實(shí)驗(yàn)九甲醛滴定法測(cè)定氨基酸

1、實(shí)驗(yàn)九 甲醛滴定法測(cè)定氨基酸一、目的 掌握甲醛滴定法測(cè)定氨基酸含量的原理 和操作要點(diǎn)。二、原理 氨基酸是兩性電解質(zhì)，在水溶液中有如下 平衡：H3N+ R COO H2N R COO +H+-NH3是弱酸，完全解離時(shí)pH為1112或 更高，若用堿滴定-NH3所釋放的H+來(lái)測(cè)量 氨基酸， 一般指示劑變色域小于 10，很難準(zhǔn) 確指示終點(diǎn)。常溫下，甲醛能迅速與氨基酸的氨基結(jié) 合，生成羥甲基化合物，使上述平衡右移， 促使-NH 3釋放H +，使溶液的酸度增加，滴 定終點(diǎn)移至酚酞的變色域內(nèi) (pH9.0 左右 )。 因此，可用酚酞作指示劑，用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉 溶液滴定。R-CH(COO )-NH 3 R-CH

2、(COO)-NH 2+H + NaOH 中和R-CH(COO )-NH 2 HCHO R-CH(COO)-NHCH 2OH HCHO R-CH(COO )-N(CH 2OH)2 如樣品為一種已知的氨基酸， 從甲醛滴 定的結(jié)果可算出氨基氮的含量 ( 脯氨酸與甲 醛作用生成不穩(wěn)定的化合物，使滴定 mL 數(shù) 偏低。酪氨酸的滴定 mL 數(shù)偏高)。如樣品是 多種氨基酸的混合物，如蛋白水解液，則滴 定結(jié)果不能作為氨基酸的定量依據(jù)。 但此法 簡(jiǎn)便快速，常用來(lái)測(cè)定蛋白質(zhì)的水解程度。 隨水解程度的增加滴定值也增加， 滴定值不 再增加時(shí)，表示水解作用已完全。三、器材藥25 mL 錐形瓶；3 mL 微量滴定管； 吸

3、管； 0.1 mol L 標(biāo)準(zhǔn)甘氨酸溶液 300 mL 準(zhǔn)確稱取 750 mg 甘氨酸，溶解后定容至 100 mL；0.1 m01L 標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液 500 mL ； (標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液應(yīng)在使用前標(biāo)定， 并在 密閉瓶中保存。不可使用隔日貯在微量滴定 管中的剩余氫氧化鈉。 )酚酞指示劑 20 mL 0.5酚酞的 50乙 醇溶液中性甲醛溶液 400mL 在50 mL 3637%分析純甲醛溶液中加入 1 mL 0.1 %酚酞 乙醇水溶液，用0.1 mol / L的氫氧化鈉溶液 滴定到微紅，貯于密閉的玻璃瓶中。此試劑 在臨用前配制。如已放置一段時(shí)間，則使用 前需重新中和。四、操作1.取3個(gè)25 mL

4、的錐形瓶，編號(hào)。向 第1、2號(hào)瓶?jī)?nèi)各加入 2mL0.1 mo1 / L的標(biāo) 準(zhǔn)甘氨酸溶液和5 mL水，混勻。向3號(hào)瓶 內(nèi)加入7mL水。然后向3個(gè)瓶中各加入5 滴酚酞指示劑，混勻后各加2 mL甲醛溶液， 再混勻，分別用0.1 mo1/ L標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉 溶液滴定至溶液顯微紅色。重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)2次，記錄每次每瓶消耗 標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液的 mL數(shù)。取平均值，計(jì) 算甘氨酸氨基氮的回收率。甘氨酸氨基氮回收率 =實(shí)入理得量X 100公式中實(shí)際測(cè)得量為滴定第 1和2號(hào)瓶 耗用的標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液 mL數(shù)的平均值與 3號(hào)瓶耗用的標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液 mL數(shù)之差 乘以標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉的摩爾濃度，再乘以14.008。2mL乘以標(biāo)準(zhǔn)甘氨酸的摩爾濃度再 乘14.008。即為加入理論量的 mg數(shù)。2.取未知濃度的甘氨酸溶液 2 mL,依 上述方法進(jìn)行測(cè)定，平行做幾份，取平均值。 計(jì)算每mL甘氨酸溶液中含有氨基氮的 mg 數(shù)。氨基氮(mg/mL)= (A B) mol；NaOH 體008式中：A為滴定待測(cè)液耗用標(biāo)準(zhǔn)氫氧化 鈉溶液的平均mL數(shù)。B為滴定對(duì)照液(3號(hào)瓶)耗用標(biāo)準(zhǔn)氫氧 化鈉溶液的平均 mL數(shù)。mol/LNaOH為標(biāo)準(zhǔn) 氫氧化鈉溶液的真實(shí)摩爾濃度。