微生物室so文件

1、細(xì)菌室操作規(guī)程鶴壁市中醫(yī)院檢驗(yàn)科目錄第一篇 細(xì)菌室操作程序文件1. 細(xì)菌室人員崗位職責(zé) 12. 標(biāo)本采集及保存要求33. 顯 微 鏡 檢 查 法 操 作 規(guī)程54. 細(xì) 菌 室 標(biāo) 本 操 作 流程65. 細(xì) 菌 的 形 態(tài) 檢 查 操 作 規(guī)程86. 細(xì) 菌 生 化 反 應(yīng) 鑒 定 及 其 它 實(shí) 驗(yàn) 操 作 規(guī)117. 細(xì) 菌 的 接 種 與 培 養(yǎng) 方 法 操 作 規(guī)178. 支原體培養(yǎng)、鑒定及藥敏操作規(guī)程199. 血 液 感 染 病 原 體 檢 驗(yàn) 操 作 規(guī)10. 中 樞 神 經(jīng) 系 統(tǒng) 感 染 病原體檢驗(yàn)操作規(guī)2211. 下呼吸道感染病原體檢驗(yàn)操作2412. 尿 路 感 染 病 原

2、體檢驗(yàn)操作2613. 消 化 道 感 染 病 原 體 檢 驗(yàn) 操 作 規(guī)2914. 膿 汁 及 病 灶 分 泌 物 細(xì) 菌 學(xué) 檢 驗(yàn) 操 作 規(guī)程 3115. 生 殖 系 統(tǒng) 標(biāo) 本 的 處理3316. 抗 菌 藥 物 敏 感 試驗(yàn)34第二篇 醫(yī)院微生物感染控制檢測(cè)17. 消 毒 滅 菌 效 果 監(jiān)測(cè) 37測(cè).3819. 采樣及檢查原貝y 3920. 各 部 位 的 消毒 .43細(xì)菌室人員崗位職責(zé)1、上班后先搞好室內(nèi)衛(wèi)生、核查各個(gè)培養(yǎng)箱、冰箱的工作溫度是否在設(shè)定的范圍內(nèi)，并做好記錄。檢查各種儀器工作是否正常，做好記錄。2、接收樣本：核對(duì)各樣本號(hào)與申請(qǐng)單聯(lián)號(hào)是否一致，如不一致馬上 與病房聯(lián)系以

3、便作出相應(yīng)的處理，如退單或重送樣本等，并做好聯(lián)系情 況的記錄。核查各送檢樣本是否符合要求。 痰液樣本：先看外觀、再直接涂片鏡檢，以白細(xì)胞?25個(gè)/低倍鏡視野，而上皮細(xì)胞冬10個(gè)/低倍鏡視野，為合格痰液。 無菌體液樣本：檢查各種無菌體液樣本的盛放器皿是否符合要求。 容易枯燥的樣本：對(duì)一些容易枯燥的樣本如大便、咽拭子、膿液 拭子、泌尿生殖道拭子等是否已經(jīng)枯燥。對(duì)不符合要求的樣本必需與臨床聯(lián)系， 以便作出相應(yīng)處理， 方法如聯(lián) 號(hào)不符的樣本，做好記錄。對(duì)符合的樣本進(jìn)行原始單的登記。3、樣本編號(hào)：對(duì)符合的樣本作出編號(hào)，普通細(xì)菌培養(yǎng)：痰液、咽拭子、血液增菌培養(yǎng)、尿液、胸、腹水、腦脊液、膽汁、膿液、泌尿生殖

4、道拭子、大便致病菌培養(yǎng)。在各種培養(yǎng)基上及申請(qǐng)單上編號(hào)的同時(shí)均需 明確標(biāo)明接種日期。4、樣本接種： 血液、骨髓、腹水、關(guān)節(jié)液等：增菌培養(yǎng)瓶； 痰液、咽拭子：血平板、麥康凱平板； 尿液：血平板、麥康凱平板； 大便致病菌： SS 平板； 腦脊液：血平板、巧克力平板； 分泌物的淋球菌培養(yǎng)接種：淋球菌專用平板； 支原體培養(yǎng) +藥敏：按說明書接種支原體專用培養(yǎng)基。對(duì)以上接種樣本的當(dāng)前編號(hào)應(yīng)記錄于登記本上。 此外對(duì)痰、 膿液、腦 脊液等在接種的同時(shí)應(yīng)對(duì)其沉渣進(jìn)行革蘭染色，如有細(xì)菌和或何種細(xì)菌 為主立刻通知臨床，并做好記錄。5、查對(duì)昨天移種平板申請(qǐng)單及原始登記本， 確定標(biāo)本移種是否正確。觀察血液增菌培養(yǎng)瓶，如

5、發(fā)現(xiàn)有細(xì)菌生長(zhǎng)，馬上涂片革蘭染色，將細(xì)菌 的染色特性及形態(tài)報(bào)告給臨床，并做好記錄，同時(shí)進(jìn)行移種。6、觀察平板，挑取可疑菌落涂片革蘭染色，并做好細(xì)菌的鑒定與藥 敏實(shí)驗(yàn)工作。7、檢查各種培養(yǎng)基及試劑的庫存量， 做好需配制培養(yǎng)基或購置試劑 的交班工作。8、定期做好本室所用鑒定和藥敏試條的質(zhì)控，做好記錄。9、每天必須消毒平板、根底培養(yǎng)基等用于常規(guī)醫(yī)院感染監(jiān)測(cè)，另外 根據(jù)具體情況即時(shí)準(zhǔn)備好各種中和劑、 無菌瓶等， 對(duì) 48 小時(shí)的空氣培養(yǎng) 出報(bào)告，同時(shí)注意是否有致病菌、菌落數(shù)是否超標(biāo)。10、工作完成后注意對(duì)工作臺(tái)面進(jìn)行消毒、室內(nèi)進(jìn)行消毒。標(biāo)本采集及保存要求1、總那么：用于細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本在收集時(shí)應(yīng)注意嚴(yán)格

6、無菌操作和及時(shí) 送檢，檢測(cè)后標(biāo)本應(yīng)妥善保存。2、臨床標(biāo)本的采集2.1 、下呼吸道分泌物 痰液 令患者早上起床后用清水瀨口，不要刷牙，立即從下部呼吸道咳出第一口痰，吐在無菌塑料痰盒中，及時(shí)送檢2.2 、尿液 中段尿 護(hù)理人員協(xié)助采取中段尿約 3ml 入無菌塑料盒中，及時(shí)送檢。2.3 、糞便取有粘液、膿血局部的糞便置無菌塑料盒中及時(shí)送檢。2.4 、眼、耳、鼻、喉拭子將棉拭子沾取少許無菌生理鹽水 如沾取的太多， 可在無菌生理鹽水 瓶壁上擠去多余的水份 ，然后采取可疑部位的分泌物， 倒懸于無菌塑料 盒中，及時(shí)送檢。2.5 、膿液用沾有生理鹽水的棉拭子沾取膿液，要盡量多取一些，然后將棉拭 置于無菌塑料盒

7、中，及時(shí)送檢。2.6 、血液2.6.1 、凡疑心菌血癥和敗血病的患者，采血培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量在未使 用抗菌素前采血，如已使用抗菌素，應(yīng)盡量選擇抗菌素在體內(nèi)濃度最低 時(shí)采血，應(yīng)在病人第二次使用抗菌素之前采集血培養(yǎng)標(biāo)本。當(dāng)然在病人 發(fā)熱或寒顫時(shí)采集也可。262、成人每次采血 510m1,小兒采血35ml。2.6.3 、嚴(yán)格消毒病人采血部位和血培養(yǎng)瓶口，抽一定量血液后，無 菌注入血培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，輕輕搖勻。2.6.4 、從抽血到接種入瓶，動(dòng)作要快，防止血液凝固，同時(shí)要及時(shí) 送檢。2.7 、穿刺液胸腹水、心包液、關(guān)節(jié)腔液、鞘膜積液，嚴(yán)格無菌抽取后，注入含 肝素抗凝的無菌試管中， 輕輕顛倒試管 10余次，使肝素與

