血管內(nèi)皮生長因子和抑癌基因P33ING1與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系(1)

1、    血管內(nèi)皮生長因子和抑癌基因P33ING1與胃癌生物學(xué)行為的關(guān)系(1)    】 目的： 研究血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）和抑癌基因P33ING1蛋白表達(dá)與胃癌臨床特征之間的關(guān)系. 方法： 采用免疫組化法檢測102例胃癌患者手術(shù)切除的癌組織和癌周正常組織中VEGF 和P33ING1表達(dá)水平. 結(jié)果： VEGF在正常組織中呈高表達(dá)，在腫瘤組織中呈低表達(dá)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=68.0, P<0.01）；P33ING1在正常組織

2、中呈高表達(dá)，在腫瘤組織中呈低表達(dá)，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=40.3, P<0.01）. VEGF蛋白表達(dá)水平與胃癌漿膜浸潤、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、5 a生存率有關(guān)(P<0.05)，P33ING1蛋白表達(dá)水平與胃癌腫瘤部位、漿膜浸潤、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、5 a生存率有關(guān)(P<0.05). 結(jié)論: VEGF與P33ING1的表達(dá)和胃癌生物學(xué)行為有關(guān)，同時(shí)進(jìn)行VEGF與P33ING1免疫組化法檢測對胃癌患者病情判斷和預(yù)后評(píng)價(jià)有一定的臨床意義.【關(guān)鍵詞】 血管內(nèi)皮生長因子類；P33ING1；胃腫瘤；免疫組織化學(xué)0引言胃癌是我國人群中常見的消化道惡性腫瘤之一，其死亡率高居惡

3、性腫瘤死亡率前幾位，然而有關(guān)胃癌發(fā)生發(fā)展確切的分子機(jī)制仍不十分清楚，其中血管生長因子及抑癌基因的影響倍受關(guān)注. 血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF )是目前發(fā)現(xiàn)最重的血管生長因子，它與腫瘤患者預(yù)后是近幾年的研究熱點(diǎn)，P33ING1是新近克隆出來的一種抑癌基因，在人類許多腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)存在P33ING1表達(dá)降低，并參與部分腫瘤的演進(jìn)過程. 我們采用免疫組化方法檢測VEGF和P33ING1蛋白在胃癌中的表達(dá)，探討兩者與胃癌生物學(xué)行為和預(yù)后的關(guān)系.1材料和方法1.1材料收集廣東醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院199701/200212病理科歸檔的病歷資料

4、完整的102例胃癌組織標(biāo)本，按全國胃癌協(xié)作組病理規(guī)范進(jìn)行病理診斷和分級(jí)，在研究中，將腫瘤細(xì)分成兩個(gè)組織學(xué)亞型:分化程度較好包括乳頭狀腺癌和管狀腺癌，分化程度較差包括低分化腺癌、粘液細(xì)胞癌和印戒細(xì)胞癌，所有患者術(shù)前均未行化療或放療. 同時(shí)另取癌旁非腫瘤的正常組織石蠟標(biāo)本為對照. 抗VEGF鼠源單克隆一抗購自福州邁新試劑公司；抗P33ING1鼠源單克隆一抗購自美國抗體診斷試劑公司，為雜交瘤培養(yǎng)上清，不稀釋；Envision免疫組織化學(xué)試劑盒購于丹麥Dako公司.1.2方法1.2.1常規(guī)病理學(xué)檢查所有標(biāo)本均經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為40 g/L甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋切片,HE染色供病理觀察. 腫瘤組織學(xué)分級(jí)參照國

5、際胃癌組織學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn).1.2.2免疫組化檢測石蠟包埋組織以4 m厚度連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟至水，切片浸于50mmol/L(PH80)乙二胺四乙酸溶液中，微波抗原修復(fù)10 min，冷卻至室溫,充分水洗，PBS浸洗，滴加正常山羊血清封閉液，室溫20 min；甩去多余液體，不洗，加入VEGF單抗或P33ING1單抗4過夜；PBS洗；滴加SP 9000通用型生物素標(biāo)記二抗，37，40 min；DAB顯色30 s，蘇木素復(fù)染，系列乙醇脫水、透明、中性樹膠封固. DAB顯色液配制：取DAB 5 mg溶于100 mL 0.05 mol/L TrisHCL(pH 7.6)中，加入300 mL/L過氧化氫10 L，

