定量病理學(xué)技術(shù)在大腸癌研究中的應(yīng)用進(jìn)展 (1)

1、    定量病理學(xué)技術(shù)在大腸癌研究中的應(yīng)用進(jìn)展 (1)    定量病理學(xué)是用各種手段和分析方法在定性研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步從量化角度闡明疾病的病因、發(fā)病機(jī)理、發(fā)生發(fā)展規(guī)律及病變形態(tài)、機(jī)能和代謝特征的一門(mén)科學(xué)，是傳統(tǒng)病理學(xué)科的進(jìn)一步發(fā)展、完善和補(bǔ)充1。近來(lái)定量病理學(xué)應(yīng)用于大腸癌的研究取得了很大進(jìn)展，成為大腸癌研究的重領(lǐng)域之一。本文就形態(tài)結(jié)構(gòu)定量、DNA定量、核仁組成區(qū)相關(guān)嗜銀蛋白（AgNORs）定量、分子病理學(xué)定量、免疫組化定量及三維結(jié)構(gòu)重建等應(yīng)用于大腸癌的研究作一綜述。 近年來(lái)大腸癌在我國(guó)的發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)，95

2、年Wingo等報(bào)道的美國(guó)腫瘤流行病學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果中：大腸癌的發(fā)病率和死亡率在所有腫瘤分別占11%、10%2。掌握大腸癌的發(fā)生發(fā)展規(guī)律及診斷和預(yù)后的方法有重意義。傳統(tǒng)的定性診斷由于缺乏客觀指標(biāo)和受主觀因素的影響，使診斷的客觀性和準(zhǔn)確性在一定程度上受到限制。隨著顯微測(cè)量技術(shù)的發(fā)展和計(jì)算機(jī)的廣泛應(yīng)用，大腸癌病理研究從定性描述走向了定量分析，為探討大腸腫瘤發(fā)生發(fā)展規(guī)律及提高診斷水平開(kāi)辟了一條新途徑。國(guó)外定量病理研究開(kāi)展較早，有的已將定量病理測(cè)試和分析作為常規(guī)內(nèi)容，國(guó)內(nèi)起步較晚但發(fā)展較快1。目前大腸癌定量病理學(xué)應(yīng)用研究的主內(nèi)容有：形態(tài)結(jié)構(gòu)定量、DNA定量、核仁組成區(qū)相關(guān)嗜銀蛋白（AgNORs）定量、分子病理

3、學(xué)定量、免疫組化定量及三維重建等，以前三者研究較多。本文將分別綜述這幾方面的研究狀況。 1 大腸癌的形態(tài)定量 1.1 形態(tài)定量含義及參數(shù)指標(biāo) 形態(tài)定量是對(duì)組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行定量分析，它通過(guò)有關(guān)的量化指標(biāo)反映組織的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外目前對(duì)大腸癌形態(tài)定量研究主測(cè)試了以下形態(tài)結(jié)構(gòu)參數(shù)：細(xì)胞核面積、周長(zhǎng)、長(zhǎng)軸、短軸、形狀因子、核漿比、核的體積密度、表面積密度、平均直徑、數(shù)密度、腺體的體密度、平均曲率、平均曲率的均值、體積及重平均體積、表面積與體積比等3，4，5，6。 1.2形態(tài)定量的測(cè)試方法 有網(wǎng)格測(cè)試和儀器測(cè)試兩類方法。儀器測(cè)試包括基于計(jì)算機(jī)分析的數(shù)字化儀和圖像分析儀，目前人們把圖像分析技術(shù)用于形態(tài)定

4、量，即通過(guò)數(shù)字化儀或/和攝像系統(tǒng)將宏觀或顯微圖像輸入計(jì)算機(jī)處理和分析，具有測(cè)量快、準(zhǔn)確性高及客觀性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。 1.3形態(tài)定量在大腸癌發(fā)生發(fā)展和診斷中的應(yīng)用 腫瘤組織結(jié)構(gòu)的異型性和瘤細(xì)胞的形態(tài)變化的是常規(guī)病理診斷的重依據(jù)，光鏡觀察對(duì)細(xì)胞核形態(tài)只能作大致的描述，易帶主觀性。形態(tài)定量分析能量化反映組織和細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，可排除主觀因素的影響。國(guó)內(nèi)外學(xué)者通過(guò)對(duì)大腸癌形態(tài)定量研究，發(fā)現(xiàn)人大腸癌直接由粘膜發(fā)生的只是少數(shù)，多數(shù)是在腺瘤基礎(chǔ)上發(fā)生癌變，提出了大癌的發(fā)生發(fā)展模式：腺瘤癌模式。定量形態(tài)學(xué)參數(shù)可作為表達(dá)大腸癌及癌前病變的客觀指標(biāo)，大腸腫瘤是重的癌前病變，形態(tài)學(xué)上對(duì)其非典型增生程度分級(jí)的不一致性有時(shí)可達(dá)