8、穿刺液混勻達(dá) 到抗凝的目的，或直接無菌注入血培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)及時(shí)送檢。2.8 、膽汁由專科醫(yī)生以無菌方法取引流液 10m1 注入無菌塑料盒內(nèi)。2.9 、腦脊液以無菌方法取腦脊液 35ml，置無菌試管內(nèi)，常溫保存送檢，如只做培養(yǎng)可直接無菌注入血培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，及時(shí)送檢。2.10 、生殖器官標(biāo)本陰道、子宮頸及前列腺等分泌物應(yīng)由醫(yī)師采集，收集于無菌塑料盒 內(nèi)送檢如疑為淋病奈瑟菌感染，做培養(yǎng)檢查時(shí)，采集的標(biāo)本應(yīng)床旁接種并 及時(shí)放入孵箱培養(yǎng)。2.11 、燒傷標(biāo)本以無菌棉拭子直接采取多個(gè)部位創(chuàng)面的膿汁分泌物放入無菌塑料盒 中。2.12 、支原體解脲、人型培養(yǎng) +藥敏的標(biāo)本采集2.12.1 、支原體對(duì)干、熱抵抗力差，標(biāo)本

9、采集后應(yīng)盡快接種支原體 運(yùn)送培養(yǎng)基送檢。2.12.2 、男性：用細(xì)的無菌棉拭子沾取無菌鹽水少許深入尿道口內(nèi)2 2.5cm。3、臨床標(biāo)本的保存細(xì)菌室標(biāo)本原那么上要求及時(shí)送檢、及時(shí)處理，不得保存。顯微鏡檢查法操作規(guī)程顯微鏡檢查是細(xì)菌鑒定工作中的一重要手段，有助于細(xì)菌的初步鑒 別，同時(shí)對(duì)下一步鑒定工作起著重要的指導(dǎo)作用。有時(shí)通過形態(tài)學(xué)檢查 可得到初步診斷，如痰中的抗酸桿菌和泌尿生殖道分泌物中的淋病奈瑟 菌等。顯微鏡檢查有不染色標(biāo)本檢查法和染色標(biāo)本檢查法兩種。1、不染色標(biāo)本的檢查： 不染色標(biāo)本主要用于檢查細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀況。1.1 、壓滴法：用接種環(huán)取細(xì)菌懸液 2 環(huán)，置于清潔載玻片中央，覆 上蓋玻

10、片，于高倍鏡下觀察。制片時(shí)菌液要適量，不可有氣泡，不可外 溢。1.2 、懸滴法：取潔凈的凹窩載玻片及蓋玻片各 1塊，將凹孔四周的 平面上涂上一層凡士林，取一環(huán)菌液置蓋玻片中央，將凹窩載玻片的凹 面向下，對(duì)準(zhǔn)于蓋玻片的液滴上，然后迅速翻轉(zhuǎn)玻片，用小鑷子輕壓蓋 玻片使之與凹孔邊緣粘緊。 鏡下觀察時(shí)先低倍后高倍， 不可壓碎蓋玻片。 有動(dòng)力的細(xì)菌可見細(xì)菌從一處移到另一處，無動(dòng)力的細(xì)菌呈布朗運(yùn)動(dòng)而 無位置的改變。螺旋體由于菌體纖細(xì)、透明，需用暗視野顯微鏡觀察其 形態(tài)、活動(dòng)。2、染色標(biāo)本檢查法： 通過對(duì)標(biāo)本的制片及染色， 能觀察細(xì)菌的形態(tài)、 大小、排列、染色特性以及莢膜、芽胞、異染顆粒等結(jié)構(gòu)，有助于細(xì)菌

11、的初步鑒定。2.1 、快速革蘭染色法2.1.1 、操作見試劑說明書2.1.2 、結(jié)果：革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。2.1.3 、考前須知：染色關(guān)健在于涂片和脫色，涂片不宜過厚，固定不宜過熱，脫色不宜過度，菌齡為 1824小時(shí)為佳。2.2 、抗酸染色法2.2.1 、操作見試劑說明書2.2.2 、結(jié)果：抗酸桿菌呈紅色。2.2.3 、考前須知： 每一張玻片只能涂一份標(biāo)本且不能在染色缸中染 色，以免造成不同標(biāo)本間的交互污染從而導(dǎo)致陰陽性結(jié)果混淆，至無紅 色液體流下。3、墨汁負(fù)染鏡檢：背景著色而菌體不著色的染色法，用以觀察新型 隱球菌的寬厚莢膜等。菌室標(biāo)本操作流程1、標(biāo)本的接受1.1 、標(biāo)本

12、接受的時(shí)間：原那么上全天任何時(shí)間均可。1.2 、標(biāo)本的接受：接受標(biāo)本者要認(rèn)真核對(duì)標(biāo)本的數(shù)量、標(biāo)本與檢驗(yàn) 單要求是否相符以及標(biāo)本的質(zhì)量等。1.3 、把接受的標(biāo)本編號(hào)。2、臨床標(biāo)本的接種2.1 、檢驗(yàn)?zāi)康氖羌?xì)菌培養(yǎng) +藥敏試驗(yàn)。各臨床標(biāo)本的培養(yǎng)基選擇如 下：培養(yǎng)基的選擇標(biāo)本類型培養(yǎng)基血血培養(yǎng)瓶中段尿血平板、麥康凱平板腦脊液血平板、巧克力平板穿刺液血平板、麥康凱平板膽汁血平板、麥康凱平板呼吸道標(biāo)本血平板、麥康凱平板糞便標(biāo)本SS平板病灶分泌物血平板、麥康凱平板、生殖器標(biāo)本根據(jù)臨床醫(yī)生所寫的檢驗(yàn)工程接種相應(yīng)的平板， 操作如下：淋球菌培養(yǎng)接種淋球菌平板；念珠菌培養(yǎng)接種沙保羅培養(yǎng)基;支原體培養(yǎng)那么按?支原體

13、培養(yǎng)的操作規(guī)程?操作；作普通細(xì)菌培養(yǎng)，那么 接種血平板和巧克力平板；衣原體抗原檢測(cè)的按?衣原體抗原檢測(cè)的操 作規(guī)程?進(jìn)行檢驗(yàn)。2.2、接種的方法：標(biāo)本做分區(qū)劃線。2.3、檢驗(yàn)?zāi)康臑檎铱顾釛U菌的按?找抗酸桿菌的操作規(guī)程?進(jìn)行檢驗(yàn)。3、 所接種的平板必須寫上標(biāo)本的編號(hào)和接種的日期，然后根據(jù)要求進(jìn)行培養(yǎng)。4、標(biāo)本的培養(yǎng)條件、溫度、時(shí)間平板培養(yǎng)條件、溫度、時(shí)間血平板孵箱、3537C、1824小時(shí)巧克力平板孵箱、3537C、1824小時(shí)淋球菌平板孵箱、3537C、1824小時(shí)沙保羅平板孵箱、2831C、2436小時(shí)其他的平板孵箱、3537C、1824小時(shí)5、根據(jù)生長(zhǎng)在平板上的細(xì)菌菌落形態(tài)、菌落涂片、染色

