第七章植物離體繁殖

1、第七章第七章 植物離體繁殖植物離體繁殖第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 第二節(jié)第二節(jié) 植物快繁程序植物快繁程序第三節(jié)第三節(jié) 影響植物快繁的因素影響植物快繁的因素第四節(jié)第四節(jié) 植物快繁的商業(yè)化應(yīng)用植物快繁的商業(yè)化應(yīng)用 植物離體繁殖（植物離體繁殖（propagation in vitro）又稱植又稱植物快繁或微繁，物快繁或微繁，是指利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)外植是指利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)對(duì)外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其短期內(nèi)獲得遺傳性一致的大體進(jìn)行離體培養(yǎng)，使其短期內(nèi)獲得遺傳性一致的大量再生植株的方法。量再生植株的方法。一、概念和特點(diǎn)一、概念和特點(diǎn)（一）概念（一）概念2第一節(jié)第一節(jié) 概述概述 1、繁殖效率高。繁殖效率高

2、。2、培養(yǎng)條件可控性強(qiáng)。培養(yǎng)條件可控性強(qiáng)。3、占用空間小。占用空間小。4、管理方便，利于自動(dòng)化控制。管理方便，利于自動(dòng)化控制。5、便于種質(zhì)保存和交換。便于種質(zhì)保存和交換。（二）特點(diǎn)（二）特點(diǎn)3二、植物快繁器官形成方式二、植物快繁器官形成方式 根據(jù)器官形成方式的不同，將植物器官的根據(jù)器官形成方式的不同，將植物器官的再生分為五種類型，即再生分為五種類型，即短枝發(fā)生型、叢生短枝發(fā)生型、叢生芽發(fā)生型、不定芽發(fā)生型、胚狀體發(fā)生型芽發(fā)生型、不定芽發(fā)生型、胚狀體發(fā)生型和原球莖發(fā)生型和原球莖發(fā)生型。 （一）短枝發(fā)生型（一）短枝發(fā)生型 短枝發(fā)生型短枝發(fā)生型是指外植體攜帶的帶葉莖段，在適是指外植體攜帶的帶葉莖段，

3、在適宜的培養(yǎng)環(huán)境中萌發(fā)，形成完整植株，再將其剪成宜的培養(yǎng)環(huán)境中萌發(fā)，形成完整植株，再將其剪成帶葉莖段，繼代再成苗的繁殖方法。帶葉莖段，繼代再成苗的繁殖方法。5（二）叢生芽發(fā)生型（二）叢生芽發(fā)生型 叢生芽發(fā)生型叢生芽發(fā)生型是指使外植體攜帶的頂芽或是指使外植體攜帶的頂芽或腋芽在適宜培養(yǎng)環(huán)境中不斷發(fā)生腋芽而呈叢生腋芽在適宜培養(yǎng)環(huán)境中不斷發(fā)生腋芽而呈叢生狀芽，將單個(gè)芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)生根狀芽，將單個(gè)芽轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)生根成苗的繁殖方法。成苗的繁殖方法。 叢生芽發(fā)生型是大多數(shù)植物快繁的主要途叢生芽發(fā)生型是大多數(shù)植物快繁的主要途徑，它不經(jīng)過(guò)愈傷組織，能使無(wú)性系后代保持徑，它不經(jīng)過(guò)愈傷組織，能使

4、無(wú)性系后代保持原品種的特性，在生產(chǎn)中普遍應(yīng)用。原品種的特性，在生產(chǎn)中普遍應(yīng)用。67（三）不定芽發(fā)生型（三）不定芽發(fā)生型 不定芽發(fā)生型不定芽發(fā)生型是指外植體在適宜培養(yǎng)是指外植體在適宜培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件下，經(jīng)過(guò)基和培養(yǎng)條件下，經(jīng)過(guò)脫分化脫分化形成愈傷組形成愈傷組織，然后經(jīng)過(guò)織，然后經(jīng)過(guò)再分化再分化誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生不誘導(dǎo)愈傷組織產(chǎn)生不定芽，或外植體不形成愈傷組織而直接從定芽，或外植體不形成愈傷組織而直接從其表面形成不定芽，將芽苗轉(zhuǎn)移到生根培其表面形成不定芽，將芽苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)獲得完整植株的繁殖方法。養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)獲得完整植株的繁殖方法。8 不定芽發(fā)生型也是許多植物快繁的主要方不定芽發(fā)生型