5、34%-41%7。形態(tài)定量分析可彌補(bǔ)這一不足。核形態(tài)定量分析可為非典型增生程度的分組提供定量的客觀依據(jù)。根據(jù)形態(tài)定量參數(shù)的大小， Meijer在研究腫瘤不典型增生時(shí)，發(fā)現(xiàn)各參數(shù)值向兩端集中，即向輕度不典型增生和重度不典型增生值集中，提出腫瘤不典型增生似乎分為二個(gè)等級(jí)比三個(gè)級(jí)別更合適，即輕度不典型增生和重度不典型增生8。Sato對(duì)一組大腸病變細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的定量形態(tài)學(xué)研究顯示，隨著細(xì)胞逐漸取得惡性特征，細(xì)胞核逐漸變圓，癌細(xì)胞的核最圓，形態(tài)因子（PE）最大。Hajima9的研究顯示：形態(tài)定量中核漿比按大腸正常粘膜和輕、中、重度不典型增生、癌的順序而增大，除中、重度不典型增生外，各病變均有顯著差異，認(rèn)

6、為它是一項(xiàng)有價(jià)值的診斷指標(biāo)。易平勇等人通過(guò)形態(tài)定量參數(shù)分析發(fā)現(xiàn)：絨毛狀腺瘤比管狀腺瘤更易癌變。Riddell等人分析核短軸、核漿比、核形狀因子的變化特點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)輕、中度不典型增生均與癌有顯著性差異，而重度不典型增生與癌的差異性不顯著，認(rèn)為二者間只有量的差異而無(wú)質(zhì)的區(qū)別，甚至把重度不典型增生稱為浸潤(rùn)前癌，并認(rèn)為重度不典型增生將不可避免發(fā)生癌變，周水云等在研究大腸腫瘤分級(jí)診斷時(shí)提出了細(xì)胞核形態(tài)定量參數(shù)分析聯(lián)合DNA指數(shù)（倍體）分析能對(duì)大腸腺上皮各級(jí)異形增生及腫瘤癌變作出較正確的分級(jí)診斷和鑒別診斷10。此外我們用計(jì)算機(jī)圖像分析技術(shù)對(duì)大腸癌、腺癌上皮細(xì)胞進(jìn)行色度學(xué)定量分析，提出了大腸腫瘤和 腺癌亞型的細(xì)

7、胞來(lái)源分類法11。 1.4 大腸癌的形態(tài)定量與預(yù)后 定量病理學(xué)形態(tài)定量研究中可根據(jù)癌細(xì)胞的各種各參數(shù)大小對(duì)預(yù)后進(jìn)行判斷。有文獻(xiàn)報(bào)道大腸癌細(xì)胞的形態(tài)因子PE越大，其預(yù)后愈差12。Mitmaker等人的研究認(rèn)為形狀因子PE指數(shù)大于0.84是預(yù)后不良的標(biāo)志13。易平勇等人對(duì)大腸癌核的形態(tài)定量研究時(shí)注意到：核面積、核周長(zhǎng)、核等周直徑、核體積、核面積標(biāo)準(zhǔn)差的大小變化可反映五年存活率的高低，癌細(xì)胞形態(tài)表達(dá)為大核者，其預(yù)后差。核漿比率可作為結(jié)直腸癌的重預(yù)后參數(shù)指標(biāo)14，Garson15等人的研究認(rèn)為大腸癌病人癌細(xì)胞核的體密度較大者，其生存期長(zhǎng)，預(yù)后較好，表明癌細(xì)胞核的定量與預(yù)后關(guān)系密切。 2 大腸癌的DNA

8、定量與倍體分析 2.1 DNA定量理論的含義及定量指標(biāo) DNA含量是指細(xì)胞內(nèi)含有DNA的相對(duì)量，它能反映細(xì)胞核酸代謝情況。人的正常細(xì)胞染色體的數(shù)目和形狀是相對(duì)穩(wěn)定的。每一體細(xì)胞具有46條染色體，可配成23對(duì)，稱二倍體；當(dāng)染色體的數(shù)目整組增加，超過(guò)三倍體者稱為多倍體。應(yīng)用細(xì)胞分析儀進(jìn)行DNA測(cè)量，可反映細(xì)胞染色體的畸變。一些研究認(rèn)為，腫瘤細(xì)胞DNA呈非整倍體意味著該腫瘤為惡性16。細(xì)胞核DNA定量指標(biāo)較常用的有：DNA指數(shù)（DI）：反映腫瘤細(xì)胞DNA相對(duì)含量的平均水平；二倍體偏離指數(shù)（2CDI）：顯示腫瘤細(xì)胞DNA含量偏離二倍體的程度，文獻(xiàn)認(rèn)為該參數(shù)在表達(dá)DNA含量異常的程度較DNA指數(shù)好17；