14、、鏡檢等來 綜合判斷細(xì)菌形態(tài)和染色性質(zhì)，按各屬鑒定的作業(yè)指導(dǎo)書進(jìn)行各菌屬的 常規(guī)鑒定及藥敏試驗(yàn)。6、結(jié)果的報(bào)告確認(rèn)細(xì)困鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果后，進(jìn)行檢驗(yàn)驗(yàn)單結(jié)果報(bào)告的存盤、打印7、對(duì)各類細(xì)菌培養(yǎng)標(biāo)本除特殊要求外， 我室一般操作完后按要求進(jìn) 行無害化處理。細(xì)菌的形態(tài)檢查操作規(guī)程1、不染色標(biāo)本的檢查壓滴法和懸滴法。主要用于檢查生活狀態(tài)下的細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀 況。將特制好的標(biāo)本置于顯微鏡載物臺(tái)中央，先以低倍鏡觀察，再用高 倍鏡觀察。結(jié)果：有鞭毛的細(xì)菌呈穿梭似流星狀運(yùn)動(dòng) 有明顯的方向性 ；無鞭 毛的細(xì)菌呈布朗運(yùn)動(dòng) 只在原地顫抖而無位置的改變 。2、細(xì)菌染色標(biāo)本的檢查染色的第一步是制作涂片。菌落涂片時(shí)，先取

15、生理鹽水 l 滴，置玻片上，用接種針挑取菌落，在鹽水中涂布。涂片時(shí)必須注意應(yīng)輕輕操作。猛烈的動(dòng)作會(huì)改變菌細(xì)胞原有的排列形式，或造成細(xì)菌鞭毛脫落，影響結(jié)果的準(zhǔn)確性。制備的涂片應(yīng)自然枯燥，并經(jīng)火焰固定，固定溫度不宜過高，以玻片反面接觸手背不燙為準(zhǔn)，否那么可能使細(xì)胞形態(tài)改變。將固 定后的涂片進(jìn)行染色。2.1 、革蘭染色本染色是最根本的染色法，可用于標(biāo)本涂片或菌落涂片。染色結(jié)果 將細(xì)菌分為革蘭陽性 ( 紫色)和革蘭陰性 ( 紅色)兩類2.1.1 、試劑(1) 結(jié)晶紫溶液A 液：結(jié)晶紫2g95 乙醇 20mlB 液：草酸銨0.8g蒸餾水 80ml需在用前24h將A液、B液混合，過濾后裝入試劑瓶?jī)?nèi)備用(2

16、) 碘液碘lg碘化鉀2g蒸餾水300ml碘與碘化鉀混合并研磨，參加幾毫升水，使其逐漸溶解，然后研磨，繼續(xù)參加少量蒸餾水至完全溶解。最后補(bǔ)足水量。也可用少量蒸餾水，先將碘化鉀完全溶解，再參加碘片，待完全溶解后，加水至 300ml。(3) 脫色液： 95乙醇。(4) 復(fù)染液A 貯存液：沙黃2.5g95% 乙醇 100mlB 應(yīng)用液： A 液10ml蒸餾水 90ml染色方法：(1) 涂片經(jīng)火焰固定，加結(jié)晶紫液染 1 min ，清水沖去染液。(2) 加碘液染 1 min ，水洗。(3) .加脫色液，不時(shí)搖動(dòng)約 1030s，至無紫色脫落為止，水洗。(4) .加復(fù)染液，染 30s,水洗。(5) .干后鏡檢

17、。2.2 、抗酸染色抗酸染色直接用于痰標(biāo)本時(shí)，可以適當(dāng)增加標(biāo)本涂片的厚度，以提高檢出率。染厚涂片時(shí)，須掌握復(fù)染色時(shí)間。如果背景過深，影響鏡檢。奴卡菌及放線菌可呈弱抗酸性，取培養(yǎng)菌落涂片染色時(shí)，呈現(xiàn)兩種 現(xiàn)象，視野中有些菌陽性，另外一些那么陰性；有時(shí)同一個(gè)菌體上，紅色 的深淺亦有不同，觀察時(shí)應(yīng)予注意。試劑(1) 、石炭酸復(fù)紅溶液堿性復(fù)紅乙醇飽和溶液 10ml5 石炭酸溶液 90ml(2) 、脫色劑濃鹽酸3ml95% 乙醇97ml(3) 、復(fù)染液 ( 呂弗勒美藍(lán)液 )美藍(lán)乙醇飽和溶液 30ml10 氫氧化鉀 0.1m1蒸餾水 100ml染色方法(1) 、涂片經(jīng)火焰固定， 加石炭酸復(fù)紅溶液， 徐徐加

18、熱至有蒸汽出現(xiàn)， 切不可沸騰，持續(xù)約 5 min (假設(shè)染色奴卡菌需要加長(zhǎng)時(shí)間) ，水洗。(2) 、加脫色劑，不時(shí)搖動(dòng)玻片至無紅色脫落為止，水洗。(3) 、加復(fù)染液，染 0.5I min，水洗。(4) 、干后鏡檢。分枝桿菌呈紅色，背景為藍(lán)色。注：奴卡菌、放線菌標(biāo)本染色時(shí)，脫色劑改用2硫酸水溶液。2.3 、墨汁莢膜染色用于觀察菌體有無莢膜結(jié)構(gòu)，借此鑒定某些菌，如新型隱球菌。 傳統(tǒng)的方法是用印度墨汁，但目前國(guó)內(nèi)無售。常規(guī)工作可以用墨汁或墨水代替，但應(yīng)注意顆粒不能太粗，否那么影響觀察結(jié)果。有人用5黑色素水溶液做染料，效果較好。試劑印度墨汁或 5黑色素水溶液。染色方法將標(biāo)本與 1 滴染色液在載玻片上混

19、合，加上蓋玻片，輕輕壓一下，使標(biāo)本混合液變薄。在低倍鏡下尋找有莢膜的菌細(xì)胞。找到后，轉(zhuǎn)換高倍鏡確認(rèn)。細(xì)菌生化反響鑒定及其它試驗(yàn)操作規(guī)程1、氧化-發(fā)酵試驗(yàn) O-F 試驗(yàn)原理：細(xì)菌在分解葡萄糖的過程中，必須有分子氧參加的，稱為氧 化型?？梢赃M(jìn)行無氧降解的， 稱為發(fā)酵型 發(fā)酵型細(xì)菌在有氧無氧的條件 下均能分解葡萄糖 。不分解葡萄糖的細(xì)菌稱為產(chǎn)堿型。方法：將待檢細(xì)菌同時(shí)穿刺接種兩支 Hugh-Leifson 培養(yǎng)基， 其中一 支培養(yǎng)基滴加無菌石蠟或其它礦物油，高度不少于lcm。35C, 24小 時(shí)或更長(zhǎng)。結(jié)果：培養(yǎng)基變黃表示細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)酸，兩支培養(yǎng)基均無變化 為產(chǎn)堿型或不分解糖型；兩支培養(yǎng)基均均產(chǎn)

20、酸為發(fā)酵型。假設(shè)僅不加石蠟 的培養(yǎng)基產(chǎn)酸為氧化型。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌與非發(fā)酵細(xì)菌的鑒別，前者均為發(fā)酵型， 而后者均為氧化型或產(chǎn)堿型。 也可用于葡萄球菌與微球菌問的鑒別。2、B -半乳糖苷酶ONPG試驗(yàn)原理：細(xì)菌產(chǎn)生半乳糖苷酶，分解鄰-硝基酚B -D-半乳糖苷無色生成鄰 -硝基酚黃色。結(jié)果：菌懸液呈現(xiàn)黃色為陽性反響，一般在 20-30 分鐘內(nèi)顯色。應(yīng)用：主要用于緩慢發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定。3、七葉苷水解試驗(yàn)原理：有的細(xì)菌可將七葉苷分解成葡萄糖和七葉素，七葉素與培養(yǎng) 基中的枸櫞酸鐵的二價(jià)鐵離子反響，生成黑色的化合物。結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽性，不變色為陰性。應(yīng)用：主要用于 D 群鏈球菌與其它鏈

