HPLC測(cè)定心寧膠囊中葛根素含量

1、HPLC測(cè)定心寧膠囊中葛根素含量摘要目的：采用HPLC測(cè)定心寧膠囊中葛根素含量，以控制該制劑的質(zhì)量。方法：用十八烷基鍵合硅膠柱分離葛根素，以甲醇-水-磷酸(2807200.15)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)250nm。結(jié)果：葛根素峰與其它組分峰的分離度大于1，理論塔板數(shù)以葛根素峰計(jì)算為8310；線(xiàn)性范圍0.22g(r=0.9999)；平均回收率99.4%，RSD=2.47%(n=5)。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便、快速，適用于該產(chǎn)品質(zhì)量分析檢驗(yàn)。關(guān)鍵詞心寧膠囊；葛根素；HPLCDetermination of puerarin in Xinning capsule by HPLC assayWang Yonglin

2、(Wang YL),Tao Ling (Tao L),Zhou Baozhu (Zhou BZ) (Department of pharmacy,Guiyang Medical College,Guiyang,550004)ABSTRACTOBJECTIVE:To domminate the quality of Xinning capsule,the contents of Puerarin in Xinning capsule was determined by HPLC.METHOD:Puerarin was separated on Spherisorb C18 column and

3、detected at 250nm,by using methanol-water-phosphoric acid (2807200.15)as mobile phase.RESULTS:The resolution was greater than 1. The number of theoretical plates calculaled for Puerarin peak was 8310;The standard curve was linear over the range of 0.22g with the correllation coefficient 0.9999.The a

4、verage recovery was 99.4% with RSD=2.47%(n=7).CONCLUSION:The method is simple and fast,and can be used for quantitative analysis of Xinning capsule.KEY WORDSXinning capsule,puerarin,HPLC心寧膠囊系由葛根、丹參等中藥經(jīng)提取加工制成的膠囊劑，具有補(bǔ)氣活血、通脈鎮(zhèn)痛的功能。臨床用于治療冠心病、心絞痛。藥理試驗(yàn)研究及文獻(xiàn)資料12表明，葛根素是心寧膠囊中的主要有效成分。本實(shí)驗(yàn)采用HPLC對(duì)心寧膠囊中葛根素的含量測(cè)定方法進(jìn)

5、行了研究，結(jié)果表明，該法操作簡(jiǎn)便、快速、重現(xiàn)性好，可用于心寧膠囊的質(zhì)量控制。1儀器與試藥LC-6A高效液相色譜儀，SPD-6AV紫外-可見(jiàn)分光光度檢測(cè)器，C-R6A色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)(日本島津)。甲醇(色譜純)、磷酸(分析純)、葛根素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用)。2方法與結(jié)果2.1對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取葛根素對(duì)照品25mg，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻；精密吸取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻即得。2.2供試品溶液的制備取本品10粒的內(nèi)容物，混勻，取約0.1g,精密稱(chēng)定，置25ml量瓶中，精密加入甲醇10ml，稱(chēng)定重量，超聲處理1h，放冷，稱(chēng)量，用甲

6、醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，取上清液離心作為供試品溶液。同法制備不含葛根的陰性樣品溶液。2.3色譜條件島津Shim-Pack CLC-ODS色譜柱(0.156.0 )；流動(dòng)相：甲醇-水-磷酸(2807200.15)；流速：1ml/min;柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm(葛根素的最大吸收波長(zhǎng)13)。2.4系統(tǒng)適用性試驗(yàn)分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性供試液注入色譜儀，記錄色譜(1)，從中可見(jiàn)葛根素峰保留時(shí)間約為12min，陰性樣品譜在葛根素峰位置處無(wú)假陽(yáng)性峰，即本試液條件下葛根素峰與其它組分分離完全。理論塔板數(shù)以葛根素峰計(jì)算為8310，葛根素峰與其它組分峰的分離度大于1。1心寧膠囊中葛根素HPL

7、CA對(duì)照品；B供試品；C陰性樣品；1葛根素峰2.5線(xiàn)性關(guān)系考察精密吸取葛根素對(duì)照品溶液(0.1008mg/ml)2，4，6，8，10l進(jìn)樣，記錄色譜，以峰面積(v.s)對(duì)重量(g)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，回歸方程為：c(g)=4.98610-6A-9.3510-4(r=0.9999)擬合成過(guò)原點(diǎn)的方程為：c(g)=4.979910-6A，將一供試品溶液進(jìn)樣分析所得峰面積分別代入兩方程計(jì)算，結(jié)果的相對(duì)偏差為0.005%， 由此可看出截距近似為零，故采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算含量。線(xiàn)性范圍0.22g。2.6精密度試驗(yàn)取一供試品按供試品溶液的制備方法制備供試液，重復(fù)進(jìn)樣5次，RSD為0.8%。2.7重現(xiàn)性試驗(yàn)取一供試

8、品按供試品溶液的制備方法制備5份供試液，分別進(jìn)樣，RSD為0.85%。2.8回收率試驗(yàn)采用加樣回收，精密稱(chēng)取已測(cè)定含量的同一樣品7份，分別精密加入葛根素對(duì)照品，按供試品溶液的制備方法制備供試液，進(jìn)樣，記錄色譜，計(jì)算回收率。平均回收率為99.4%，RSD為2.47%。2.9樣品測(cè)定按供試品溶液的制備方法制備供試液，對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣，記錄色譜，測(cè)定峰面積。測(cè)定了5批樣品中葛根素含量，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。表15批樣品含量測(cè)定結(jié)果.n=3批號(hào)含量/gRSD/%9703121.230.479704191.350.829704231.460.339705081.410.519705161.270.533討

9、論 3.1葛根主要含黃酮類(lèi)化合物(大豆苷、大豆苷元、葛根素等)、尿囊素、-谷甾醇、胡蘿卜苷、香豆素等成分4，其中葛根素含量較高，文獻(xiàn)報(bào)道56不同產(chǎn)地、生長(zhǎng)季節(jié)及品種含量差異較大，鑒于大生產(chǎn)中的原料受產(chǎn)地、來(lái)源、品種等因素的影響，使測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生較大的差異，故對(duì)葛根藥材中葛根素的含量作了限度規(guī)定，葛根素含量以(C21H20O9)計(jì)，不得少于2.20%。3.2經(jīng)穩(wěn)定性試驗(yàn)考察，樣品溶液在室溫下(25)放置，每隔2h測(cè)定1次，5次測(cè)定的結(jié)果RSD為1.87%。說(shuō)明樣品液中葛根素含量在10h內(nèi)穩(wěn)定。3.3提取條件試驗(yàn)表明，選擇不同濃度的乙醇、甲醇，在超聲波浴中超聲(功率125W)處理，結(jié)果基本相同(1.170.03)%。但乙醇作溶劑的供試液在色譜分離中柱效不如甲醇提取液好，由于流動(dòng)相是甲醇體系，葛根素在柱中分離過(guò)程中乙醇有一定的展寬影響，甲醇則無(wú)此現(xiàn)象。故采用甲醇作溶劑超聲處理提取分離樣品中葛根素，具有操作簡(jiǎn)便、提取率高、雜質(zhì)少等優(yōu)點(diǎn)。含量測(cè)定方法的回收率、精密度高，重現(xiàn)性好。作者單位：王永林陶玲周寶珠 (貴陽(yáng)550004貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系)參考文獻(xiàn)1陰健，郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用(1).北京：北京學(xué)苑出版社，1993：626.2王曉青，傅靜.葛根的藥理作用研究進(jìn)展.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，17(3)：39.3中國(guó)藥典一部.1995：6