9、積分光密度（IOD）：間接反映細(xì)胞核DNA相對(duì)含量；主峰倍體值（SP）：如果主峰倍體值小于1.9C或大于2.1C則可認(rèn)為該樣本為非整倍體，如果參照細(xì)胞的變異系數(shù)值小于3%則主峰值只在1.94C或大于2.04C即可定為非整倍體18。 2.2 DNA定量分析的方法 目前DNA定量分析的方法主有二種，一種是流式細(xì)胞術(shù)：這是一項(xiàng)用流式細(xì)胞儀對(duì)懸液中流動(dòng)的熒光標(biāo)記的大量單細(xì)胞進(jìn)行快速精確的定量分析技術(shù)；另一種是胸態(tài)圖像分析術(shù)，如圖像分析儀、顯微熒光光度計(jì)、顯微分光光度計(jì)等，它是對(duì)顯微鏡下的靜態(tài)細(xì)胞圖像進(jìn)行定量分析。夏潮涌報(bào)道目前主采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）和細(xì)胞圖像光度術(shù)（ICM）測(cè)量和分析細(xì)胞學(xué)樣品單個(gè)

10、完整腫瘤細(xì)胞的DNA含量的倍體，國(guó)際分析細(xì)胞學(xué)會(huì)和國(guó)際細(xì)胞學(xué)會(huì)分別為FCM和ICM作細(xì)胞核DNA含量與倍體分析推薦了統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)19。Diest在評(píng)價(jià)ICM的應(yīng)用時(shí)提出：雖然ICM測(cè)量速度不如FCM快，但它可以直觀地檢測(cè)細(xì)胞，隨時(shí)測(cè)量其結(jié)構(gòu)特征，在發(fā)現(xiàn)少有的核變化上優(yōu)于FCM20。97年國(guó)際定量病理會(huì)議討論了FCM在人體實(shí)性腫瘤的診斷和預(yù)后價(jià)值，并指出FCM在腫瘤發(fā)生前能提供客觀診斷資料；在早期癌檢測(cè)中能提高診斷效果；在確定大多數(shù)腫瘤的預(yù)后、復(fù)發(fā)、死亡等方面有顯著的臨床價(jià)值21。在DNA定量分析方法的標(biāo)本應(yīng)用方面除了切片外也可作涂片、印片等可作參考。    

11、        摘 定量病理學(xué)是用各種手段和分析方法在定性研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步從量化角度闡明疾病的病因、發(fā)病機(jī)理、發(fā)生         本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請(qǐng)不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請(qǐng)聯(lián)系我們。2.3 DNA定量分析在大腸癌發(fā)生發(fā)展及診斷中的應(yīng)用 大腸腫瘤并非由正常細(xì)胞一躍而成為癌細(xì)胞，通常需有量變到質(zhì)變的發(fā)展過(guò)

12、程。大腸腺瘤被認(rèn)為是大腸癌的主來(lái)源，分析癌前細(xì)胞DNA的含量變化有助于探討癌變的發(fā)生發(fā)展規(guī)律。國(guó)內(nèi)外大量病理和臨床研究資料表明：腫瘤細(xì)胞DNA非整倍體是惡性腫瘤的重標(biāo)志之一，DNA異倍體出現(xiàn)是腫瘤生物學(xué)行為惡性、預(yù)后不良的重特征，測(cè)試胞核DNA含量并進(jìn)行倍體分析對(duì)惡性腫瘤的病理診斷、分類分級(jí)、預(yù)后判斷有重價(jià)值22，23。研究發(fā)現(xiàn)24：大腸腺瘤樣息肉病例腫瘤細(xì)胞DNA含量均在正常范圍內(nèi)，但當(dāng)腺瘤樣息肉伴有不典型增生和癌變時(shí)，細(xì)胞核平均DNA含量呈遞增趨勢(shì)，但是正常粘膜、腺瘤、腺癌各組間有較大的重疊。Seiynu等25人用流式細(xì)胞儀分析大腸癌細(xì)胞時(shí)發(fā)現(xiàn)：DNA非整倍體在腺瘤階段已發(fā)生，這一結(jié)果不但