21、球菌的鑒別。前者為陽性，后 者為陰性。也可用于革蘭陰性菌與厭氧菌的鑒別。4甲基紅試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸 進(jìn)一步分解，產(chǎn)生甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基pH 值降至 4.5 以下，參加甲基紅呈現(xiàn)紅色為陽性。假設(shè)細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生的酸少，或產(chǎn)生的 酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其他產(chǎn)物， 那么培養(yǎng)基 pH 值仍在 6.2 以上，參加甲基紅呈 現(xiàn)黃色為陰性。結(jié)果：呈現(xiàn)紅色為陽性，橘紅色為弱陽性。黃色為陰性。應(yīng)用：主要用于鑒別大腸桿菌與產(chǎn)氣桿菌，前者陽性，后者陰性。 此外腸桿菌科中變形桿菌屬、沙門菌屬、枸櫞酸桿菌屬和志賀菌屬等陽 性，而腸桿菌屬、哈夫尼亞菌屬那么為陰性。5、VP試

22、驗(yàn)原理：某些細(xì)菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸脫羧產(chǎn)生乙酰甲基 甲醇，乙酰甲基甲醇在堿性環(huán)境中，氧化為二乙酰，與精氨酸中的胍基 作用生成紅色化合物。結(jié)果：在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色為陽性， 如無紅色出現(xiàn)且于35C4h后仍 如故者即為陰性。應(yīng)用：本試驗(yàn)與甲基紅試驗(yàn)一起使用，因?yàn)榍罢哧栃缘募?xì)菌，后者 通常為陰性。6、吲哚 靛基質(zhì) 試驗(yàn)原理：細(xì)菌分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚 靛基質(zhì) ，參加對(duì)位二 甲基苯甲醛生成紅色玫瑰吲哚。結(jié)果：于兩者液面接觸處出現(xiàn)紅色為陽性，無色為陰性。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科的鑒定。6、尿素分解試驗(yàn)原理：具有尿素酶 尿酶 的細(xì)菌，分解尿素產(chǎn)生大量的氨，培養(yǎng)基 變堿。結(jié)果：培養(yǎng)基呈堿性，使酚

23、紅指示劑變紅為陽性，不變色為陰性。應(yīng)用： 主要用于腸桿菌科中變形桿菌屬細(xì)菌的鑒定， 奇異變形桿菌、 普通變形桿菌為陽性，克雷伯菌屬、枸椽酸菌屬、雷氏普羅威登菌和摩 根摩根菌為陽性。7、苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)原理：某些細(xì)菌可產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶使苯丙氨酸脫氨生成苯丙酮酸，參加 FeCl3 生成綠色化合物。結(jié)果：出現(xiàn)綠色為陽性，應(yīng)立即觀察結(jié)果，延長(zhǎng)會(huì)引起退色。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科的鑒定，變形桿菌屬、普羅威登斯菌和摩 根摩根菌均為陽性。腸桿菌科其它菌均為陰性。8、氨基酸脫羧酶試驗(yàn)原理：具有氨基酸脫羧酶的細(xì)菌， 分解氨基酸脫羧生成胺和 CO2 使培 養(yǎng)基變堿，指示劑改變顏色。結(jié)果：對(duì)照管應(yīng)呈黃色， 測(cè)定管

24、呈紫色 指示劑為溴甲酚紫 為陽性。 應(yīng)用：主要用于腸桿菌科細(xì)菌的鑒定。9、氧化酶試驗(yàn)原理：氧化酶是細(xì)胞色素呼吸酶系統(tǒng)的最終呼吸酶。具有氧化酶的 細(xì)菌，首先使細(xì)胞色素C氧化，再由氧化型細(xì)胞色素 C使對(duì)苯二氨氧化。 生成有色醌類化合物。結(jié)果：細(xì)菌在與試劑接觸 10 秒內(nèi)呈紫色為陽性。 為保證結(jié)果準(zhǔn)確性， 應(yīng)作陰、陽性對(duì)照。應(yīng)用：主要用于腸桿菌科與假單胞菌的鑒別，前者為陰性。后者為 陽性。10、過氧化氫酶試驗(yàn) 觸酶試驗(yàn) 原理： 具有過氧化氫酶的細(xì)菌， 能催化過氧化氫生成水和新生態(tài)氧， 繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡。試劑： 3過氧化氫溶液方法：取菌置于潔凈的試管或玻片上，然后滴加 3過氧化氫數(shù)滴；或直接滴加

25、 3過氧化氫于不含血液的細(xì)菌培養(yǎng)基中，立即觀察結(jié)果。結(jié)果：有大量氣泡產(chǎn)生為陽性。不產(chǎn)生氣泡為陰性。應(yīng)用：革蘭陽性球菌中，葡萄球菌和微球菌均陽性。而鏈球菌均陰性。1l 、硝酸鹽復(fù)原試驗(yàn)原理：包括兩個(gè)過程：一是在合成過程中，硝酸鹽復(fù)原為亞哨酸鹽 和氨。再由氨轉(zhuǎn)化為氨基酸和細(xì)菌內(nèi)其它含氮化合物。二是在分解代謝 過程中，硝酸鹽或亞硝酸鹽代替氧作為呼吸酶系統(tǒng)中的受氫體，能使硝 酸鹽復(fù)原的細(xì)菌從哨酸鹽中獲得氧而形成亞硝酸鹽和其它復(fù)原性產(chǎn)物。結(jié)果：出現(xiàn)紅色為陽性。假設(shè)參加試劑后無顏色變化反響，可能是硝酸鹽沒有被復(fù)原，試驗(yàn)陰性。硝酸鹽被復(fù)原為氨和氮等其它產(chǎn)物而導(dǎo)致假陰性， 這時(shí)應(yīng)參加少許鋅粉， 如出現(xiàn)紅色那么

26、說明試驗(yàn)確實(shí)為陰性。假設(shè)仍不產(chǎn)生紅色，說明為試驗(yàn)為假陰性應(yīng)用：本試驗(yàn)在細(xì)菌鑒定中應(yīng)用廣泛。12、氧化酶 (改進(jìn)法 )試驗(yàn)試劑：四甲基對(duì)苯二胺 (TMPD) 6.0g二甲基亞砜 (DMSO) 100.oml溶解TMPD于 DMS腫，置于避光玻塞瓶中，可在室溫中保存幾個(gè)星 期。方法：被檢菌株移種于 7%羊血瓊脂上，30C需氧條件下孵育15 18h,刮取菌落涂布于無色濾紙片上，加 I滴上述試劑，陽性者在 2min 內(nèi)呈深藍(lán)色。假設(shè)被測(cè)菌株移種在蛋白胨酵母浸出液瓊脂上，至少孵育 3 天以上， 才可檢測(cè)，陽性反響 5 10min 出現(xiàn)。13、CAMS試驗(yàn)原理：B群鏈球菌能產(chǎn)生 CAMP因子，可促進(jìn)葡萄球