5、也是許多植物快繁的主要方式。由于不定芽形成的數(shù)量與腋芽數(shù)目無(wú)式。由于不定芽形成的數(shù)量與腋芽數(shù)目無(wú)關(guān)，其關(guān)，其增殖率增殖率高于叢生芽發(fā)生型。高于叢生芽發(fā)生型。 但經(jīng)過(guò)愈傷組織途徑或者但經(jīng)過(guò)愈傷組織途徑或者多次繼代培養(yǎng)多次繼代培養(yǎng)后后，容易導(dǎo)致細(xì)胞分裂不正常，容易導(dǎo)致細(xì)胞分裂不正常，增加變異增加變異植植株發(fā)生頻率。如香蕉繼代次數(shù)控制在株發(fā)生頻率。如香蕉繼代次數(shù)控制在8 8代之代之內(nèi)，再生植株的變異率則可控制在內(nèi)，再生植株的變異率則可控制在3%3%左右左右。9 表現(xiàn)表現(xiàn)嵌合性狀嵌合性狀的植株通過(guò)不定芽方式再生的植株通過(guò)不定芽方式再生時(shí)，往往導(dǎo)致時(shí)，往往導(dǎo)致嵌合性狀發(fā)生分離嵌合性狀發(fā)生分離而失去原而失

6、去原有價(jià)值。如觀賞植物色彩鑲嵌的葉子、帶有價(jià)值。如觀賞植物色彩鑲嵌的葉子、帶金邊或者銀邊等性狀的植物，通過(guò)不定芽金邊或者銀邊等性狀的植物，通過(guò)不定芽途徑再生植株時(shí)，可能導(dǎo)致這些觀賞性狀途徑再生植株時(shí)，可能導(dǎo)致這些觀賞性狀消失。這類植株快繁時(shí)，應(yīng)通過(guò)消失。這類植株快繁時(shí)，應(yīng)通過(guò)叢生芽途叢生芽途徑徑進(jìn)行。進(jìn)行。10ABEC花燭葉片離體培養(yǎng)及植株再生花燭葉片離體培養(yǎng)及植株再生11（四）胚狀體發(fā)生型（四）胚狀體發(fā)生型 胚狀體發(fā)生型胚狀體發(fā)生型是指外植體在適宜培養(yǎng)環(huán)境中，經(jīng)是指外植體在適宜培養(yǎng)環(huán)境中，經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生體細(xì)胞胚的繁殖方法誘導(dǎo)產(chǎn)生體細(xì)胞胚的繁殖方法 ，從而形成小植株的繁，從而形成小植株的繁殖方法。

7、殖方法。 分為分為間接途徑間接途徑（經(jīng)愈傷途徑）和（經(jīng)愈傷途徑）和直接途徑直接途徑兩種。兩種。 胚狀體發(fā)生途徑具有成苗數(shù)量大、速度快、結(jié)構(gòu)胚狀體發(fā)生途徑具有成苗數(shù)量大、速度快、結(jié)構(gòu)完整的完整的特點(diǎn)特點(diǎn)，因而是外植體，因而是外植體增殖系數(shù)最大的途徑增殖系數(shù)最大的途徑。12 體細(xì)胞胚體細(xì)胞胚再生的小植株與再生的小植株與叢生芽或不定芽叢生芽或不定芽再生的小植株相比，具有兩個(gè)顯著差異：再生的小植株相比，具有兩個(gè)顯著差異： 胚狀體多起源于單細(xì)胞。胚狀體多起源于單細(xì)胞。 生理隔離。生理隔離。13菊花花瓣體細(xì)胞胚胎發(fā)生及體胚發(fā)育過(guò)程的掃描電鏡觀察菊花花瓣體細(xì)胞胚胎發(fā)生及體胚發(fā)育過(guò)程的掃描電鏡觀察14（五）原

8、球莖發(fā)生型（五）原球莖發(fā)生型原球莖發(fā)生型原球莖發(fā)生型是蘭科植物的一種快繁方式，是蘭科植物的一種快繁方式，它是指莖尖或腋芽外植體經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生原球莖它是指莖尖或腋芽外植體經(jīng)培養(yǎng)產(chǎn)生原球莖（即扁球狀體、基部生假根）的繁殖類型。（即扁球狀體、基部生假根）的繁殖類型。15 原球莖是蘭花種子發(fā)芽過(guò)程中的一種形態(tài)原球莖是蘭花種子發(fā)芽過(guò)程中的一種形態(tài)學(xué)構(gòu)造。種子萌發(fā)初期并不出現(xiàn)胚根，只學(xué)構(gòu)造。種子萌發(fā)初期并不出現(xiàn)胚根，只是胚逐漸膨大，以后種皮的一端破裂，腫是胚逐漸膨大，以后種皮的一端破裂，腫脹的胚呈小圓錐狀，故稱為脹的胚呈小圓錐狀，故稱為原球莖原球莖。 原球莖是短縮的、呈珠粒狀的、由胚性細(xì)原球莖是短縮的、呈珠粒