13、支持了腺瘤癌模式的理論，而且表明DNA非整倍體可能是結(jié)腸息肉惡變?cè)\斷的早期指標(biāo)之一。DNA非整倍體在惡性病變前二年即可檢測(cè)到26。有報(bào)道某些潰瘍性結(jié)腸炎可以不經(jīng)過(guò)異型增生階段直接發(fā)生癌變，此時(shí)DNA倍體分析顯得更有意義27。Hammarberg報(bào)告28活檢系輕度不典型增生、DNA含量明顯增高且DNA直方圖呈二個(gè)異倍體細(xì) 胞群的慢性潰瘍性結(jié)腸炎，一年后復(fù)查發(fā)現(xiàn)相應(yīng)部位發(fā)生腫瘤，為中分化腺癌；此外慢性潰瘍性結(jié)腸炎異倍體隨病程延長(zhǎng)而增加，異倍體發(fā)生率與癌變率平行。鄭香玲等研究認(rèn)為：惡性腫瘤的分化程度與DNA含量和倍體類型有關(guān)，分化程度越差其DNA的含量越高，高、中、低分化腺癌細(xì)胞核DNA的非整倍體不

14、斷增多，DNA含量直方圖峰值向右偏離，而良性腫瘤細(xì)胞DNA含量高于正常細(xì)胞，4倍體增多29。 2.4 DNA定量分析與預(yù)后 腫瘤細(xì)胞核DNA含量與臨床預(yù)后有明顯關(guān)系，一般認(rèn)為DNA倍體量的變化與臨床預(yù)后的時(shí)間長(zhǎng)短成反比。Roguum檢測(cè)了100例大腸癌術(shù)后患者，發(fā)現(xiàn)二倍體細(xì)胞患者五年生存率明顯高于非整倍體細(xì)胞患者，他認(rèn)為非整倍體細(xì)胞是影響預(yù)后的一個(gè)獨(dú)立因素，他還證實(shí)DudesD或C期患者非整倍體更常見(jiàn)，預(yù)后差30。而Thomas等人則認(rèn)為：腫瘤細(xì)胞DNA含量依然是一個(gè)有爭(zhēng)議的預(yù)后指標(biāo)，DNA含量沒(méi)有單獨(dú)提供額外的預(yù)后信息，大腸癌預(yù)后由臨床和組織病理學(xué)指標(biāo)所決定，即取決于腫瘤的部位、腫瘤浸潤(rùn)深度

15、、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移以及病理分級(jí)31。Reiping等人在研究大腸癌DNA倍體和流式細(xì)胞計(jì)數(shù)與組織病理學(xué)參數(shù)及預(yù)后的估價(jià)時(shí)批出：DNA倍體的類型同一些組織病理學(xué)指標(biāo)改變相關(guān)，即與腫瘤的部位、惡性度的病理分級(jí)、血管淋巴管的浸潤(rùn)及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移等有關(guān)。如：遠(yuǎn)端結(jié)腸癌的非整倍體較近端的非整倍體為多，病理分組中惡性度高的多為非整倍體，二倍體腫瘤多局限于粘膜下層且很少與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，有血管淋巴管浸潤(rùn)的結(jié)直腸癌非整倍體更高，但流式細(xì)胞計(jì)數(shù)同病理分級(jí)的各級(jí)大腸癌病人的生存期無(wú)關(guān)32。還有研究表明：DNA非整倍體與大腸癌的生物學(xué)行為相關(guān)，為不良預(yù)后的一個(gè)可靠參數(shù)33?？傮w來(lái)看，大腸癌細(xì)胞核DNA含量的升高，非整倍體

16、出現(xiàn)與預(yù)后的關(guān)系不可忽視。 3 大腸癌的核仁組成區(qū)相關(guān)嗜銀蛋白（AgNORs）定量 3.1 AgNORs理論含義 核仁組成區(qū)（NORs）是DNA的一個(gè)片斷，即18S、28S、核糖體基因（rDNA）的分布區(qū)。在人類它們位于五對(duì)近端著絲點(diǎn)染色體（13、14、15、21、22）的次縊痕處，是形成核仁的部位，故與細(xì)胞增殖有關(guān)。NORs可用銀染技術(shù)顯示，因銀與rRNA相關(guān)的酸性非組蛋白結(jié)合，形成銀染陽(yáng)性的NORs顆粒（AgNORs）。AgNORs可作為NORs及其rDNA轉(zhuǎn)錄活性的標(biāo)志，可用來(lái)反映核仁結(jié)構(gòu)和轉(zhuǎn)錄功能的變化34，為定量分析細(xì)胞增生和分化提供信息。 3.2 AgNORs定量測(cè)定方法 AgNO