27、菌的B -溶血素 溶解紅細(xì)胞活性，因此在兩菌的交界處溶血力增加。出現(xiàn)矢形 (半月形 ) 的溶血區(qū)。結(jié)果：在兩劃線交界處出現(xiàn)箭頭樣的溶血區(qū)為陽性應(yīng)用：在鏈球菌中，只有 B群鏈球菌CAMP試驗(yàn)陽性14、O/129 抑菌試驗(yàn)原理： O/129 二氨基喋啶 對(duì)弧菌屬、鄰單胞菌屬細(xì)菌有抑制作用， 而對(duì)氣單胞菌無抑制作用。方法： 將待檢菌均勻涂布于堿性瓊脂平板上， 鑷取 O/129 紙片 含藥 40ug貼于平板上，35 C, 1824h，觀察結(jié)果。結(jié)果：出現(xiàn)抑菌環(huán)為敏感，無抑菌環(huán)為耐藥應(yīng)用：弧菌屬、鄰單胞菌屬對(duì)O129 敏感，而氣單胞菌屬耐藥15、桿菌肽試驗(yàn)原理： A 群鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎全部敏感，而其它

28、鏈球菌絕大多數(shù) 對(duì)其耐藥。16 、奧普托欣試驗(yàn)原理：幾乎所有的肺炎鏈球菌對(duì) Optochin 敏感，而 Optochin 對(duì)其 它鏈球菌那么無抑制作用17、H2S 試驗(yàn)原理：有些細(xì)菌能分解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸 如胱胺酸、半胱胺酸 產(chǎn)生硫化氫， 硫化氫遇到鉛或亞鐵離子， 那么生成黑色的硫化鉛或硫化鐵 結(jié)果：培養(yǎng)基變黑為陽性，不變?yōu)殛幮浴?yīng)用：主要用于腸桿菌科屬或種的鑒定。18、觸酶試驗(yàn) ( 過氧化氫酶試驗(yàn) )試劑：3%H02溶液，置棕色瓶?jī)?nèi)于4C陰暗處保存。方法：先挑取固體培養(yǎng)基上的菌落，置于潔凈的玻片上，然后滴加3%過氧化氫溶液12滴。靜置之，lmin內(nèi)產(chǎn)生大量氣泡的為陽性，不 產(chǎn)生氣泡的為陰

29、性。1 9、葡萄球菌凝固酶和凝聚因子試驗(yàn)葡萄球菌凝固酶試驗(yàn)被廣泛地用于常規(guī)鑒定金黃色葡萄球菌與其他 葡萄球菌。試管法凝固酶試驗(yàn)稱為葡萄球菌凝固酶，玻片法為檢測(cè)凝聚 因子。19.1 凝聚因子試驗(yàn)：取 1 滴蒸餾水于潔凈的玻片上，用接種環(huán)挑取 待檢菌一環(huán)置于蒸餾水中，制成濃的菌懸液，無自凝現(xiàn)象。然后加一環(huán) 家兔血漿混合， 10s 內(nèi)觀察結(jié)果，出現(xiàn)明顯細(xì)菌凝塊為陽性，否那么為陰 性。如超過10s可出現(xiàn)假陽性，有10%15%金黃色葡萄球菌呈假陰性, 因此必須用試管法驗(yàn)證凝聚因子試驗(yàn)。操作過程中的注意點(diǎn)： (1)10s 內(nèi)觀察結(jié)果(2) 必須制備濃厚的均勻菌懸液。(3) 用EDTA抗凝的兔血漿為最好。(

30、4) 加血漿后不要再混攪，以免細(xì)菌凝塊分散變小。(5) 生長(zhǎng)在高鹽培養(yǎng)基上的菌落可出現(xiàn)自凝或假陽性。19.2 葡萄球菌凝固酶試驗(yàn)： 用生理鹽水將血漿 4倍稀釋， 取 0.5ml 。 然后挑取35個(gè)菌落于稀釋血漿中，成濃菌懸液。置 37C水浴，34h 后讀取結(jié)果，凝固者為陽性。假設(shè)陰性，繼續(xù)觀察到24h，不凝固者為陰性。試驗(yàn)應(yīng)同時(shí)作陽性、陰性對(duì)照。試管法葡萄球菌凝固酶試驗(yàn)陽性者， 應(yīng)見到明顯的纖維蛋白凝膠塊， 出現(xiàn)羊毛狀或纖維狀沉淀物并非真正凝固，應(yīng)判為陰性。中間型葡萄球 菌、豬葡萄球菌需要較長(zhǎng)時(shí)間孵育，才可出現(xiàn)陽性。凝固酶試驗(yàn)應(yīng)考慮 下述情況： 某些金黃色葡萄球菌產(chǎn)生溶纖維蛋白酶，溶解纖維蛋白

31、凝塊。 所用血漿缺乏纖維蛋白原。 試驗(yàn)菌株不純。結(jié)果：玻片法以血漿中有明顯的顆粒出現(xiàn)而鹽水中無自凝現(xiàn)象判為 陽性；試管法以血漿凝固為陽性。應(yīng)用：作為鑒定葡萄球菌致病性的重要指標(biāo)，也是葡萄球菌鑒別時(shí)常用的一個(gè)試驗(yàn)20、新生霉素耐藥試驗(yàn)方法：挑取待檢菌菌落數(shù)個(gè)，制成相當(dāng) 0.5 號(hào)麥?zhǔn)瞎?McFarland濃度菌液，棉拭子浸透，擠去多余液，均勻涂在M-H平板上，貼上含5ug /片的新生霉素紙片，35C孵育1620h，抑菌環(huán)直徑冬16為陽性耐 藥。試驗(yàn)時(shí)應(yīng)以金黃色葡萄球菌 ATCC25923故陰性敏感對(duì)照，以確認(rèn) 紙片是否有效。細(xì)菌的接種與培養(yǎng)方法操作規(guī)程一、細(xì)菌的接種根據(jù)待檢標(biāo)本的來源、培養(yǎng)目的及

32、所用培養(yǎng)基的性狀，采用不同的 接種方法。l 、平板畫線別離法1、連續(xù)畫線別離法此法主要用于雜菌不多的標(biāo)本。用接種環(huán)取 標(biāo)本少許，于平板 l/5 處密集涂布，然后回來作曲線連續(xù)劃線接種，線 與線間有一定距離，劃滿平板為止。2、分區(qū)畫線別離法此法適用于雜菌較多的標(biāo)本。先將標(biāo)本均勻 涂布于平板邊緣一小區(qū) 約占平板 1/5 ，再在二、三區(qū)依次連續(xù)畫線， 每畫線一區(qū)均將接種針滅菌一次。每一區(qū)的劃線均接觸上一區(qū)的接種線 12次。以獲得單個(gè)菌落。2、斜面接種法該法主要用于單個(gè)菌落的純培養(yǎng)。用滅菌接種針取菌少許，從培養(yǎng) 基斜面底部向上劃一直線，然后從底部向上作連續(xù)曲線畫線。一直畫到 斜面頂端。3、液體接種法多

33、用于一些液體生化試驗(yàn)管的接種。用滅菌接種環(huán)取菌少許，在試 管內(nèi)壁與液面交接處的管壁上輕輕研磨，使細(xì)菌混合于液體中。4、穿刺接種法主要用于半固體培養(yǎng)基、 明膠及雙糖鐵的接種。 用接種針取菌少許， 從半固體培養(yǎng)基中央， 平行于管壁垂直刺入， 接近管底但不可接觸管底， 然后接種針原路退出。5、傾注平板法臨床上主要用于尿液等標(biāo)本的細(xì)菌計(jì)數(shù)。將標(biāo)本經(jīng)適當(dāng)稀釋后，取 一定量參加已滅菌的平皿內(nèi)，傾入已經(jīng)溶化并冷卻至45 C左右的定量培養(yǎng)基， 混勻，待凝固后倒置、培養(yǎng)。6、涂布接種法常用于紙片藥物敏感性測(cè)定，也可用于被檢標(biāo)本的細(xì)菌計(jì)數(shù)。加定 量的被檢菌液于瓊脂平板外表，然后用滅菌的棉簽反復(fù)涂布幾次，使被檢菌均

