基因工程試題8

1、基因工程試題一、選擇題 (每題 1分,共 15分)1、下列有關(guān)基因的敘述 ,錯誤的就是【 A 】A 蛋白質(zhì)就是基因表達的唯一產(chǎn)物B 基因就是 DNA 鏈上具有編碼功能的片段C 基因也可以就是 RNAD 基因突變不一定導(dǎo)致其表達產(chǎn)物改變結(jié)構(gòu)2、基因工程的單元操作順序就是【 B 】A 增,轉(zhuǎn),檢 ,切,接C 接,轉(zhuǎn),增 ,檢,切3、生物工程的上游技術(shù)就是【A 基因工程及分離工程C 基因工程及酶工程B 切,接,轉(zhuǎn) ,增,檢D 切,接,增 ,轉(zhuǎn),檢A 】B 基因工程及發(fā)酵工程D 基因工程及細胞工程4、下列各組專業(yè)術(shù)語中 , 含義最為接近的就是【 C 】A 終止子與終止密碼子B 基因表達與基因轉(zhuǎn)譯C D

2、NA 退火與 DNA 復(fù)性D 重組子與轉(zhuǎn)化子5、根據(jù)酶切活性對鹽濃度的要求 ,限制性核酸內(nèi)切酶可分成【 B 】A 2 大類 B 3 大類 C 4 大類 D 5 大類6、T 4 -DNA 連接酶就是通過形成磷酸二酯鍵將兩段 DNA 片段連接在一起 , 其底物的關(guān)鍵基團就是【 D 】A 2' -OH 與 5' -PB 2' -OH 與 3' -PC 3' -OH 與 2' -PD 5' -OH 與 3' -P7、下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述 ,錯誤的就是【 A 】A連接反應(yīng)的最佳溫度為 37 CB 連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于 10%C

3、 連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mMD 連接酶通常應(yīng)過量 2-5 倍8、原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化方法不大適用于 【 A 】A 大腸桿菌 B 枯草桿菌 C 酵母菌 D 鏈霉菌9、下列各常用載體的裝載量排列順序 ,正確的就是 【 A 】A Cosmid > 九DNA > Plasmid C Plasmid >X-DNA > CosmidB 入-DNA > Cosmid > PlasmidD Cosmid > Plasmid >2-DNA10、若某質(zhì)粒帶有 lacZ 標記基因 ,那么與之相匹配的篩選方法就是在篩選培 養(yǎng)基中加入 【 D 】A半乳糖 B

4、異丙基巰基-禺半乳糖苷(IPTG )C蔗糖D 5-溴-4-氯-3-吲哚基-B-D-半乳糖苷(X-gal )11、 下列各組用于外源基因表達的受體細胞及其特點的對應(yīng)關(guān)系中,錯誤的就 是【C】A 大腸桿菌繁殖迅速C 鏈霉菌遺傳穩(wěn)定12、分子雜交的化學(xué)原理就是形成B 枯草桿菌分泌機制健全D 酵母菌表達產(chǎn)物具有真核性D 】13、某一重組 DNA （ 6、2 kb ） 的載體部分有兩個 SmaI 酶切位點。用 SmaI 酶切后凝膠電泳上出現(xiàn)四條長度不同的帶子 ,其長度總與與已知數(shù)據(jù)吻合 ,該重組分子插入片段上的 SmaI 酶切位點共有 C DA 4 個 B 3 個 14、下列設(shè)計的探針中 ,最佳的就是A

5、 ACATTAAATTATTC ACCTTGATAAGGT 15、cDNA 法獲得目的基因的優(yōu)點就是【A 成功率高 B 不含內(nèi)含子 C【D2 個D 至少 2 個BDA 】操作簡便 D 表達產(chǎn)物可以分泌GGGCACGGACTTGACCATC二、名詞解釋 （每題 2 分,共 20 分）1、Southern blotting : Southern 印跡 :Southern 發(fā)明的一種影印轉(zhuǎn)移物質(zhì)的方法。2、Cosmid vector: 黏粒載體 :含有 cos 位點的質(zhì)粒載體。3、cDNA library:cDNA 文庫 :就是指某生物某一發(fā)育時期所轉(zhuǎn)錄形成的 cDNA 片 段與某種載體連接而成的克

6、隆的集合。4、RACE: 就是一種通過 PCR 進行 cDNA 末端快速克隆的技術(shù) ,就是以 mRNA 為模板反轉(zhuǎn) 錄成 cDNA 第一鏈后用 PCR 技術(shù)擴增出某個特異位點到 3,或 5,端之間未知序列的方法。5、Probe:探針:指被標記物質(zhì)標記了的核酸。6 RT-PCR:逆轉(zhuǎn)錄PCR:先用逆轉(zhuǎn)錄酶作用于 mRNA,以寡聚dT為引物合成 cDNA 第一鏈,然后用已知一對引物 ,擴增嵌合分子 ,這種方法稱為逆轉(zhuǎn)錄 PCR。7、Insert inactivation: 插入失活 ,基因工程載體上的某些選擇標記基因常常含某種或某幾種限制性內(nèi)切酶的單一酶切位點 ,在該位點用相應(yīng)的限制性內(nèi)切酶處理