9、狀的、由胚性細(xì)胞組成的、類似嫩莖的器官，它可以增殖胞組成的、類似嫩莖的器官，它可以增殖，形成，形成原球莖叢原球莖叢。由。由莖尖或腋芽莖尖或腋芽外植體誘外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生原球莖，切割原球莖進(jìn)行增殖，或?qū)Мa(chǎn)生原球莖，切割原球莖進(jìn)行增殖，或停止切割使其繼續(xù)培養(yǎng)而轉(zhuǎn)綠，產(chǎn)生毛狀停止切割使其繼續(xù)培養(yǎng)而轉(zhuǎn)綠，產(chǎn)生毛狀假根，葉原基發(fā)育成幼葉，將其轉(zhuǎn)移培養(yǎng)假根，葉原基發(fā)育成幼葉，將其轉(zhuǎn)移培養(yǎng)生根，形成完整植株。生根，形成完整植株。1617植物快繁的程序包括四個(gè)階段：植物快繁的程序包括四個(gè)階段：無(wú)菌（或初代）培養(yǎng)的建立無(wú)菌（或初代）培養(yǎng)的建立繁殖體增殖繁殖體增殖芽苗生根芽苗生根小植株的移栽馴化小植株的移栽馴化18第

10、二節(jié)第二節(jié) 植物快繁程序植物快繁程序一、無(wú)菌培養(yǎng)的建立一、無(wú)菌培養(yǎng)的建立 這個(gè)階段的任務(wù)是這個(gè)階段的任務(wù)是母株和外植體的選取、母株和外植體的選取、無(wú)菌培養(yǎng)物的獲得及外植體的啟動(dòng)生長(zhǎng)無(wú)菌培養(yǎng)物的獲得及外植體的啟動(dòng)生長(zhǎng)，以利，以利于離體材料在適宜培養(yǎng)環(huán)境中以某種器官發(fā)生于離體材料在適宜培養(yǎng)環(huán)境中以某種器官發(fā)生類型進(jìn)行增殖。類型進(jìn)行增殖。19211.培養(yǎng)材料的增殖方式培養(yǎng)材料的增殖方式 五種方式。五種方式。(取決于取決于培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的和和材料自身的可材料自身的可能性能性。) 一般大多數(shù)植物采用一般大多數(shù)植物采用無(wú)菌短枝或腋芽萌發(fā)或誘無(wú)菌短枝或腋芽萌發(fā)或誘導(dǎo)不定芽導(dǎo)不定芽產(chǎn)生，再以產(chǎn)生，再以芽繁殖芽

11、芽繁殖芽的方式進(jìn)行增殖；蘭的方式進(jìn)行增殖；蘭科植物、百合等則采用科植物、百合等則采用原球莖增殖途徑原球莖增殖途徑，以保障繁，以保障繁殖材料的遺傳穩(wěn)定性。殖材料的遺傳穩(wěn)定性。22二、增殖培養(yǎng)二、增殖培養(yǎng)2.增殖培養(yǎng)基增殖培養(yǎng)基 增殖率增殖率是植株快速繁殖特別是商業(yè)性繁殖的重要是植株快速繁殖特別是商業(yè)性繁殖的重要指標(biāo)。外植體在每次繼代培養(yǎng)中，應(yīng)能產(chǎn)生最大數(shù)指標(biāo)。外植體在每次繼代培養(yǎng)中，應(yīng)能產(chǎn)生最大數(shù)量的有效繁殖體。量的有效繁殖體。 基本培養(yǎng)基一般與啟動(dòng)生長(zhǎng)培養(yǎng)基相同，而細(xì)胞基本培養(yǎng)基一般與啟動(dòng)生長(zhǎng)培養(yǎng)基相同，而細(xì)胞分裂素和礦物元素的濃度水平則高于啟動(dòng)生長(zhǎng)培養(yǎng)分裂素和礦物元素的濃度水平則高于啟動(dòng)生長(zhǎng)

12、培養(yǎng)基。一般基。一般MS+BA 13 mg/ml+NAA0.11 mg/ml。233.增殖體的大小和切割方法增殖體的大小和切割方法 一般攜帶一個(gè)莖節(jié)，但第一次增殖的莖一般攜帶一個(gè)莖節(jié)，但第一次增殖的莖段一般都有段一般都有24個(gè)莖節(jié)。個(gè)莖節(jié)。 莖段可以垂直插入培養(yǎng)基中，但插入的莖段可以垂直插入培養(yǎng)基中，但插入的深度不應(yīng)淹沒(méi)莖節(jié)；或水平放入培養(yǎng)基表深度不應(yīng)淹沒(méi)莖節(jié)；或水平放入培養(yǎng)基表面，以刺激側(cè)芽的萌動(dòng)。面，以刺激側(cè)芽的萌動(dòng)。24青花菜增殖青花菜增殖枇杷增殖枇杷增殖2627三、芽苗生根三、芽苗生根 將單個(gè)芽苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基或適宜環(huán)境中誘導(dǎo)生根。將單個(gè)芽苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基或適宜環(huán)境中誘導(dǎo)生根。1.