34、勻分布在瓊脂平板外表。然后貼上藥敏紙片培養(yǎng)，或直接培養(yǎng)觀 察結(jié)果。二、細(xì)菌培養(yǎng)方法根據(jù)臨床初步診斷及待檢細(xì)菌的種類， 可選用不同的環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)。 常用的有需氧培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。1、需氧培養(yǎng)法本法是臨床細(xì)菌室常用的培養(yǎng)方法，即將已經(jīng)接種好的平板、斜面和液體培養(yǎng)基等。置于 35C溫箱中孵育1824小時(shí)。2、二氧化碳培養(yǎng)法本室用 CO2 孵箱將已接種好的培養(yǎng)基置于 CO2 孵箱內(nèi)培養(yǎng)。三、別離及純化法3.1 、別離是指從原材料或多種細(xì)菌的混合培養(yǎng)物中將各種細(xì)菌彼此獨(dú)立地別離開，以得到純的單一菌株，技術(shù)步驟如下：作純培養(yǎng)別離時(shí)，一般只用一只完整的瓊脂平板。涂劃多采用分區(qū)劃線法，在一只

35、平板中可劃 3 5 個(gè)區(qū)。劃法有兩種：3.1.1 、從臨床標(biāo)本別離細(xì)菌所含菌數(shù)相對(duì)較少時(shí)， 可用接種環(huán)取標(biāo)本涂布在平板一角邊緣，然后從此區(qū)開始劃線至1 3 平板，為第一區(qū)， 再在 2、3 區(qū)依次劃線，每劃完一個(gè)區(qū)域均將接種環(huán)滅菌一次，冷卻后再劃下一區(qū)域，每一區(qū)域的劃線均接觸上一區(qū)域的接種線12次，使菌量逐漸減少以獲得單個(gè)菌落。3.1.2 、快速劃線別離法： 采用快速劃線使一接種環(huán)標(biāo)本能別離出單 個(gè)菌落，這與標(biāo)本的菌量及操作者的技能有很大關(guān)系。3.2 、純化是指欲獲得大量純培養(yǎng)物的方法， 所用平板大小可根據(jù)需 要的菌量而定。方法是將一單個(gè)菌落或?qū)⑾嗤木渥鞔罅棵芗縿澯?平板上而獲得大量純的培

36、養(yǎng)物。支原體培養(yǎng)、鑒定及藥敏操作規(guī)程1 原理及依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)：支原體別離鑒定培養(yǎng)基用于泌尿生殖道支原體 解脲支原體 Uu 和人 型支原體Mh的檢測(cè)與診斷。當(dāng)有 Uu和Mh生長(zhǎng)，分解尿素和精氨酸引 起PH上升，使以酚紅為指示劑的培養(yǎng)基由黃轉(zhuǎn)紅。依據(jù)珠海迪爾生物工程生產(chǎn)的試劑盒說明書。2 標(biāo)本的采集：2.1 、男性：用特別細(xì)的無菌棉拭子沾取無菌生理鹽水少許深入尿道口內(nèi) 2 2.5cm 處取分泌物， 前列腺液亦可用沾取無菌生理鹽水的無菌棉 拭子盡量多的沾取。2.2 、女性：用沾取少許無菌生理鹽水的棉拭子取宮頸內(nèi)口 12cm 處單層柱狀上皮細(xì)胞，取樣拭子不可碰陰道壁。2.3 、支原體對(duì)干、熱抵抗力差，標(biāo)本采

37、集后應(yīng)立即送檢。整個(gè)采樣 過程應(yīng)注意無菌操作。3、標(biāo)本接種： ( 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)注意無菌操作，防止污染雜菌 )3.1 、取出培養(yǎng)基，放置接近室溫，并在瓶蓋上編號(hào)。3.2 、將采集的標(biāo)本拭子插入培養(yǎng)瓶中， 在靠近液面上方的瓶壁擠示 壓旋轉(zhuǎn)拭子數(shù)次，使拭子中標(biāo)本滲入到肉湯中：假設(shè)為液體標(biāo)本，取 200 u 1 參加培養(yǎng)基中；假設(shè)為中段尿， 經(jīng) 3000 轉(zhuǎn)別離心 15 分鐘取沉渣 100ul 參加培養(yǎng)基中。3.3、蓋上瓶蓋，置3537C孵箱，在2448小時(shí)分別觀察結(jié)果。4、結(jié)果判讀：培養(yǎng)基變紅，判斷陽性，培養(yǎng)基黃色并清亮，判斷陰性。5 、已檢標(biāo)本處理：密閉容器高壓滅菌后，按醫(yī)用垃圾處理。血液感染病原體檢

38、驗(yàn)操作規(guī)程1、標(biāo)本采集(1) 、采集時(shí)間和次數(shù)血標(biāo)本一般應(yīng)在病人發(fā)熱初期或根據(jù)不同的發(fā) 熱情況在未用抗生素前采集做細(xì)菌培養(yǎng)，提高陽性率需連續(xù)三次采血進(jìn)兒童為35ml。(3)、結(jié)果觀察：培養(yǎng) 72小時(shí)后假設(shè)肉眼或自動(dòng)血液培養(yǎng)儀報(bào)告仍未 細(xì)菌生長(zhǎng)，那么盲目移種一次，仍未細(xì)菌生長(zhǎng)，向臨床發(fā)出一級(jí)初級(jí)報(bào)告：“血液經(jīng)72小時(shí)培養(yǎng)無細(xì)菌生長(zhǎng)，為防止漏診，應(yīng)在培養(yǎng) 5天、7天 時(shí)再作盲目移種培養(yǎng)。疑為亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、真菌血癥等時(shí)，血 培養(yǎng)至少連續(xù)培養(yǎng)23周，仍無細(xì)菌生長(zhǎng)方可報(bào)告為陰性。2、檢驗(yàn)程序銅綠假單胞菌溶血溶血性鏈球菌4、血液及骨髓標(biāo)本中常見病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌肺炎鏈球菌大腸埃希困金黃色葡

39、萄球菌傷寒及其它沙門菌表皮匍萄球困變形桿菌溶血性鏈球菌產(chǎn)氣腸桿菌糞腸球菌肺炎克雷伯氏菌銅綠假單胞菌糞產(chǎn)鹼桿困沙雷氏菌流感嗜血桿菌布魯氏菌5、報(bào)告結(jié)果血培養(yǎng)陽性均作為危急值報(bào)告，所以血培養(yǎng)的結(jié)果應(yīng)及時(shí)通知臨床醫(yī)生，每日幵始工作可以首先檢查血培養(yǎng)，如有細(xì)菌生長(zhǎng)，立即處理5.1、疑有細(xì)菌生長(zhǎng)者，經(jīng)涂片、革蘭氏染色、鏡檢后， 通知主治醫(yī)生，報(bào)告“疑有革蘭氏XX菌生長(zhǎng)。并做藥敏試驗(yàn)，報(bào)告初步結(jié)果。5.2、經(jīng)分純培養(yǎng)完成鑒定及藥敏試驗(yàn)，發(fā)出報(bào)告。5.3、培養(yǎng)7天仍為陰性的標(biāo)本，報(bào)告無細(xì)菌生長(zhǎng)。臨床上診斷為亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎者，可持續(xù)培養(yǎng)至兩周再發(fā)陰 性報(bào)告。中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程1、標(biāo)本采集