7、,并 將外源 DNA 片段插入該位點 ,則插入的外源 DNA 片段將破壞原有基因的讀碼框 , 往往導(dǎo)致原有的選擇標記基因無法翻譯表達,或即使翻譯表達 ,形成的也就是喪失了原有生物活性的蛋白質(zhì) ,這一現(xiàn)象稱為插入失活。 。8、S-D Sequence:S-D 序列:在大腸桿菌 mRNA 的核糖體結(jié)合位點上 ,含有一個轉(zhuǎn) 譯起始密碼子及同16S核糖體RNA 3末端堿基互補的序列，該序列最初由Shine、 Dalgarno 發(fā)現(xiàn),故后來命名為 ShineDalgarno 序列 ,簡稱 S-D 序列。9、Shuttle plasmid vector: 穿梭質(zhì)粒載體 :指一類由人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制

8、 起點的選擇標記 ,因而可在兩種不同宿主細胞中存活與復(fù)制的質(zhì)粒載體。10、MCS: 指載體上人工合成的含有緊密排列的多種限制核酸內(nèi)切酶的酶切位點 的 DNA 片段。三、簡答題 （每題 5分,共 25分）1、理想質(zhì)粒載體的必備條件？答: 具有較小的分子質(zhì)量與較高的拷貝數(shù)。具有若干限制性核酸內(nèi)切酶的單一酶切位點。 具有兩種以上的選擇標記基因。缺失mob基因。插入外源基因的重組質(zhì)粒較易導(dǎo)入宿主細胞并自制與表達2、核酸操作的基本技術(shù)有哪些？答:核酸提取與純化 核酸的檢測與保存 核酸的凝膠電泳 核酸分子雜交3、影響核酸保存的關(guān)鍵因素就是什么？怎樣保存核酸制品？答 :關(guān)鍵因素 : 保存液的酸堿度 保存溫度

9、保存方法 : 一般保存可用濃鹽液，NaCL-檸檬酸緩沖液或0、1mol/L醋酸緩沖液。對 DNA來說，在pH411的范圍分子的堿基較穩(wěn)定,超出此范圍DNA易變性或降解, 低溫、稀堿下保存DNA及低溫下保存RNA均較穩(wěn)定。固態(tài)核酸通常在0C以上 低溫干燥保存即可。4、合成 cDNA 第二鏈的主要策略有哪些？答:自身引導(dǎo)合成法 置換合成法 PCR合成法 快速擴增 cDNA 末端法 雙鏈 cDNA 末端的處理 cDNA與載體的連接5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)就是什么？答:就是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)與技術(shù)上的三大發(fā)明。理論上的三大發(fā)現(xiàn) : 證實了 DNA 就是遺傳物質(zhì) 揭示了 DNA 分子的

10、雙螺旋結(jié)構(gòu)模型與半保留復(fù)制機理 遺傳密碼的破譯與遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明 : 限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與 DNA 切割 DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與DNA片段的連接 基因工程載體的研究與應(yīng)用四、問答題 （每題 10分,共 40分）1 PCR 技術(shù)主要應(yīng)用在哪些領(lǐng)域？答:核酸基礎(chǔ)研究 序列分析 檢測基因表達 從 cDNA 文庫中放大特定序列 研究已知片段鄰近基因或未知 DNA 片段 進化分析 醫(yī)學(xué)應(yīng)用 分析生物學(xué)證據(jù) 性別控制 轉(zhuǎn)基因檢測。2 細菌的限制與修飾系統(tǒng)有什么意義？大腸桿菌 K12 限制與修飾系 統(tǒng)的遺傳分析揭示的 4 種表型就是什么？答: 宿主控制的限制與修飾現(xiàn)象廣泛存在于原核細菌

11、中 , 它有兩方面的作用 , 一 就是保護自身DNA不受限制；二就是破壞入侵外源DNA使之降解。細菌正就是利 用限制與修飾系統(tǒng)來區(qū)分自身 DNA與外源DNA的。外源DNA可以通過多種方式進 入某一生物體內(nèi) , 但就是它必須被修飾成受體細胞的限制內(nèi)切酶無法辯認的結(jié)構(gòu) 形式,才能在寄主細胞內(nèi)得以生存 ,否則會很快被破壞。 因此,在基因工程中 ,常采 用缺少限制作用的菌株作為受體 , 以保證基因操作的順利完成。大腸桿菌K12限制與修飾系統(tǒng)的遺傳分析揭示，它有以下4種表型：rk+m k+ 野生型rk-m k+ 限制缺陷型rk-mk- 限制與修飾缺陷型rk+m k- 修飾缺陷型3試述5 RACE技術(shù)原理