13、離體生根（試管內(nèi)生根）離體生根（試管內(nèi)生根） 降低無(wú)機(jī)鹽濃度（降低無(wú)機(jī)鹽濃度（1/2MS或者或者1/4MS），減少或不需），減少或不需要細(xì)胞分裂素，增加生長(zhǎng)素的濃度。要細(xì)胞分裂素，增加生長(zhǎng)素的濃度。 對(duì)有些植物，如果芽苗在含有生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)對(duì)有些植物，如果芽苗在含有生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)12d，再轉(zhuǎn)移至無(wú)生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中，或芽苗在含生長(zhǎng)，再轉(zhuǎn)移至無(wú)生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中，或芽苗在含生長(zhǎng)素的生根溶液中浸蘸后直接插入無(wú)生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中，濕素的生根溶液中浸蘸后直接插入無(wú)生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中，濕度度85%以上，溫度以上，溫度25，弱光或黑暗條件。，弱光或黑暗條件。28292.活體生根（試管外生根）活體生根（

14、試管外生根） 芽苗先在生長(zhǎng)素中快速浸蘸或在含有芽苗先在生長(zhǎng)素中快速浸蘸或在含有相對(duì)高濃度生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)相對(duì)高濃度生長(zhǎng)素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)510天，天，然后在溫室中栽入培養(yǎng)基質(zhì)，經(jīng)常噴霧，然后在溫室中栽入培養(yǎng)基質(zhì)，經(jīng)常噴霧，給予高濕度環(huán)境，幾天后便可自行生根。給予高濕度環(huán)境，幾天后便可自行生根。 30四、移栽馴化四、移栽馴化 試管小植株的移栽馴化是試管苗從異試管小植株的移栽馴化是試管苗從異養(yǎng)到自養(yǎng)的轉(zhuǎn)變，有一個(gè)逐漸適應(yīng)過(guò)程。養(yǎng)到自養(yǎng)的轉(zhuǎn)變，有一個(gè)逐漸適應(yīng)過(guò)程。移栽前需對(duì)試管植株進(jìn)行高光強(qiáng)煉苗，使移栽前需對(duì)試管植株進(jìn)行高光強(qiáng)煉苗，使植株生長(zhǎng)粗壯，并打開(kāi)瓶口，降低濕度，植株生長(zhǎng)粗壯，并打開(kāi)瓶口，降

15、低濕度，使其逐漸適應(yīng)外界環(huán)境。使其逐漸適應(yīng)外界環(huán)境。 1.移栽移栽 2.馴化管理馴化管理31.移栽移栽 首先應(yīng)洗去小植株根部附著的培養(yǎng)基，避首先應(yīng)洗去小植株根部附著的培養(yǎng)基，避免微生物的繁殖污染，造成小苗死亡。免微生物的繁殖污染，造成小苗死亡。 然后將小植株栽人人工配制的混合培養(yǎng)基然后將小植株栽人人工配制的混合培養(yǎng)基質(zhì)中，基質(zhì)用保濕又透氣的材料，如蛭石質(zhì)中，基質(zhì)用保濕又透氣的材料，如蛭石、珍珠巖、粗沙、泥炭等按比例混合，以、珍珠巖、粗沙、泥炭等按比例混合，以利小植株生長(zhǎng)。幾天后小植株可形成新的利小植株生長(zhǎng)。幾天后小植株可形成新的功能根系。功能根系。322.馴化管理馴化管理 移栽的試管小植株和活

16、體生根的小植株，移栽的試管小植株和活體生根的小植株，其其濕度的控制濕度的控制十分重要。因試管苗在高濕十分重要。因試管苗在高濕（90100的相對(duì)濕度）環(huán)境中生長(zhǎng)，的相對(duì)濕度）環(huán)境中生長(zhǎng)，莖葉表面防止水分散失的角質(zhì)層等幾乎全莖葉表面防止水分散失的角質(zhì)層等幾乎全無(wú)，根系又不發(fā)達(dá)，移栽后難以保證水分無(wú)，根系又不發(fā)達(dá)，移栽后難以保證水分平衡，即使根系周圍有足夠的水分也不行平衡，即使根系周圍有足夠的水分也不行。所以，應(yīng)采用加覆塑料薄膜、經(jīng)常噴霧。所以，應(yīng)采用加覆塑料薄膜、經(jīng)常噴霧的方法，提高小植株周圍的空氣濕度，減的方法，提高小植株周圍的空氣濕度，減少葉面蒸騰。同時(shí)，逐漸降低空氣相對(duì)濕少葉面蒸騰。同時(shí)，逐