6、攪拌混勻后過濾(用前新鮮配制)；對照設(shè)置：正常小鼠血清代替一抗作替代對照，PBS作空白對照.1.2.3陽性結(jié)果的判定和圖像分析對于VEGF，在光鏡下有棕黃色顆粒反應(yīng)出現(xiàn)在細(xì)胞膜、細(xì)胞漿中均為陽性反應(yīng)細(xì)胞，高倍鏡下陽性細(xì)胞數(shù)占視野10%以下為陰性(-)；高倍鏡下陽性細(xì)胞數(shù)占視野10%以上為有意義，計(jì)為陽性. 10%30%為( )，30%50%為()，>50%為()，( )()均表示為陽性( ). 對于P33ING1，在光鏡下有棕黃色顆粒反應(yīng)出現(xiàn)在細(xì)胞漿中為陽性反應(yīng)細(xì)胞，高倍鏡下陽性細(xì)胞數(shù)占視野25%以下為陰性(-)；高倍鏡下陽性細(xì)胞數(shù)占視野25%以上為有意義，計(jì)有陽性. 25%50%為(

7、)，50%75%為()，>75%為()，( )()均表示為陽性( ). 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用簡明統(tǒng)計(jì)分析軟件. 各組間差異用2檢驗(yàn),取=0.05檢驗(yàn)水準(zhǔn).2結(jié)果2.1VEGF和P33ING1蛋白在胃癌組織與癌旁正常組織中的表達(dá)情況VEGF蛋白在胃癌組織中的陽性表達(dá)率為50.0%（51/102），在癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率為0，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=68.0, P<0.01）；P33ING1蛋白在胃癌組織中的陽性表達(dá)率為53.9%（55/102），在癌旁正常組織中的陽性表達(dá)率為93.1%（95/102），兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=40.3, P<0.01）.

8、    2.2VEGF蛋白在胃癌組織中的表達(dá)與臨床病理因素之間關(guān)系（表1）結(jié)果表明VEGF蛋白表達(dá)水平與胃癌漿膜浸潤、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P            【關(guān)鍵詞】血管內(nèi)皮生長因子類；P33ING1；胃腫瘤；免疫組織化學(xué)Relationshipof vascular endothelial growth fac         本篇論文是由

9、3COME文檔頻道的網(wǎng)友為您在網(wǎng)絡(luò)上收集整理餅投稿至本站的，論文版權(quán)屬原作者，請不用于商業(yè)用途或者抄襲，僅供參考學(xué)習(xí)之用，否者后果自負(fù)，如果此文侵犯您的合法權(quán)益，請聯(lián)系我們。表1VEGF蛋白表達(dá)水平與胃癌臨床病理因素的關(guān)系（略）2.3P33ING1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)與臨床病理因素之間關(guān)系結(jié)果表明P33ING1蛋白表達(dá)水平與胃癌腫瘤部位、漿膜浸潤、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05，表2).2.4VEGF和P33ING1蛋白表達(dá)與胃癌患者預(yù)后的關(guān)系102例胃癌患者中有隨訪資料的93例，5 a生存率：期為82.7%，期為51.8%，期為13.7%，期為1.3%. VEGF表達(dá)陰性的

10、患者5 a生存率明顯高于VEGF表達(dá)陽性的患者，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（2=19.4, P<0.01），前者為65.6%，后者為37.6%.表2P33ING1蛋白表達(dá)水平與胃癌臨床病理因素的關(guān)系（略）3討論實(shí)體瘤的生長離不開新生血管,腫瘤不僅通過新生血管獲取癌組織生長所必需的氧和營養(yǎng)物質(zhì),并通過血管浸潤周圍臟器發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移. 血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）是Ferrara等1從牛垂體濾泡細(xì)胞培養(yǎng)液中分離出的一種高度特異性促血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂的生長因子，是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)烈的血管通透性因子，比組胺作用強(qiáng)50000倍，是