12、與方法。答:PCR用于擴增代表mRNA專錄物某一單位點與其3'或5'末端之間區(qū)域的部 分cDNA稱為快速擴增cDNA末端技術(shù)（RACE）b如果已知mRNA勺一片段鏈內(nèi)短序 列, 據(jù)此或設(shè)計基因特異引物 , 用原先存在的 poly（A） 尾（3'末端）或附加的同聚 尾（5'末端）互補的序列做末端引物 ,就可以獲得從未知末端直到已知區(qū)域的部 分cDNA序列。為獲得5'末端部分cDNA克隆需用基因特異引物,產(chǎn)物第一鏈產(chǎn) 物，可用末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶及 dATP加poly（A）尾。通過QT引物與反轉(zhuǎn)錄使 用的上游基因特異引物生成第二鏈 cDNA。4 大腸桿菌作為

13、基因工程受體菌具有哪些特點？真核基因在大腸桿 菌中表達存在哪些障礙？答:特點:大腸桿菌培養(yǎng)方便、 操作簡單、成本低廉,基礎(chǔ)生物學(xué)、分子遺傳學(xué)等方 面的背景知識清楚 , 對其基因表達調(diào)控的分子機理也比較了解 , 而且歷經(jīng)二十年 的基因工程實踐 ,大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實驗體系 ,有多種適 用的寄主菌株與載體系列 ,大腸桿菌易于進行工業(yè)化批量生產(chǎn)。存在的障礙 :第一,在大腸桿菌的 mRNA 的核糖體結(jié)合位點上 ,含有一個起始密碼子及 16S核糖體RNA 3 '末端堿基互補序列，即S-D序列,而真核上缺泛這個序列。第二, 許多真核基因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過翻譯后的加工修飾 , 如

14、正確的折 疊與組裝 , 而細菌中通常并沒有這樣的修飾機制 , 從而可能導(dǎo)致真核基因在大腸 桿菌中的翻譯產(chǎn)物無法產(chǎn)生有活性的蛋白。第三、外源真核基因所表達的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細菌的蛋白酶識別 , 并被當做“異 已分子”降解掉。8、S-D 序列 :在大腸桿菌 mRNA 的核糖體結(jié)合位點上 ,含有一個轉(zhuǎn)譯起始 密碼子及同 16S 核糖體 RNA 3,末端堿基互補的序列 ,該序列最初由 Shine 、 Dalgarno 發(fā)現(xiàn),故后來命名為 ShineDalgarno 序列 ,簡稱 S-D 序列。1、什么就是包涵體？重組蛋白在胞內(nèi)表達時 ,常常以不溶性蛋白聚集成的晶狀物形式存在 ,這種晶 狀體即包涵體

15、。包涵體的形成就是外源蛋白的高效表達時的普遍現(xiàn)象 ,這就是由 于肽鏈折疊過程中部分折疊的中間態(tài)發(fā)生了錯誤聚合 ,而不就是形成成熟的天然 態(tài)或完全解鏈的蛋白。2、什么就是a -互補篩選？質(zhì)粒載體具有B -半乳糖苷酶基因（lacZ）,當外源DNA插入到它的lac Z,可造 成表達后的B -半乳糖苷酶失活，利用這一點就可以通過大腸桿菌轉(zhuǎn)化子菌落在 添加有 X-gal-IPTG 培養(yǎng)基中的顏色變化鑒別出重組子與非重組子。有些大腸桿 菌上帶有 lac Z 基因的部分編碼序列 , 質(zhì)粒載體中含有別一部分編碼序列 , 當質(zhì)粒 轉(zhuǎn)入載體后，可形成具有酶活性的蛋白質(zhì)。這種lac Z基因上缺失了一部分編碼序 列的

16、突變體與帶有這一部分編碼序列的突變體之間實現(xiàn)互補的現(xiàn)象叫a互補。3、限制性核酸內(nèi)切酶的活性受哪些因素影響？酶的純度。DNA樣品的純度。（3）DNA的甲基化程度。酶切反應(yīng)的溫度與時間。DNA分子的構(gòu)型。限制性核酸內(nèi)切酶的反應(yīng)緩沖液。5、基因工程誕生的理論基礎(chǔ)就是什么？ 就是現(xiàn)代分子生物學(xué)領(lǐng)域理論上的三大發(fā)現(xiàn)與技術(shù)上的三大發(fā)明。 理論上的三大發(fā)現(xiàn) : 證實了 DNA 就是遺傳物質(zhì) 揭示了 DNA 分子的雙螺旋結(jié)構(gòu)模型與半保留復(fù)制機理 遺傳密碼的破譯與遺傳信息傳遞方式的確定技術(shù)上的三大發(fā)明 : 限制核酸內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)與 DNA 切割 DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)與DNA片段的連接 基因工程載體的研究與應(yīng)用四、問