17、漸降低空氣相對(duì)濕度，使其適應(yīng)自然環(huán)境條件。度，使其適應(yīng)自然環(huán)境條件。33 移栽小植株還應(yīng)注意光、溫控制。移栽小植株還應(yīng)注意光、溫控制。 移栽初期移栽初期光照強(qiáng)度光照強(qiáng)度應(yīng)較弱，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間應(yīng)較弱，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間適應(yīng)后，增加光照強(qiáng)度（漫射），如適應(yīng)后，增加光照強(qiáng)度（漫射），如1 5004 000 lx，甚至，甚至10000 lx。 移栽小植株生長(zhǎng)所需的移栽小植株生長(zhǎng)所需的適宜溫度適宜溫度與植物種與植物種類有關(guān)，喜溫性植物以類有關(guān)，喜溫性植物以25左右為宜左右為宜，喜，喜涼性植物則以涼性植物則以1820為好。溫度過(guò)高導(dǎo)為好。溫度過(guò)高導(dǎo)致蒸騰作用加強(qiáng)，水分失衡，微生物滋生致蒸騰作用加強(qiáng)，水分失衡，微生

18、物滋生等；溫度過(guò)低則使幼苗生長(zhǎng)遲緩或不易存等；溫度過(guò)低則使幼苗生長(zhǎng)遲緩或不易存活。如使基質(zhì)溫度高于空氣溫度活。如使基質(zhì)溫度高于空氣溫度23，則有利于生根和促進(jìn)根系發(fā)育，提高存活則有利于生根和促進(jìn)根系發(fā)育，提高存活率。率。34 此外，在移栽小植株的馴化管理階段，還此外，在移栽小植株的馴化管理階段，還應(yīng)應(yīng)防止菌類滋生防止菌類滋生，適當(dāng)噴一定濃度的殺菌，適當(dāng)噴一定濃度的殺菌劑（殺菌靈）可有效保護(hù)移栽小植株的正劑（殺菌靈）可有效保護(hù)移栽小植株的正常生長(zhǎng)。常生長(zhǎng)。3536第三節(jié)第三節(jié) 影響植物快繁的因素影響植物快繁的因素植物快繁的目的是以盡可能高的效率生產(chǎn)植物快繁的目的是以盡可能高的效率生產(chǎn)試管苗，獲得

19、最大的經(jīng)濟(jì)效益。因此，在試管苗，獲得最大的經(jīng)濟(jì)效益。因此，在快繁時(shí)應(yīng)使各種影響因素處于最適合快繁快繁時(shí)應(yīng)使各種影響因素處于最適合快繁的狀態(tài)。的狀態(tài)。37一、外植體一、外植體 外植體的來(lái)源外植體的來(lái)源：最適的為莖尖、帶芽莖段，也可：最適的為莖尖、帶芽莖段，也可以利用葉片、子葉、根段、花器官組織等。以利用葉片、子葉、根段、花器官組織等。 外植體生理年齡外植體生理年齡：幼嫩組織分化能力更強(qiáng)。：幼嫩組織分化能力更強(qiáng)。 外植體大小外植體大?。翰荒芴?，否則影響成活率。除非：不能太小，否則影響成活率。除非是用于脫毒苗的生產(chǎn)。是用于脫毒苗的生產(chǎn)。38二、培養(yǎng)基二、培養(yǎng)基 基本培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基：MS培養(yǎng)基應(yīng)用

20、最為廣泛。對(duì)于某些培養(yǎng)基應(yīng)用最為廣泛。對(duì)于某些植物及生根階段，以植物及生根階段，以1/4或或1/2MS較好。蔗糖和葡較好。蔗糖和葡萄糖濃度為萄糖濃度為2-4%。生根時(shí)稍低。生根時(shí)稍低。 植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑：主要以細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的：主要以細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的配合使用，調(diào)節(jié)外植體的生長(zhǎng)和分化。另外配合使用，調(diào)節(jié)外植體的生長(zhǎng)和分化。另外ABA、GA、CCC等也具有不同的作用。等也具有不同的作用。 培養(yǎng)基的物理特性培養(yǎng)基的物理特性：以固體培養(yǎng)較為普遍，也有：以固體培養(yǎng)較為普遍，也有采用液體培養(yǎng)，如蘭花原球莖的增殖。采用液體培養(yǎng)，如蘭花原球莖的增殖。39三、培養(yǎng)條件三、培養(yǎng)條件 光照：光照

