瘧原蟲血涂片制作作業(yè)指導(dǎo)書

1、瘧原蟲血涂片制作作業(yè)指導(dǎo)書1. 目的指導(dǎo)實驗室人員制作血涂片，完成瘧原蟲檢測工作2. 適用范圍適用于實驗室檢測人員3. 職責 瘧原蟲血涂片制作人員負責涂片編號及保存，4.作業(yè)指導(dǎo)4.1樣本采集及要求 4.1.1采用抗凝管采血：或在采血管里加入抗凝劑，將采集血樣加入并搖勻，備用 4.1.2指尖血、靜脈全血（抗凝血）樣本均可適用4.2血涂片的制作： 4.2.1血膜種類和位置 薄血膜：占玻片的近1/2。將血液涂呈薄膜狀，血細胞平輔在玻片上面 厚血膜：占玻片的1/6。血液涂成圓形，血量多 4.2.2厚血膜的制作用推片的一角，刮取約4 5ul(火柴頭大?。?，使血滴與平置的載玻片接觸，再由里向外旋轉(zhuǎn)，轉(zhuǎn)4

2、 8圈直徑0.8 1cm圓形厚血膜，血膜厚薄均勻，過厚易于脫落，過薄達不到檢出率的要求。厚血膜厚度以油鏡視野可見5 10個白細胞為宜。厚血膜血量：45ul微升，外形：圓形，直徑0.81.0cm 4.2.3薄血膜制作取潔凈的載玻片2張，1張以左手拇指，食指夾持載玻片兩端，用另一張邊緣平滑的載玻片做推片，用推片一端邊緣的中點取血約11.5ul的血量（小米粒大?。寡闻c平置的載玻片接觸，并形成2530度夾角，待血液向兩側(cè)擴展寬約2cm時，均勻而迅速地輕輕向左推出（約2.5cm長）薄血膜血量：11.5ul位置：玻片1/2外形：薄度均勻、無痕、長度：2.02.5cm 4.2.4血膜編號：血膜編號：

3、血膜制成后，以防差錯，待薄血膜干后用B2鉛筆，在薄血膜的右上角或血膜底部，寫上受檢者的個人編號。4.3血涂片固定及染色 4.3.1甲醇固定薄血膜 載玻片略向下傾斜，從一側(cè)擠出甲醇，試管平推下劃即可。甲醇不能觸碰到厚血膜 4.3.2單張染色法在量筒內(nèi)加2ml緩沖液或ph7.07.2凈水， 滴加吉氏原液4滴(每ml2滴），混勻，然后滴在已充分干躁的厚薄血膜上，染色30min。 1張玻片需2ml水，2滴ml染液，染色25-30min4.3.3染色效果 血膜藍中帶紫色，如果血膜顏色偏紅色, 說明染色偏酸性；血膜偏藍色, 則為偏堿性。4.4注意事項與其它因素 4.4.1載玻片必須清潔無油污，拿玻片時拿側(cè)

4、楞，固定薄血膜時，甲醇不要觸碰到厚血膜，放置3天以上的血片，在染色之前先用清水滴加在厚血膜上進行溶血，再進行染色，厚血膜干燥時不要高溫加熱，充分干燥后方可染色已稀釋的吉氏染液，須在30分鐘內(nèi)用完，沖染液時，要漂洗以免沖掉厚血膜，將血膜標本（血膜面朝下）插于涼干板上晾干。 4.4.2薄血膜過厚原因：使用血滴過大 、玻片與推片之間夾角過大 、展開血膜的動作太快 4.4.3血膜脫落原因、載玻片不干凈、血量多血膜厚 、血膜沒干透 、沖洗方法不當 4.4.4.染料溶劑的質(zhì)量 染液（母液）在使用時避免水對其污染，用專用無水的滴管取染液。染液的新舊 ： 新配制的染液因色素尚未充分溶解，染色力較弱且常呈現(xiàn)偏堿

5、性。染液存放時間越久，染色力越強。通常在染液配制12周后才使用，盛裝染液的瓶子應(yīng)加塞蓋密，以防吸潮而影響染液質(zhì)量。染液稀釋后使用時間：吉氏染液的主要成份是美藍、伊紅和由美藍氧化產(chǎn)生的天青，三者能在酒精溶液中溶解，但在水溶液中伊紅遇到美藍和天青即產(chǎn)生沉淀。因此，必須在稀釋染液當時使用，一般在半小時內(nèi)染色力最強。染液的稀釋濃度染液的濃度高其著色快而深，染液的濃度低其著色慢而淺或發(fā)綠。染色時間 染色時間長染色效果好，反之較差。室溫高則著色快，染色時間可略縮短，氣溫低可適當延長。染色用水染液的稀釋用水偏酸或偏堿，可用緩沖蒸餾水調(diào)整。染色后發(fā)現(xiàn)血膜顏色偏藍（偏堿）或偏紅（偏酸）時，可用與之相反的酸、堿度水沖洗血片予以糾正染色后不要直接將染液倒掉 沿玻片或染色缸邊緣加水使染液表面一層溢出，并輕輕沖洗，以