17、答題 （每題 10分,共 40分）1 如何有效地提高外源基因的表達效率？提高啟動子強度 縮短啟動子同克隆基因間距離 高效的翻譯起 始序列 高效的轉(zhuǎn)錄終止區(qū) 提高質(zhì)粒拷貝數(shù)及穩(wěn)定性 用以下方法提 高翻譯水平：調(diào)整SD序列與AUG間的距離用點突變的方法改變某些堿基增加mRNA勺穩(wěn)定性的減輕細胞的代謝負荷：誘導(dǎo)表達表達載體的誘導(dǎo)復(fù)制 提高表達蛋白的穩(wěn)定性 ,防止其降解 : 克隆一段原核序列 , 表達融合蛋白采 用某種突變菌株表達分泌蛋白質(zhì)2 試述載體構(gòu)建一般方法A 目的基因分析 (1)ORF 分析(2)酶切位點分析B 載體選擇與分析 (1)多克隆位點分析 (2)抗性標記分析 (3) 啟動子與其她篩選

18、 標記分析C 連接體系與連接時間確定4 大腸桿菌作為基因工程受體菌的優(yōu)缺點就是什么？優(yōu)點： 大腸桿菌培養(yǎng)方便、 操作簡單、成本低廉 , 基礎(chǔ)生物學(xué)、 分子遺傳學(xué)等 方面的背景知識清楚 , 對其基因表達調(diào)控的分子機理也比較了解 , 而且歷經(jīng)二十 年的基因工程實踐 , 大腸桿菌已發(fā)展成為一種安全的基因工程實驗體系 , 有多種 適用的寄主菌株與載體系列 , 大腸桿菌易于進行工業(yè)化批量生產(chǎn)。缺點：在通常情況下，細菌的RNA聚合酶不能識別真核的啟動子；許多真核基 因的蛋白質(zhì)產(chǎn)物需要經(jīng)過翻譯后的加工修飾 , 如正確的折疊與組裝 , 而細菌中通 常并沒有這樣的修飾機制 , 從而可能導(dǎo)致真核基因在大腸桿菌中的

19、翻譯產(chǎn)物無法 產(chǎn)生有活性的蛋白 ； 外源真核基因所表達的蛋白質(zhì)分子往往能夠被細菌的蛋白酶 識別, 并被當做“異已分子”降解掉。二、選擇題 (每題 1分,共 15分)1( d ) 限制性核酸內(nèi)切酶就是由細菌產(chǎn)生的A 修復(fù)自身的遺傳缺陷C 強化自身的核酸代謝2( a )生物工程的下游技術(shù)就是A 基因工程及分離工程C 基因工程及蛋白質(zhì)工程3 ( a )基因工程操作常用的酶就是 聚合酶A、I + II B、 I + III + IV, 其生理意義就是B 促進自身的基因重組D 提高自身的防御能力B 蛋白質(zhì)工程及發(fā)酵工程D 分離工程 及蛋白質(zhì)工程：(I 內(nèi)切酶 II 連接酶 III 末端轉(zhuǎn)移酶 IVC、

20、II + III + IV D、 I +II + IV + III4 ( d )限制性內(nèi)切核酸酶的星活性就是指A 在非常規(guī)條件下 ,識別與切割序列也不發(fā)生變化的活性。B 活性大大提高C 切割速度大大加快D 識別序列與原來的完全不同5( d )下列五個 DNA 片段中含有回文結(jié)構(gòu)的就是A、GAAACTGCTTTGACB、 GAAACTGGAAACTGC、 GAAACTGGTCAAAGD、 GAAACTGCAGTTTC6 ( c )關(guān)于 cDNA 的不正確的提法就是A 同 mRNA 互補的單鏈 RNAB同mRNA互補的含有內(nèi)含子的 DNAC以mRNA為模板合成的雙鏈 RNAD 以上都不正確7 ( a )下列有關(guān)連接反應(yīng)的敘述 ,錯誤的就是A、連接反應(yīng)的最佳溫度為 37 CB、連接反應(yīng)緩沖體系的甘油濃度應(yīng)低于 10%C、連接反應(yīng)緩沖體系的 ATP 濃度不能高于 1mMD、連接酶通常應(yīng)過量 2-5 倍8 ( c ) T 4 -DNA 連接酶就是通過形成磷酸二酯鍵將兩段