17、Rs定量測(cè)試和表達(dá)方法不統(tǒng)一。國(guó)內(nèi)已有學(xué)者提出有關(guān)AgNORs計(jì)數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化方案35。 3.3 AgNORs定量在大腸癌發(fā)生發(fā)展和診斷中的應(yīng)用 國(guó)內(nèi)外研究結(jié)果表明大腸腫瘤細(xì)胞核內(nèi)AgNORs的數(shù)量隨上皮細(xì)胞增生程度的遞增而增高，即癌AgNORs腺癌AgNORs正常粘膜AgNORs，并且也隨癌細(xì)胞分化程度的增高AgNORs計(jì)數(shù)而逐漸降低。Morais等人對(duì)大腸隱窩上皮按長(zhǎng)軸方向由表及里分成表層、中間層和增生層，用AgNORs的量化指標(biāo)分析其規(guī)律，他用的量化參數(shù)為：核仁組成區(qū)的體密度（VV）、面數(shù)密度（NA）,結(jié)果顯示：VV和NA在增生層最高，至表層依次降低，認(rèn)為這兩個(gè)參數(shù)能作為大腸上皮增生潛能的客

18、觀指標(biāo)，并指出NA在探測(cè)切片的區(qū)別時(shí)比VV更敏感。該研究表明：體視學(xué)與AgNORs定量分析相結(jié)合對(duì)于估價(jià)組織正常分化和增生形式以及預(yù)測(cè)腫瘤組織以增生為特征的生物學(xué)行為有較高的價(jià)值，并提示在人體正常大腸隱窩不同分層切片AgNORs定量可作為增生的標(biāo)志36。一些研究表明：AgNORs面積檢出的結(jié)果比顆粒計(jì)數(shù)的結(jié)果更為確切，更符合AgNORs量變的理論規(guī)律。在腺瘤癌變過(guò)程中，AgNORs和DNA含量的顯著性增加并非完全同步，輕、中度異型腺癌發(fā)展為重度異型時(shí)AgNORs含量就顯著性增加，而DNA含量卻無(wú)顯著性增加，因此有學(xué)者認(rèn)為AgNORs含量的顯著性變化是腺瘤早期惡變的信號(hào)。曾桃英等人研究大腸粘膜、

19、癌旁粘膜、腺瘤、腺癌的AgNORs含量時(shí)，發(fā)現(xiàn)上述四組AgNORs計(jì)數(shù)及直徑均值雖然依次呈遞增關(guān)系，但各組之間的差異用t、u方法檢驗(yàn)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此他們認(rèn)為單純用AgNORs計(jì)數(shù)研究 大腸上皮良、惡生腫瘤的意義并不大。 3.4 在腸癌AgNORs定量與預(yù)后 許多研究已證明：AgNORs計(jì)數(shù)是一項(xiàng)預(yù)后參數(shù)指標(biāo)。王杉等認(rèn)為：AgNORs計(jì)數(shù)高于或等于10的結(jié)腸癌患者的生存率較AgNORs計(jì)數(shù)低于10的患者差。結(jié)合DNA倍體分析，低AgNORs計(jì)數(shù)的二倍體腫瘤預(yù)后較高AgNORs計(jì)數(shù)的異倍體腫瘤預(yù)后為好，術(shù)后生存5年組的AgNORs計(jì)數(shù)明顯高于生存5年組（P0.001），提示AgNORs和DNA倍

20、體均影響結(jié)直腸癌的惡性潛能，聯(lián)合檢測(cè)AgNORs和DNA倍體能較好地反映結(jié)腸癌的預(yù)后，有學(xué)者37發(fā)現(xiàn)AgNORs值與結(jié)腸癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，有轉(zhuǎn)移和無(wú)轉(zhuǎn)移的兩組AgNORs均值分別是5.4±1.28和3.04±1.08，差異有顯著性。李杰38的研究認(rèn)為：AgNORs值與生存率密切相關(guān)，AgNORs大于4和小于4有著顯著不同的預(yù)后。Motohisa39等人在研究DNA含量和AgNORs計(jì)數(shù)與大腸癌相關(guān)關(guān)系時(shí)，把兩者結(jié)合分為4組，即第一組：DNA二倍體與AgNORs低計(jì)數(shù)；第二組；非整倍體與低計(jì)數(shù)；第三組：二倍體與高計(jì)數(shù)；第四組：非整倍體和高計(jì)數(shù)。結(jié)果表明：第一組預(yù)后最好，第四組

21、最差，第一組復(fù)發(fā)率為2.1%、第二組16.7%、第三組23.5%、而第四組則為47.5%，顯然AgNORs計(jì)數(shù)低的病例復(fù)發(fā)率低，計(jì)數(shù)高的病例復(fù)發(fā)率高，而DNA呈異倍體類型的病例復(fù)發(fā)率更高。因此大腸癌AgNORs計(jì)數(shù)的高低和DNA倍體的改變與預(yù)后的好壞密切相關(guān)。            摘 定量病理學(xué)是用各種手段和分析方法在定性研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步從量化角度闡明疾病的病因、發(fā)病機(jī)理、發(fā)生        