21、：1000-3000lx，階段，階段可增強(qiáng)?？稍鰪?qiáng)。14-16h/d。 溫度：溫度：與植物的原產(chǎn)地相應(yīng)。一般為與植物的原產(chǎn)地相應(yīng)。一般為252。有時(shí)可。有時(shí)可進(jìn)行高溫或低溫的預(yù)處理。進(jìn)行高溫或低溫的預(yù)處理。 濕度：濕度：要求環(huán)境相對(duì)濕度不能太低，一般在要求環(huán)境相對(duì)濕度不能太低，一般在70-80%。 氣體：氣體：要求培養(yǎng)基及培養(yǎng)瓶通氣良好，同時(shí)及時(shí)轉(zhuǎn)接。要求培養(yǎng)基及培養(yǎng)瓶通氣良好，同時(shí)及時(shí)轉(zhuǎn)接。液體培養(yǎng)要求振蕩培養(yǎng)，促進(jìn)氧氣交換。液體培養(yǎng)要求振蕩培養(yǎng)，促進(jìn)氧氣交換。40四、繼代培養(yǎng)四、繼代培養(yǎng) 主要指對(duì)階段主要指對(duì)階段增殖形成的芽叢、胚狀體或原增殖形成的芽叢、胚狀體或原球莖等進(jìn)行轉(zhuǎn)接繼代。繼代間

22、隔時(shí)間一般為球莖等進(jìn)行轉(zhuǎn)接繼代。繼代間隔時(shí)間一般為2020天左右。天左右。41五、移栽五、移栽 根系結(jié)構(gòu)不完善的試管苗移栽后不易存活。要求根系結(jié)構(gòu)不完善的試管苗移栽后不易存活。要求根根系結(jié)構(gòu)完整，具根毛，再生根的吸收能力強(qiáng)系結(jié)構(gòu)完整，具根毛，再生根的吸收能力強(qiáng)。 葉表皮組織不發(fā)達(dá)的試管苗也不易移栽存活。移栽葉表皮組織不發(fā)達(dá)的試管苗也不易移栽存活。移栽要求打開(kāi)瓶口馴化要求打開(kāi)瓶口馴化2-3天；或在瓶?jī)?nèi)添加一些生長(zhǎng)天；或在瓶?jī)?nèi)添加一些生長(zhǎng)延緩劑如延緩劑如PP333、CCC等培育壯苗。等培育壯苗。42第四節(jié)植物快繁的商業(yè)化應(yīng)用第四節(jié)植物快繁的商業(yè)化應(yīng)用 植物快繁最重要的用途是進(jìn)行植物的商業(yè)化植物快繁

23、最重要的用途是進(jìn)行植物的商業(yè)化生產(chǎn)。生產(chǎn)。世界上快繁商業(yè)化開(kāi)始于上個(gè)世紀(jì)美國(guó)的世界上快繁商業(yè)化開(kāi)始于上個(gè)世紀(jì)美國(guó)的蘭花工業(yè)蘭花工業(yè)。我國(guó)的香蕉快繁苗占全國(guó)組培苗的。我國(guó)的香蕉快繁苗占全國(guó)組培苗的2/3。其次有甘蔗、蘭花、馬鈴薯、甘薯等。其次有甘蔗、蘭花、馬鈴薯、甘薯等。43園藝植物種苗工廠化生產(chǎn)園藝植物種苗工廠化生產(chǎn)44 一、商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模及工藝流程一、商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模及工藝流程1.試管苗生產(chǎn)規(guī)模的確定試管苗生產(chǎn)規(guī)模的確定 商業(yè)化生產(chǎn)商業(yè)化生產(chǎn)規(guī)模的確定應(yīng)以規(guī)模的確定應(yīng)以市場(chǎng)需求市場(chǎng)需求為標(biāo)準(zhǔn)。為標(biāo)準(zhǔn)。 試管苗生產(chǎn)試管苗生產(chǎn)規(guī)模的確定是以規(guī)模的確定是以無(wú)菌工作臺(tái)和培養(yǎng)無(wú)菌工作臺(tái)和培養(yǎng)架架的數(shù)量來(lái)