40、 以無菌方法采集腦脊液 25ml,盛于無菌瓶中送檢。2、直接檢查 腦脊液可直接涂片、革蘭染色或抗酸染色等，然后鏡 檢。無色透明的腦脊液，應(yīng)作離心取沉淀物涂片、染色鏡檢。3、檢驗(yàn)步驟：3.1、一般細(xì)菌涂片檢查除結(jié)核性腦膜炎外，由其它細(xì)菌引起的化膿性腦膜炎，腦脊液明顯混濁，可直接涂片，革蘭染色鏡檢。無色透明的 腦脊液，應(yīng)離心后涂片、染色、鏡檢，根據(jù)染色及形態(tài)特征可初步提示 細(xì)菌的種類。結(jié)核分枝桿菌涂片檢查：取腦脊液的離心沉淀物(3000r /min o 30min)作抗酸染色。新型隱球菌涂片檢查：取腦脊液的離心沉淀物 作墨汁負(fù)染色。3.2、別離培養(yǎng)用接種環(huán)挑取混濁腦脊液或經(jīng)離心沉淀的沉淀物，分18

41、24小時(shí)。腦脊液也可直接注入血培養(yǎng)瓶4、檢驗(yàn)程序5、腦脊液培養(yǎng)常見病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟菌A 、 B群鏈球菌卡他布蘭漢菌肺炎鏈球菌流感嗜血桿菌結(jié)核分支桿菌腸桿菌科困種產(chǎn)單核李斯特菌腦膜敗血性黃桿菌新型隱球菌假單胞菌白色念珠菌6、報(bào)告結(jié)果無論是涂片還是培養(yǎng)，一但見到陽性菌應(yīng)立即通知臨床醫(yī)師。培養(yǎng)下呼吸道感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程1、標(biāo)本的米集有自然咳痰法、咽拭子采集法、支氣管鏡下采集法及分泌物標(biāo)本。2、標(biāo)本的直接檢查(1) 、將痰標(biāo)本涂片后待干，固定、染色，或直接濕片鏡檢，對(duì)病原 學(xué)早期、初步診斷有重要意義。并向臨床發(fā)出初級(jí)報(bào)告。(2) 、一般認(rèn)為合格的痰標(biāo)本為：以白細(xì)胞

42、?25個(gè)/低倍鏡視野，而上皮細(xì)胞冬10個(gè)/低倍鏡視野。采集合格標(biāo)本對(duì)細(xì)菌的診斷尤為重要。3、別離培養(yǎng)與鑒定(1) 、一般要求下呼吸道感染培養(yǎng)的細(xì)菌濃度應(yīng) 107CFU/ml，可視為 病原菌，104CFU/ml可視為污染菌。假設(shè)介于兩者之間105106CFiy ml時(shí), 要連續(xù)別離培養(yǎng)兩次以上仍為 105106CFIT ml時(shí)，亦認(rèn)為是病原菌。(2) 、檢驗(yàn)程序4、下呼吸道標(biāo)本培養(yǎng)常見病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌氏菌金黃色葡萄球菌腦膜炎奈瑟菌化膿性鏈球菌流感嗜血桿菌肺炎鏈球菌腸桿菌科細(xì)結(jié)核分支桿菌非發(fā)酵菌白喉棒狀桿菌嗜肺軍團(tuán)菌假絲酵母菌5、報(bào)告結(jié)果痰中的病原菌不少屬于時(shí)機(jī)致病菌，與正常菌群同時(shí)存在

43、，報(bào)告時(shí)應(yīng)作說明，未檢出致病菌時(shí)，應(yīng)報(bào)告“無致病細(xì)菌生長(zhǎng)。尿路感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程1、尿液培養(yǎng)常見病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌金黃色葡萄球菌淋病奈瑟菌腸球菌大腸埃希困A 群鏈球菌變形桿菌腐生葡萄球菌肺炎克雷伯困表皮匍萄球困產(chǎn)氣腸桿菌結(jié)核分支桿菌沙門菌種銅綠假單胞菌沙雷困2、標(biāo)本收集2.1、尿液標(biāo)本的米集可米用多種方法：有中段尿米集法、膀胱穿刺 法、腎盂尿采集法，而常規(guī)是取中段尿作細(xì)菌培養(yǎng)。2.2、 取中段尿作培養(yǎng)時(shí)先要進(jìn)行前尿道的清洗消毒，以免前尿道寄 生菌群污染標(biāo)本。2.3、 如采用其他方法收集標(biāo)本，必須由臨床醫(yī)生根據(jù)臨床診斷需要而執(zhí)行收集術(shù)，并在檢驗(yàn)單上寫明。3、檢驗(yàn)步驟3.1 、涂片檢查

44、3.1.1 、一般細(xì)菌及淋病奈瑟菌涂片：以無菌操作吸取尿液10ml，3000r/min離心15min，去上清液，取沉淀涂片，革蘭氏染色鏡檢，作初步報(bào)告。如查見革蘭氏陰性雙球菌，呈腎形位于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外，報(bào)告 “找到革蘭陰性雙球菌，存在于細(xì)胞內(nèi)外，形似淋病奈瑟菌 。如未查見 上述細(xì)菌可報(bào)告“未發(fā)現(xiàn)革蘭陰性雙球菌 。3.1.2 、念珠菌涂片：取尿液沉淀物放于清潔玻片上，覆以蓋玻片， 制成涂片，用高倍鏡檢查。革蘭染色后，如發(fā)現(xiàn)發(fā)亮的芽生孢子和假菌 絲，就可報(bào)告“霉菌孢子及菌絲 。、結(jié)核分枝桿菌：取尿液 10ml，4000r/min離心30min,取沉 淀物涂片， 抗酸染色， 鏡檢。如找到紅色桿菌，

45、可報(bào)告“查到抗酸桿菌 。3.2、一般細(xì)菌培養(yǎng) 細(xì)菌計(jì)數(shù) ：用定量接種環(huán)取尿液 10 u l 接種血平板，35C培養(yǎng)1824小時(shí)，觀察有無細(xì)菌生長(zhǎng)，并計(jì)數(shù)菌落數(shù)，乘以 1000，求出每毫升尿液的菌落數(shù)。根據(jù)菌落特征、涂片染色結(jié)果，進(jìn) 行鑒定和藥敏試驗(yàn)，如培養(yǎng) 48 小時(shí)無菌生長(zhǎng)，即報(bào)告“無細(xì)菌生長(zhǎng) 。3.3 、特殊菌培養(yǎng)：淋病奈瑟菌培養(yǎng)，選用專用巧克力瓊脂平板，接 種后放入二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)。4、檢驗(yàn)程序5、結(jié)果報(bào)告(cfu/m1)及藥敏結(jié)果。5. 離心尿液淀涂培養(yǎng)檢查必須報(bào)告細(xì)菌的種屬、菌落計(jì)數(shù)專用巧克力培養(yǎng)基5.2、 革蘭氏陰性菌落計(jì)數(shù)大于陽性菌計(jì)數(shù)大于104cfu/mI ,真菌大于103c