22、 本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請(qǐng)不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請(qǐng)聯(lián)系我們。4 大腸癌分子病理學(xué)定量和免疫組織化學(xué)定量分析 4.1大腸癌分子病理學(xué)定量 隨著人們對(duì)腫瘤的認(rèn)識(shí)不斷深入，對(duì)癌的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的研究已深入到分子水平，在分子水平研究大腸癌的發(fā)生機(jī)理及預(yù)后已成為國(guó)內(nèi)外學(xué)者的一個(gè)熱點(diǎn)。已報(bào)道大腸癌的分子遺傳學(xué)方面的異常包括抑癌基因（如：apc、mcc、dcc、P53和可能存在于染色體8p、1p及22q上的基因）的失活和致癌基因（如：ras、src、和myc）的激活以及癌轉(zhuǎn)移抑制

23、基因nm23等基因的變化。抑癌基因P53的突變是迄今已知的與癌癥相關(guān)的最普遍的基因變化，研究發(fā)現(xiàn)；75%以上的大腸癌中存在P53基因突變，而P53基因突變后其表達(dá)產(chǎn)物么缺如、么出現(xiàn)P53蛋白過(guò)量表達(dá)。因此對(duì)表達(dá)量的測(cè)定已是分子病理學(xué)定量的一個(gè)重內(nèi)容，免疫組化和PCR技術(shù)的應(yīng)用在微小組織上對(duì)多重參數(shù)進(jìn)行測(cè)量蛋白和基因的表達(dá)已成為可能10，定量測(cè)試這些基因表達(dá)量的改變對(duì)認(rèn)識(shí)癌的發(fā)生機(jī)理、轉(zhuǎn)移和預(yù)后有重意義。 有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)4正常大腸中P53 mRNA表達(dá)量很弱，明顯低于大腸癌組織（P0.001），隨著Dudes分期的進(jìn)展，P53 mRNA表達(dá)呈逐漸增高的趨勢(shì)，Dukes期P53 mRNA表達(dá)量增高

24、相當(dāng)顯著；癌瘤直徑大于5cm與小于5cm的大腸癌相比P53 mRNA表達(dá)者顯著增高；中等分化的大腸癌中P53 mRNA表達(dá)顯著高于高分化。余金生等人的研究表明42：正常大腸粘膜、腺瘤和癌的P53蛋白表達(dá)量依次遞增，并隨大腸腺瘤不典型增生程度的加重及瘤體的增大而增多，DNA含量呈異倍體的大腸腺瘤的P53蛋白表達(dá)量顯著高于DNA呈二倍體的大腸腺瘤。目前許多研究發(fā)現(xiàn)致癌基因ras等的表達(dá)量與癌的發(fā)生也有密切的關(guān)系。 研究表明：P53蛋白的表達(dá)量與大腸癌預(yù)后關(guān)系密切43，Kenneth等人研究發(fā)現(xiàn)：nm23-H1等位基因突變、缺失及其表達(dá)量的變化對(duì)預(yù)后潛能有重意義；P53基因、dcc基因和非近端常染色

25、體臂的大部分缺失與大腸癌的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和較差的預(yù)后有關(guān)；在一些大腸癌中L-myc的as基因型被認(rèn)為與癌轉(zhuǎn)移高度相關(guān)。 4.2大腸癌免疫組化定量 免疫組化技術(shù)應(yīng)用于腫瘤的研究在國(guó)內(nèi)外已廣泛開(kāi)展，免疫組化定量方法也有新的發(fā)展44，免疫組化定量分析在大腸癌研究中的應(yīng)用已上升到一個(gè)新的水平。人們應(yīng)用免疫組化技術(shù)對(duì)大腸癌發(fā)生發(fā)展有關(guān)的抗原或蛋白以及參與免疫反應(yīng)有關(guān)的細(xì)胞等進(jìn)行了定量檢測(cè)和分析，探討了大腸癌的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律。目前人們用生物素一卵白素酶標(biāo)記復(fù)合物免疫組化技術(shù)（ABC免疫組化）對(duì)大腸癌組織中纖維連接蛋白進(jìn)行定量研究，發(fā)現(xiàn)大腸癌組織纖維連接蛋白量隨著分化程度 的降低細(xì)胞纖維連接蛋白逐漸降低，說(shuō)明了纖

26、維連接蛋白的減少能反映大腸癌細(xì)胞分化的程度45。劉思純等人46，47用ABC免疫組化方法對(duì)大腸癌、大腸腺癌組織中與抗原提呈和免疫反應(yīng)有關(guān)的樹(shù)突狀細(xì)胞以及與周?chē)馨图?xì)胞的關(guān)系進(jìn)行了定量研究，結(jié)果表明：大腸腺瘤和大腸癌組織樹(shù)突狀細(xì)胞較正常明顯增多，并和淋巴細(xì)胞相伴浸潤(rùn)，癌周淋巴細(xì)胞反應(yīng)明顯者癌組織樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)量明顯增多。Angelopoulou等人48用免疫熒光技術(shù)定量檢測(cè)大腸癌病人血清P53蛋白抗體量，提示癌的病變過(guò)程中抗體量的變化反映了疾病的進(jìn)展和好轉(zhuǎn)，結(jié)果表明：在大腸癌病人產(chǎn)生P53抑癌蛋白抗體是普遍性的，P53抗體血清學(xué)分析對(duì)監(jiān)測(cè)大腸癌病人的病情變化有一定的價(jià)值，但對(duì)預(yù)后沒(méi)有意義。Furu