24、衡量的。年產(chǎn)的數(shù)量來(lái)衡量的。年產(chǎn)100萬(wàn)株，接種室萬(wàn)株，接種室4050m2，超凈工作臺(tái)超凈工作臺(tái)810臺(tái)，培養(yǎng)室臺(tái)，培養(yǎng)室100-120m2 。452.商業(yè)化實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)商業(yè)化實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì) 根據(jù)已確定的根據(jù)已確定的生產(chǎn)規(guī)模生產(chǎn)規(guī)模和組織培養(yǎng)的和組織培養(yǎng)的生產(chǎn)程生產(chǎn)程序序，試管苗生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡量布局合理，使生，試管苗生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)盡量布局合理，使生產(chǎn)程序能連續(xù)、有效地進(jìn)行。產(chǎn)程序能連續(xù)、有效地進(jìn)行。（1 1）環(huán)境要求遠(yuǎn)離污染源）環(huán)境要求遠(yuǎn)離污染源 （2 2）水電、交通）水電、交通 （3 3）工藝流程工藝流程 （4 4）節(jié)能（）節(jié)能（5 5）無(wú)菌）無(wú)菌463.商業(yè)化生產(chǎn)的配套設(shè)施商業(yè)化生產(chǎn)的配套

25、設(shè)施 相應(yīng)配套設(shè)施包括相應(yīng)配套設(shè)施包括過(guò)渡培養(yǎng)室和露地?zé)捗鐖?chǎng)過(guò)渡培養(yǎng)室和露地?zé)捗鐖?chǎng)。474.商業(yè)化生產(chǎn)的工藝流程商業(yè)化生產(chǎn)的工藝流程 試管苗商業(yè)化生產(chǎn)的工藝流程是以其快繁程試管苗商業(yè)化生產(chǎn)的工藝流程是以其快繁程序?yàn)榛A(chǔ)建立起來(lái)的，如最成熟的草莓脫毒苗生序?yàn)榛A(chǔ)建立起來(lái)的，如最成熟的草莓脫毒苗生產(chǎn)流程和葡萄試管快繁流程。通過(guò)莖尖脫毒建立產(chǎn)流程和葡萄試管快繁流程。通過(guò)莖尖脫毒建立起來(lái)的草莓商業(yè)化試管苗生產(chǎn)，除必須配備的培起來(lái)的草莓商業(yè)化試管苗生產(chǎn)，除必須配備的培養(yǎng)和馴化等條件外，還應(yīng)增加養(yǎng)和馴化等條件外，還應(yīng)增加病毒鑒定室病毒鑒定室。48二、商業(yè)化生產(chǎn)及效益分析二、商業(yè)化生產(chǎn)及效益分析1.試管苗增

26、殖率的估算試管苗增殖率的估算 試管苗的增殖率多數(shù)以芽或苗為單位，但原球莖或胚試管苗的增殖率多數(shù)以芽或苗為單位，但原球莖或胚狀體多以瓶為單位。狀體多以瓶為單位。（1）增殖率的理論值）增殖率的理論值是指接種一個(gè)芽或一塊增殖培養(yǎng)物，經(jīng)是指接種一個(gè)芽或一塊增殖培養(yǎng)物，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間培養(yǎng)后得到的芽或苗數(shù)。過(guò)一段時(shí)間培養(yǎng)后得到的芽或苗數(shù)。Y=mXn （Y年繁殖數(shù)，年繁殖數(shù)，m無(wú)菌母株苗數(shù)，無(wú)菌母株苗數(shù)，X每個(gè)培每個(gè)培養(yǎng)周期增殖的倍數(shù)，養(yǎng)周期增殖的倍數(shù)，n全年可增殖的周期數(shù)）全年可增殖的周期數(shù)） （2）增殖率的實(shí)際值）增殖率的實(shí)際值是指接種一個(gè)芽或一個(gè)苗，經(jīng)過(guò)實(shí)際繁是指接種一個(gè)芽或一個(gè)苗，經(jīng)過(guò)實(shí)際繁殖周期，得

27、到的實(shí)際芽或苗數(shù)。殖周期，得到的實(shí)際芽或苗數(shù)。 實(shí)際增殖數(shù)與理論增殖數(shù)出現(xiàn)很大差異的實(shí)際增殖數(shù)與理論增殖數(shù)出現(xiàn)很大差異的原因原因是：是：污染淘汰；污染淘汰；出售、轉(zhuǎn)讓和實(shí)驗(yàn)所用；出售、轉(zhuǎn)讓和實(shí)驗(yàn)所用；移栽死亡；移栽死亡；培養(yǎng)容器等設(shè)備的限制。培養(yǎng)容器等設(shè)備的限制。492.生產(chǎn)計(jì)劃的制定和實(shí)施生產(chǎn)計(jì)劃的制定和實(shí)施（1）生產(chǎn)計(jì)劃的制定）生產(chǎn)計(jì)劃的制定 商業(yè)化生產(chǎn)計(jì)劃制定的依據(jù)是市場(chǎng)對(duì)試管商業(yè)化生產(chǎn)計(jì)劃制定的依據(jù)是市場(chǎng)對(duì)試管苗的種類、品種及數(shù)量的需求及趨勢(shì)，實(shí)驗(yàn)室苗的種類、品種及數(shù)量的需求及趨勢(shì)，實(shí)驗(yàn)室具備的生產(chǎn)條件和規(guī)模。首先應(yīng)提出全年銷售具備的生產(chǎn)條件和規(guī)模。首先應(yīng)提出全年銷售目標(biāo)，再根據(jù)實(shí)際生