46、fu/ml有診斷意義。5.3、一般常規(guī)結(jié)核培養(yǎng)要8周方能報(bào)告。陽性結(jié)果可提前報(bào)告。但 不做菌落計(jì)數(shù)只報(bào)告“抗酸桿菌生長(zhǎng)的報(bào)告，如做了進(jìn)一步的分型和 鑒定，才能報(bào)告“有XX型結(jié)核桿菌生長(zhǎng)5.4、用專用培養(yǎng)基培養(yǎng)淋球菌經(jīng)鑒定可直接報(bào)告“有淋球菌生長(zhǎng)但不做菌落計(jì)數(shù)，如涂片發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)或外有革蘭氏陰性雙球菌可報(bào)告“發(fā)現(xiàn)革蘭陰性雙球菌。5.5、如尿液培養(yǎng)同時(shí)有三種或以上細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)，可視為污染標(biāo)本, 建議重留送檢。消化道感染病原體檢驗(yàn)操作規(guī)程1、糞便標(biāo)本中常見病原菌金黃色葡萄球菌結(jié)核分支桿菌難辨梭菌白色念珠菌(ETEC弧菌屬菌種傷寒及其它沙門菌志賀菌屬致病大腸埃希菌、EPEC EIEC、EHEC)革蘭陰性菌

47、革蘭陽性菌氣單胞、鄰單胞菌種小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 彎曲菌2、標(biāo)本米集2.1、自然排便采集法：自然排便后，挑取膿血、粘膜局部的糞便23g，液體糞便取絮狀物置于大便培養(yǎng)管或增菌液中送檢。2.2、直腸肛管法：用大便培養(yǎng)用的肛管直接插入肛門成人45cm幼兒23cm,輕輕在直腸內(nèi)旋轉(zhuǎn)數(shù)次，目的是使直腸外表粘液能通過肛 管孔進(jìn)入肛管內(nèi)。然后拔出放入大便培養(yǎng)管中送檢。3、檢驗(yàn)步驟3.1 、涂片檢查糞便標(biāo)本因各種正常菌群含量甚多而一般不作直接涂 片找致病菌，只有疑心霍亂弧菌及菌群失調(diào)所致腹瀉時(shí)，才作直接涂片 檢查。3.2 、各項(xiàng)的涂片檢驗(yàn)均按染色方法進(jìn)行， 但大便檢查霍亂弧菌的處 理程序：3.2.1 、染色檢查

48、：將米泔樣的標(biāo)本涂 2 張片用乙醇固定后染色，觀 察弧菌有無呈魚群狀排列。3.2.2 懸滴檢查：取患者糞便制成懸滴涂片，霍亂弧菌古典型和 EL-Tor 型均呈現(xiàn)極活潑的穿梭狀運(yùn)動(dòng)。3.2.3 制動(dòng)檢驗(yàn)：運(yùn)動(dòng)活潑的弧菌涂片加人霍亂弧菌診斷血清后， 在顯微鏡下觀察，假設(shè)原運(yùn)動(dòng)活潑的現(xiàn)象停止，為制動(dòng)試驗(yàn)陽性。3.3 、大便標(biāo)本的培養(yǎng)目的是培養(yǎng)致病菌或追蹤病人有否菌群失調(diào)現(xiàn)象，無特殊要求作一般致病菌培養(yǎng)的標(biāo)本接種麥康凱、SS平板各一個(gè)。3.4、菌群失調(diào)的細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)：選用多種培養(yǎng)基包括SS麥康凱、血平板、高鹽甘露醇鹽瓊脂平板、Campy-BA血瓊脂平板和沙氏瓊脂等，目的是使更多的菌群得到生長(zhǎng)，以利于檢查

49、腸道的細(xì)菌情況。3.5 、霍亂弧菌的培養(yǎng)：直接取患者米泔樣糞便 0.5ml ，接種于堿性 蛋白胨水增菌液和 4號(hào)平板，35C培養(yǎng)68h,再轉(zhuǎn)種一只4號(hào)平板。35 C培養(yǎng)1824h后形成較大、困洛中間為灰黑色、有光澤、隆起、濕潤(rùn)的菌落，如潑水狀。挑取可疑菌落510個(gè)與霍亂多價(jià)“ O血清作凝 集試驗(yàn)。診斷血清作玻片凝集試驗(yàn)，如為陽性，那么立即報(bào)告，并將可疑菌送疾病控制中心確認(rèn)。3.6、真菌培養(yǎng)：真菌性腹瀉多繼發(fā)于抗生素治療后，常見的真菌腹瀉多由白色假絲酵母菌引起。將標(biāo)本接種于沙氏平板及血平板上，置27C和35C培養(yǎng)1824h，根據(jù)形態(tài)染色、菌落特征，做真菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。4、檢驗(yàn)程序5、結(jié)果報(bào)糞便

50、培養(yǎng)的報(bào)告方式應(yīng)以別離目 沙門氏菌、志賀SS培養(yǎng)基別離糞便中的致病菌，如如:目前常規(guī)以陽性者應(yīng)報(bào)告“檢出沙門菌或檢出志賀菌，陰性者報(bào)告“未檢出沙、菌或未檢出志賀菌。其他培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告方式與上述原那么相同。膿汁及病灶分泌物細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)操作規(guī)程I1、膿汁及病灶分泌物培養(yǎng)常見病原菌革蘭陽性菌革蘭陰性菌葡萄球菌腸桿困科細(xì)困鏈球菌假單胞菌炭疽芽孢桿菌擬桿菌破傷風(fēng)芽孢桿菌腐敗謝瓦納拉菌產(chǎn)氣莢膜梭菌嗜血桿菌結(jié)核分枝桿菌產(chǎn)堿桿菌放線菌、奴卡菌弧菌屬細(xì)菌念珠菌氣單胞菌2、標(biāo)本采集：標(biāo)本由臨床醫(yī)師行無菌操作術(shù)采集，但應(yīng)注意以下幾占：八、2、閉鎖性膿腫疑為厭氧菌感染時(shí)，取材后立即將空氣排空，同時(shí)針尖插入橡皮塞內(nèi)防止空氣

51、進(jìn)入，連同注射器一并送檢。2.2、幵放膿腫、膿性分泌物可在患部直接用棉拭或紗布擦抹，如為痿管亦可在無菌操作下取組織碎片分散在無菌鹽水中2.3 、燒傷創(chuàng)面的分泌物， 用滅菌棉拭取多部位創(chuàng)面的膿液或分泌物， 置無菌試管中送檢。2.4 、取尿道分泌物必須先清洗、 消毒尿道后用擠壓法使分泌物從尿 道溢出，用無菌生理鹽水浸濕拭子直接采集標(biāo)本。如女性做宮頸分泌物 細(xì)菌培養(yǎng)，應(yīng)盡量防止雜菌污染。2.5 、組織臟器碎片的收集，先要消毒外表的污染菌，后用無菌刀切 開，取內(nèi)容物及碎片分散于無菌生理鹽水中，然后增菌、接種，如活體 微量標(biāo)本可直接放人肉湯增菌培養(yǎng)基中增菌。3、檢驗(yàn)步驟3.1 、涂片檢查：膿汁及分泌物標(biāo)本均應(yīng)做涂片檢查。涂片做革蘭氏染色鏡檢，根據(jù)形態(tài)和染色特點(diǎn)，可報(bào)告“找到革蘭氏X性菌，形似X X菌或報(bào)告“未發(fā)現(xiàn)細(xì)菌。涂片檢查包括涂片找細(xì)菌、淋球菌、酵母 菌等。3.2 、培養(yǎng)普通細(xì)菌培養(yǎng)：標(biāo)本接種血平板、麥康凱平板各一只，35C培養(yǎng)1824 小時(shí)，根據(jù)菌落特性和形態(tài)染色，進(jìn)行鑒定和藥敏試驗(yàn)，如培養(yǎng)48小時(shí)無菌生長(zhǎng)，即報(bào)告“無細(xì)菌生長(zhǎng) 。4、報(bào)告結(jié)果4.1、涂片報(bào)告“找到革蘭氏X性菌，淋球菌要報(bào)告在白細(xì)胞內(nèi)外是否發(fā)現(xiàn)革蘭