膠體金組研發(fā)思路(ppt)

1、膠體金組研發(fā)思路膠體金組研發(fā)思路明確對(duì)象檢測(cè)方法-膠體金法膠體金的制備 標(biāo)金過程試紙條的組成性能評(píng)估投入市場(chǎng)目錄目錄1 明確對(duì)象豬瘟 犬細(xì)小 犬瘟 豬瘟病毒是豬瘟的病原,主要通過直接接觸，或由于接觸污染的媒介物而發(fā)病。 臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn)： 最急性型最急性型：發(fā)病急，高熱稽留，痙攣，抽搐，皮膚和可視粘膜發(fā)紺，有出血點(diǎn)，很快死亡。 急性型和亞急性型急性型和亞急性型：高熱，精神沉郁，食欲減退，初便秘，后腹瀉，公豬包皮積液，離心端有出血點(diǎn)或紅斑不褪色，少數(shù)神經(jīng)癥狀，死亡率高。 慢性型慢性型：食欲時(shí)好時(shí)壞，體溫時(shí)高時(shí)低，便秘與腹瀉交替進(jìn)行。耳尖、尾根和四肢皮膚經(jīng)常發(fā)紫壞死，甚至干脫,消瘦，全身衰竭，后肢

2、麻痹，行走不穩(wěn)或不能立。 繁殖障礙型（母豬帶毒綜合癥）繁殖障礙型（母豬帶毒綜合癥）：早中期感染，母豬流產(chǎn)、死產(chǎn)、木乃伊胎等；孕后期感染，外表正常，仔豬也終身帶毒，免疫耐受（不產(chǎn)生免答）。豬瘟2檢測(cè)方法-膠體金法 不同環(huán)境下的穩(wěn)定性好、易保不同環(huán)境下的穩(wěn)定性好、易保存存、運(yùn)輸、運(yùn)輸，在室溫下可長(zhǎng)期在室溫下可長(zhǎng)期保保存，不存，不需冷藏需冷藏。1操作簡(jiǎn)便、易于肉眼觀察結(jié)果，不需經(jīng)過特殊復(fù)雜培訓(xùn)操作簡(jiǎn)便、易于肉眼觀察結(jié)果，不需經(jīng)過特殊復(fù)雜培訓(xùn)，操作者安，操作者安全，對(duì)環(huán)境無污染。全，對(duì)環(huán)境無污染。2操作快速、短時(shí)間獲得檢測(cè)結(jié)果，一般操作快速、短時(shí)間獲得檢測(cè)結(jié)果，一般1015 1015 分鐘即可得出結(jié)論

3、，分鐘即可得出結(jié)論，便于大批量篩查便于大批量篩查，取量少，檢測(cè)成本均較低，無需特殊儀器。，取量少，檢測(cè)成本均較低，無需特殊儀器。3適用范圍廣泛，檢測(cè)標(biāo)本種類多，可用于查血、尿液或糞便，因而適用范圍廣泛，檢測(cè)標(biāo)本種類多，可用于查血、尿液或糞便，因而適合各種檢查適合各種檢查。特異性較強(qiáng)、結(jié)果有可重復(fù)性。特異性較強(qiáng)、結(jié)果有可重復(fù)性。43膠體金的制備膠體金的制備并不難，但要制好高質(zhì)量的膠體金卻也并非易事。因此對(duì)每次制好的膠體金應(yīng)加以檢定，主要檢查指標(biāo)有顆粒大小，粒徑的均一程度及有無凝集顆粒等。采用化學(xué)還原法制備膠體金時(shí)， 通過改變反應(yīng)體系中氯金酸與還原劑的比例（增加或減少還原劑的量） 可得到所需不同直

4、徑的金顆粒。要還原材料：氯要還原材料：氯金酸（金酸（HAuCl4）所用還原劑：所用還原劑：檸檬酸鈉檸檬酸鈉還原制備金溶膠還原制備金溶膠標(biāo)金過程4復(fù)溶復(fù)溶PH蛋白蛋白封閉液封閉液離心離心調(diào)試調(diào)試膠體金的標(biāo)記膠體金的標(biāo)記pHpH：在pH接近和稍高于蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí),膠體金蛋白質(zhì)的吸附力最強(qiáng);pH過高過低都不利于兩者的結(jié)合,因此標(biāo)記時(shí)選擇精密的酸堿度測(cè)定儀器或者試紙條,采用不同方法重復(fù)校正,并進(jìn)行梯度試驗(yàn)找到最佳的標(biāo)記pH。蛋白：蛋白：過多蛋白質(zhì)標(biāo)記,造成浪費(fèi)的同時(shí)引起試紙的拖帶現(xiàn)象;過少蛋白質(zhì)標(biāo)記,導(dǎo)致膠體金標(biāo)記不完全,從而降低試紙的靈敏度及假陽性現(xiàn)象的出現(xiàn)。也需要在試驗(yàn)中進(jìn)行梯度試驗(yàn),反復(fù)比較不同標(biāo)記量的標(biāo)記物在破壞試驗(yàn)中的穩(wěn)定性,確定最佳的標(biāo)記量。5試紙條的組成檢測(cè)線檢測(cè)線質(zhì)檢線質(zhì)檢線吸收墊吸收墊樣品墊樣品墊硝酸纖維素膜硝酸纖維素膜連接墊連接墊（膠體金墊）（膠體金墊）背襯背襯（底板）（底板）6性能評(píng)估性能評(píng)估從3個(gè)重復(fù)批次的試紙條中分別隨機(jī)抽取一定數(shù)量試紙條，分別測(cè)試陰性檢測(cè)液和陽性檢測(cè)液，考察每一批次試紙條的線條是否均一、顏色深淺是否相當(dāng)、檢測(cè)結(jié)果是否一致。將制作好的試紙條放入密封袋內(nèi)，內(nèi)置干燥劑片，置于45C烘箱內(nèi)，分別于第7天、第14天、第21天、第28天、第35天、第42天取出，測(cè)試試紙條的穩(wěn)定性。重復(fù)性測(cè)試穩(wěn)定性測(cè)試(加速老化試驗(yàn)）特