28、產(chǎn)中各個(gè)環(huán)節(jié)的消耗，制目標(biāo)，再根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)中各個(gè)環(huán)節(jié)的消耗，制定出相應(yīng)的全年生產(chǎn)計(jì)劃，一般生產(chǎn)數(shù)量應(yīng)比定出相應(yīng)的全年生產(chǎn)計(jì)劃，一般生產(chǎn)數(shù)量應(yīng)比計(jì)劃銷售的數(shù)量增加計(jì)劃銷售的數(shù)量增加2030。 50（2）生產(chǎn)計(jì)劃的實(shí)施）生產(chǎn)計(jì)劃的實(shí)施 生產(chǎn)計(jì)劃實(shí)施的步驟為：生產(chǎn)計(jì)劃實(shí)施的步驟為：準(zhǔn)備繁殖材料。準(zhǔn)備繁殖材料。合格繁殖材料的快速增殖。合格繁殖材料的快速增殖。 存瓶增殖總瓶數(shù)存瓶增殖總瓶數(shù)月計(jì)劃生產(chǎn)苗數(shù)每個(gè)增殖瓶月月計(jì)劃生產(chǎn)苗數(shù)每個(gè)增殖瓶月可產(chǎn)苗數(shù)可產(chǎn)苗數(shù) 月計(jì)劃生產(chǎn)苗數(shù)月計(jì)劃生產(chǎn)苗數(shù)每個(gè)操作人員每天可接苗數(shù)每個(gè)操作人員每天可接苗數(shù)月月工作日工作日人員數(shù)人員數(shù) 控制試管苗生產(chǎn)中的增殖總瓶數(shù)，便于在一個(gè)控

29、制試管苗生產(chǎn)中的增殖總瓶數(shù)，便于在一個(gè)周期內(nèi)全部更新一次培養(yǎng)基，使增殖材料處于不同周期內(nèi)全部更新一次培養(yǎng)基，使增殖材料處于不同生長(zhǎng)階段的最佳狀態(tài)，提高其質(zhì)量。生長(zhǎng)階段的最佳狀態(tài)，提高其質(zhì)量。513.產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)控產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)控 如接種狀況、污染率、生長(zhǎng)情況、如接種狀況、污染率、生長(zhǎng)情況、生根苗數(shù)量、出瓶苗質(zhì)量等，并建立試生根苗數(shù)量、出瓶苗質(zhì)量等，并建立試管苗出瓶標(biāo)準(zhǔn)。管苗出瓶標(biāo)準(zhǔn)。524.商業(yè)化生產(chǎn)效益分析商業(yè)化生產(chǎn)效益分析53 試管苗商業(yè)化的試管苗商業(yè)化的生產(chǎn)成本應(yīng)包括生產(chǎn)成本應(yīng)包括：人工費(fèi)用。人工費(fèi)用。生產(chǎn)物資費(fèi)用。生產(chǎn)物資費(fèi)用。設(shè)備折舊費(fèi)用。設(shè)備折舊費(fèi)用。水電費(fèi)用。水電費(fèi)用。其他費(fèi)用。其他費(fèi)用。54三、降低商業(yè)化生產(chǎn)成本的措施三、降低商業(yè)化生產(chǎn)成本的措施55四、離體快繁商業(yè)性生產(chǎn)的范圍及應(yīng)用四、離體快繁商業(yè)性生產(chǎn)的范圍及應(yīng)用56蘭科植物生產(chǎn)蘭科植物生產(chǎn)57無(wú)菌苗快速繁殖無(wú)菌苗快速繁殖58無(wú)菌苗馴化無(wú)菌苗馴化5960五、商業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)注意的問(wèn)題五、商業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)注意的問(wèn)題1.污染污染 612.遺傳穩(wěn)定性遺傳穩(wěn)定性（1 1）影響遺傳穩(wěn)定性的因素）影響遺傳穩(wěn)