27、ta等人49在研究糖蛋白CD44表達(dá)和大腸腫瘤上皮、基質(zhì)細(xì)胞增生的關(guān)系時(shí)，對(duì)CD44和增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）采用雙標(biāo)記免疫組化進(jìn)行定量分析，結(jié)果表明：當(dāng)細(xì)胞CD44陰性時(shí)，PCNA陽(yáng)性的概率比CD44陽(yáng)性時(shí)更高，也說(shuō)明大腸腫瘤CD44表達(dá)的水平的高低與細(xì)胞增生不同步?？傊庖呓M化定量技術(shù)已應(yīng)用大腸癌研究的方方面面，畢將有重大突破。 5 大腸癌的三維結(jié)構(gòu)重建和激光共聚焦顯微鏡 5.1 大腸癌的三維結(jié)構(gòu)重建 三維結(jié)構(gòu)重建是用一組連接斷面圖像重構(gòu)其三維結(jié)構(gòu)。這一過(guò)程目前常采用計(jì)算機(jī)圖像處理和分析技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)，重建的三維圖像顯示在監(jiān)視器上，可從不同角度對(duì)組織整體或任何斷面組織的分布進(jìn)行觀察分析。與

28、體視學(xué)分析不同的是后者是應(yīng)用體視學(xué)原理在二維圖像基礎(chǔ)上通過(guò)幾何概率等數(shù)學(xué)方法推導(dǎo)三維空間結(jié)構(gòu)。張?jiān)碌热擞萌S重建技術(shù)對(duì)大腸腺瘤癌變進(jìn)行了研究，認(rèn)為這種方法能提高癌變檢出率，對(duì)準(zhǔn)確判定斷端有無(wú)癌浸潤(rùn)也有重意義50。用三維重建技術(shù)對(duì)大腸癌的研究國(guó)內(nèi)外報(bào)道不多，其應(yīng)用有待進(jìn)一步的拓展和深入。 5.2 激光共聚焦顯微鏡的應(yīng)用 激光共聚焦顯微鏡（CLSM）是80年代發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)劃時(shí)代意義的高科技產(chǎn)品，它是在熒光顯微鏡成像的基礎(chǔ)上加裝了激光掃描裝置，利用計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖像處理。CLSM廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域，它不僅可應(yīng)用于細(xì)胞內(nèi)粒子和細(xì)胞通訊、細(xì)胞形態(tài)及功能的測(cè)定和研究，而且可結(jié)合計(jì)算機(jī)進(jìn)行細(xì)胞和組

29、織三維結(jié)構(gòu)重建的研究，它是通過(guò)激光共聚焦掃描技術(shù)獲得組織、細(xì)胞內(nèi)部不同層面的信息，然后通過(guò)計(jì)算機(jī)軟件程序的處理將逐幀采集的斷層圖像在電腦主運(yùn)算系統(tǒng)中三維重建，使組織、細(xì)胞結(jié)構(gòu)的研究由二維水平深入到三維水平51，這種對(duì)微觀結(jié)構(gòu)的三維重建是今后大腸癌研究應(yīng)用方向之一。 綜上所述：定量病理測(cè)試及分析方法在大腸癌中的應(yīng)用，提高了對(duì)大腸癌發(fā)生、發(fā)展、診斷和預(yù)后的認(rèn)識(shí)。上述幾種方法既有獨(dú)立性，又能相互交叉、滲透，相互對(duì)比和聯(lián)合應(yīng)用。如何將大腸癌的定量病理學(xué)研究深入下去？我們認(rèn)為以下幾點(diǎn)值得考慮： （1）多種定量病理技術(shù)以及參數(shù)的聯(lián)合應(yīng)用 Motohisa等人同時(shí)利用DNA定量和AgNORs計(jì)量對(duì)大腸癌進(jìn)行