11、Mr(3445)×103的高度糖基化堿性蛋白，由Mr(1722)×103的同源雙聚體構(gòu)成；VEGF是一種高度特異的血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂素，其主生物學(xué)功能2： 刺激血管生成； 促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增生和遷移； 增加血管尤其是微小血管的滲透性，使血漿大分子外滲沉積在血管外基質(zhì)中，為腫瘤細(xì)胞的生長和新生毛細(xì)血管網(wǎng)的建立提供營養(yǎng)； 促進(jìn)某些蛋白水解酶的作用使基質(zhì)降解. 以上作用均有助于腫瘤的血管形成、浸潤與轉(zhuǎn)移. 多數(shù)實(shí)體瘤均過度表達(dá)VEGF,在某些腫瘤中已將其作為一種新的腫瘤標(biāo)志物，與其他實(shí)體腫瘤一樣, 胃癌的發(fā)生、發(fā)展也與腫瘤血管生成有關(guān). Saito等3研究提示VEGF表達(dá)陽性的胃

12、癌患者的5 a生存率為33.0%，而VEGF表達(dá)陰性的胃癌患者的5 a生存率為67.6%，且經(jīng)多因素分析提示VEGF為一獨(dú)立的預(yù)后因素.本組通過Envision免疫組織化學(xué)法測定結(jié)果表明VEGF在胃癌的腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于正常組織，且在腫瘤組織中VEGF蛋白表達(dá)強(qiáng)度與漿膜浸潤、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、5 a生存率等呈相關(guān)性，提示VEGF可作為考量腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移能力、反映胃癌生物學(xué)行為的一個(gè)重指標(biāo).Garkavtesev等4采用cDNA消減雜交法（subtractive hybridization）建立了1種從富含所需序列的cDNA文庫中構(gòu)建較簡便GSEs(genetic suppressor

13、 elements) 文庫的方法，并結(jié)合體內(nèi)選擇技術(shù)（in vivo selection assay），成功克隆出一個(gè)新基因. 用該基因cDNA片段反向插入表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染小鼠永生化乳腺上皮細(xì)胞后，接種于裸鼠皮下可以成瘤；體外軟瓊脂集落形成試驗(yàn)，集落數(shù)至少是對照組的50倍. 所有這些結(jié)果都提示，這個(gè)基因在正常情況下對細(xì)胞的生長具有抑制作用；用反義mRNA可以阻斷其作用，進(jìn)細(xì)胞的生長和惡性轉(zhuǎn)化，因而命名為inhibitor of growth(ING)，并且由于這個(gè)基因可能是該家族的第一個(gè)成員，故而稱之為ING1.ING1基因定位于13q3334，其編碼的蛋白質(zhì)分子量為33 ku,故命名為P33I

14、NG1,在人類各種正常組織細(xì)胞內(nèi)均有表達(dá)5-7. P33ING1蛋白質(zhì)的高表達(dá)可抑制細(xì)胞生長增殖,使細(xì)胞停滯于G0/G1期,并有促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用8. 而P33ING1蛋白質(zhì)表達(dá)下調(diào),則可促進(jìn)細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化,導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生. Tokunaga等9分別從蛋白和mRNA轉(zhuǎn)錄水平檢測24例乳腺癌組織中的P33ING1 mRNA含量，相對于正常組織有17例表達(dá)下降（78.8%），原位雜交結(jié)果顯示，P33ING1 mRNA在進(jìn)展期乳腺癌比早期癌及癌旁組織少；祝峙等10用免疫組化法檢測57例肝癌及癌周邊正常肝組織中P33ING1蛋白,證實(shí)在肝癌組織中P33ING1白表達(dá)明顯低于正常肝組織；Oki等11研究

15、發(fā)現(xiàn)12株胃癌細(xì)胞僅1例存在P33ING1突變，15/20的胃癌組織卻表現(xiàn)為P33ING1 mRNA顯著降低，結(jié)果說明P33ING1在胃腸道腫瘤形成中其抑癌基因的作用6.我們結(jié)果表明,P33ING1在胃癌的腫瘤組織中的表達(dá)強(qiáng)度明顯減低，且在腫瘤組織中P33ING1蛋白表達(dá)強(qiáng)度與腫瘤部位、漿膜浸潤、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、5 a生存率等呈相關(guān)性. VEGF和P33ING1蛋白表達(dá)與胃癌的侵襲性生長特性有關(guān).【參考文獻(xiàn)】1 Ferrara N, Henzel WJ. Pituitary follicular cell secrete a novel heparinbinding growth fa

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