （immunogold）4. 免疫金標(biāo)記技術(shù) （gold labeled immunoassay）四、問(wèn)答題1. 何謂金免疫測(cè)定技術(shù)？簡(jiǎn)述其技術(shù)類(lèi)型及原理。2. 簡(jiǎn)述免疫金電鏡染色技術(shù)的原理、技術(shù)要點(diǎn)和注意事項(xiàng)。第三部分 參考答案與題解一、選擇題（一）單項(xiàng)選擇題（ A 型題）1. A 2.C 3.C 4.D 5.A 6.C 7.A 8.B 9.B 10.A 11.B 12.C 13.E 14.C 15.B 16.B 17.B18.A 19.E 20.B （二）多項(xiàng)選擇題（ X 型題）1. ABDE 2.ABCDE 3.ACDE 4.ABCD 5.ABCDE 6.AB

13、C 7.ABC 8.ABCD 9.CDE 10.ABC二、填空題1. 金免疫組織化學(xué)染色技術(shù)、 金免疫測(cè)定技術(shù)、 免疫金（銀）光鏡染色技術(shù)、 免疫金電鏡染色技術(shù)、 斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)、 斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)2. 膠體金與抗原（抗體） 、 金探針3. 雙抗體夾心法、 競(jìng)爭(zhēng)法、 間接法4. 塑料小盒、5. 滲濾裝置、6. 包埋前染色、7. 標(biāo)本包理、吸水墊料、 點(diǎn)加了抗原或抗體的硝酸纖維素膜片膠體金標(biāo)記物、 洗滌液包埋后染色免疫組化染色8. 非特異性 IgG 、 反流免疫層析法三、名詞解釋1. 免疫金銀染色：是在金免疫技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的更為敏感的技術(shù)，利用金免疫技術(shù)測(cè)定產(chǎn)物上的金顆 粒將銀離子還原

14、成銀顆粒，在金顆粒表面形成一色澤更深的黑色層，可增強(qiáng)金免疫技術(shù)的敏感性。2. 膠 體 金 ： 是金鹽被還原成金原子后形成的金顆粒懸液，膠體金顆粒由 一個(gè)基礎(chǔ)金核（金原子 Au）及包圍在外的雙離子層構(gòu)成，緊連在金核表面的是內(nèi)層負(fù)離子（ AuC1），外層 離子層川則分散在膠體間溶液中，以維持膠體金游離于溶膠間的懸液狀態(tài)。3. 免疫金：是指膠體金與抗原（抗體）的結(jié)合物。4. 免疫金標(biāo)記技術(shù)：是指利用膠體金顆粒標(biāo)記特異性蛋白，當(dāng)這些標(biāo)記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時(shí)，肉 眼可見(jiàn)紅色或粉紅色斑點(diǎn)，從而進(jìn)行定性或半定量檢測(cè)。四、問(wèn)答題1. 金免疫測(cè)定技術(shù)是指用膠體金顆粒作為標(biāo)記物進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)的一類(lèi)免疫學(xué)測(cè)

15、定技術(shù)，其主要技術(shù)類(lèi) 型有斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)和斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)。（1）斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)：在以硝酸纖維素膜為載體并包被了抗原或抗體的滲濾裝置中，依次滴加標(biāo)本、 免疫金及洗滌液，因微孔濾膜貼置于吸水材料上，故溶液流經(jīng)滲濾裝置時(shí)與膜上的抗原或抗體快速結(jié)合并 起到濃縮作用，達(dá)到快速檢測(cè)目的，陽(yáng)性反應(yīng)在膜上呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)。（2）斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)是將膠體金標(biāo)記技術(shù)和蛋白質(zhì)層析技術(shù)相結(jié)合的以硝酸纖維素膜為載體的固相膜 免疫分析技術(shù)，滴加在膜一端的標(biāo)本溶液受載體膜的毛細(xì)管作用向另一端移動(dòng)，猶如層析一般，在移動(dòng)過(guò) 程中被分析物與固定于載體膜上某一區(qū)域的抗體或抗原結(jié)合而被固相化，無(wú)關(guān)物則越過(guò)該區(qū)域而被分離， 然后通過(guò)膠體金的呈色條帶來(lái)判讀實(shí)驗(yàn)結(jié)果。2. （1）原理：免疫金電鏡染色技術(shù)原理是膠體金標(biāo)記物與鎳網(wǎng)上待檢標(biāo)本的相應(yīng)蛋白質(zhì)發(fā)生結(jié)合反應(yīng), 由于膠體金顆粒具有高電子密度的特性，故金標(biāo)蛋白結(jié)合處，電鏡下可見(jiàn)黑褐色顆粒，從而對(duì)細(xì)胞膜上或細(xì) 胞內(nèi)的蛋白質(zhì)進(jìn)行定性與定位。（2）技術(shù)要點(diǎn)：標(biāo)本包理：用戊二醛對(duì)標(biāo)本進(jìn)行固定，后行鋨酸固定（固定膜結(jié)構(gòu)），丙酮或乙醇逐級(jí)脫水，包埋（Epon812樹(shù)脂），超薄切片（80nm），置300目鎳網(wǎng)上；免疫組化染色：白蛋白封閉，加第一 抗體，孵育，PBS沖洗，