30、研究，結(jié)果表明這兩種方法的聯(lián)用與單使用一個(gè)方法相比能明顯縮小良、惡性組間的重疊范圍，這為研究大腸癌的發(fā)生及鑒別良惡性又增加了一個(gè)新的資料。在DNA定量中，F(xiàn)CM和ICM的聯(lián)合應(yīng)用能夠互相補(bǔ)充提高檢測(cè)的敏感性。Fausel等人52同時(shí)應(yīng)用FCM和ICM對(duì)大腸癌進(jìn)行DNA定量研究，其結(jié)果表明：在倍體分類上用FCM檢測(cè)非整倍體例數(shù)占56%，而用ICM則占70%；在五年生存率上用FCM檢測(cè)的二倍體腫瘤病人占67%，而用ICM占75%。這個(gè)研究也表明：用ICM檢測(cè)似乎比FCM更敏感。Trope等人在研究卵巢上皮癌時(shí)用FCM和ICM檢測(cè)DNA倍體也有類似的報(bào)道53。目前運(yùn)用單個(gè)病理定量參數(shù)對(duì)大腸癌進(jìn)行研究

31、，其特異性尚有局限，一些參數(shù)值的分布在大腸癌、腺瘤和正常組織之間有可能重疊較明顯，聯(lián)合運(yùn)用幾種或多種特征性較強(qiáng)的參數(shù)，可縮小或消除這種重疊，有助于進(jìn)一步提高診斷的準(zhǔn)確性。            摘 定量病理學(xué)是用各種手段和分析方法在定性研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步從量化角度闡明疾病的病因、發(fā)病機(jī)理、發(fā)生         本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者

32、，請(qǐng)不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請(qǐng)聯(lián)系我們。(2) 發(fā)展分子定量病理學(xué) 分子病理學(xué)定量是以定量分析為基礎(chǔ)，在分子水平上進(jìn)行定量研究。從分子水平探討大腸癌的發(fā)病機(jī)理及預(yù)后，是一新的研究方向，有許多問(wèn)題需研究和探索，如：大腸癌的發(fā)生究竟需多少個(gè)基因發(fā)生改變， 基因的表達(dá)蛋白量與癌的關(guān)系，與癌發(fā)生的有關(guān)基因改變究竟起多大作用，這些基因及其蛋白的表達(dá)量與預(yù)后的關(guān)系等將是定量病理學(xué)在大腸癌和腫瘤分子生物學(xué)研究中需解決的總理。 （3）注意現(xiàn)有形態(tài)定量參數(shù)的局限性，進(jìn)一步開(kāi)發(fā)新的特征性強(qiáng)的參數(shù) 定量病理學(xué)還處在發(fā)展初期，在大腸癌中的應(yīng)用還得進(jìn)一步深化拓寬

33、，許多參數(shù)在良、惡性病變中的分布有重疊，給診斷帶來(lái)困難，這就需我們進(jìn)一步開(kāi)發(fā)新的特異性好的參數(shù)。 (4)DNA定量方面應(yīng)注意在切片組織中對(duì)DNA定量存在的不足 以細(xì)胞核切面為單位測(cè)得的積分吸光度不但與DNA染色的顯色反應(yīng)強(qiáng)度有關(guān)，而且還取決于細(xì)胞核切面的面積大小和平均吸光度。切面的面積與完整細(xì)胞核的體積、形狀、大小分布有關(guān)：平均吸光度與切片厚度和單位細(xì)胞核體積的密度有關(guān)。薄切片的細(xì)胞核切片完整細(xì)胞核的一部分，其體積占細(xì)胞核內(nèi)的位置，所以其DAN含量的測(cè)量結(jié)果有可能不能真實(shí)反映組織內(nèi)完整細(xì)胞核DNA的含量和倍體，存在難以彌補(bǔ)的缺陷和局限性。因此，探索適合在組織薄切片上測(cè)量完整細(xì)胞核DNA含量和倍

34、體的方法是非常必的。體視學(xué)的的發(fā)展為病理學(xué)家從腫瘤組織細(xì)胞二維切片上的形態(tài)特征定量推斷三維特征提供了有力的工具，相信它與圖像分析儀及三維重建有機(jī)結(jié)合，能改進(jìn)和完善組織切片上腫瘤細(xì)胞DNA含量測(cè)定。 大腸癌的定量病理學(xué)研究還有許多有待解決的問(wèn)題，有著廣闊的前景，定量病理學(xué)分析作為常規(guī)臨床病理分析內(nèi)容需一個(gè)發(fā)展過(guò)程，需我們不懈的努力。     參考文獻(xiàn) 申洪.論定量病理學(xué).國(guó)外醫(yī)學(xué)生理病理科學(xué)與臨床分冊(cè)，1994; 4：201 Wingo PA, Tong T, Bolden S. Cancer statistics. Cnacer J Clin,1995,

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45、因、發(fā)病機(jī)理、發(fā)生         本篇論文是由3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請(qǐng)不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請(qǐng)聯(lián)系我們。Borkje B,Flow cytometry of biopsy specimens from uncerative colitis, colorectal adenomas and carci nomas. Scand J Gastro,1984;25:905 Hammarberg C, Sl

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